【推荐1】请回答下列与基因工程有关的问题：
（1）将目的基因插入到T-DNA中用到的工具酶有____________________，在利用农杆菌转化法时，需将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA中，原因是_________________________。
（2）在乙肝疫苗的生产中，应该选择________________（填抗原或抗体）基因作为目的基因，该目的基因利用____________________技术进行扩增，该技术需要用到____________________酶。在基因表达载体中标记基因的作用是________________________________。
（3）用基因工程生产乙肝疫苗时，若选用细菌为受体细胞，则不能得到引起免疫反应的基因表达产物，其原因是：______________。

【推荐2】研究者培育出了转K基因的植株。图1、图2分别表示在该培育过程中构建的含K基因的DNA片段和Ti质粒。回答下列问题：

(1)图中启动子的作用是____，组成T-DNA的基本单位是____。为使K基因定向连接到质粒中，应选用的限制酶组合为____，不选用EcoRⅠ或NotⅠ的原因是____。
(2)引物的作用是____。扩增含K基因的DNA片段时，需要在PCR仪中加入的引物是____。
(3)培育转K基因植株的过程中， K基因导入植物细胞的方法是____法；由图可知，在培养该转基因植物时，为得到含K基因的愈伤组织，培养基中须加入____进行筛选。

【推荐3】重组质粒pMM085常用来生产工程疫苗，但因含氯霉素抗性基因cat．有增加环境中抗药基因的风险。pKD46是一种热敏感型工具质粒，只能在低于37℃的温度条件下稳定存在，它携带的Red基因在阿拉伯糖的诱导下表达Red重组蛋白，通过体内同源重组进行靶向基因敲除，原理如图1所示。asd基因是编码细菌二氨基庚二酸（DAP）合成途径的关键酶，DAP是大肠杆菌细胞壁的主要成分，当asd基因缺失时，将导致菌株生长对DAP的依赖性，研究人员将质粒pMM085和pKD46导入asd缺失型大肠杆菌中，通过Red同源重组，将pMM085中的cat基因替换为asd基因，构建无抗性菌苗株，如图2所示。

(1)据图1分析，与传统转基因技术相比，Red体内同源重组具有的特点是__________________。
(2)无抗药性菌苗的构建过程中（图2），①中应先用钙离子处理，使asd基因缺陷型大肠杆菌处于感受态，然后将pMM085和pKD46转入大肠杆菌，经阿拉伯糖诱导后，电击导入asd基因，获得重组质粒。将②中获得的菌液采用______（方法）接种到LB培养基上，37℃培养得到单菌落。37℃培养的目的是____________（请答出两点）。
(3)挑取步骤③中获得的10个单菌落细胞进行PCR鉴定，得到电泳图谱（图3），电泳结果说明____________。科研人员在上述实验基础上重新提取③中质粒再转化宿主菌，经选择性培养基筛选后获得仅含重组质粒的单菌落，请简要写出筛选的思路：_______________________________。

【推荐1】构筑新冠病毒防线需要两种措施:一种是新冠病毒的检测,以阻断传播途径;另一种是新冠疫苗的研制,以增强人体免疫力。新冠病毒的S蛋白(刺突蛋白)是决定病毒入侵易感细胞的关键蛋白,可与宿主细胞的病毒受体结合。新冠病毒的检测:检测方法有核酸检测和免疫学检测。
(1)核酸检测是新冠病毒感染的确诊依据。目前采用RT—PCR技术(逆转录荧光PCR技术),其原理是:在PCR反应体系中加入引物的同时,加入与某条模板链互补的荧光探针,当Taq酶催化子链延伸至探针处会水解探针,使荧光监测系统接受到荧光信号,即每扩增一次,就有一个荧光分子生成(如下图)。PCR每个循环包括_______________3个阶段。从理论上推测,PCR扩增目的基因至第四轮循环产物中含有引物1的DNA片段所占的比例为______。中国疾控中心公布了针对新冠病毒核酸不同序列设计的引物,其中针对S蛋白基因的一段引物1为GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT,能否依据此序列设计出另一段引物2的序列?_______。
   
(2)免疫学检测是以S蛋白作为抗原制备单克隆抗体生产快速检测新冠病毒的试剂盒。具体步骤为:将减毒新冠病毒多次注射到小鼠体内,取其脾脏的_____细胞,与骨髓瘤细胞加入_______(天然成分)共同培养，再加入__________使其融合,用特定的_______培养基进行筛选，再将上述经筛选获得的杂交瘤细胞进行_________________，经多次筛选就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。为克服鼠源性单抗用于治疗时的异源性反应,科研人员通过人工改造鼠源性单抗获得了嵌合抗体。分析下图,你认为最符合临床要求的嵌合抗体是A～D中的_______。
   

【推荐2】我国的科研团队发现了可有效阻断新冠病毒感染的单克隆抗体，该单克隆抗体如注射进入人体，将抢先与新冠病毒的刺突蛋白（S蛋白）结合，使病毒无法感染人体细胞，从而被免疫系统清除。如下图表示制备单克隆抗体的流程图、据下图回答下列问题：
   
(1)图中①过程需要给小鼠注射的抗原是__________，从小鼠体内获得的已免疫的B淋巴细胞_________（填“能”或“不能”）分泌抗体。
(2)图中②过程进行动物细胞融合时，动物特有的方法是用__________诱导融合；进行筛选时，淘汰的细胞有___________和____________。最终筛选获得的杂交细胞的特点是_____________。③过程筛选出能产生特定抗体的细胞群，常利用的方法是___________。
(3)单克隆抗体的优点有___________。

【推荐3】EV71是引发手足口病的一种人肠道病毒。为制备抗EV71的单克隆抗体，科研人员用小鼠进行实验。
（1）将EV71灭活病毒、EV71外壳蛋白VP1和VP2作为______分别注射到3组小鼠体内，引发小鼠机体的_______免疫，产生相应的抗体。
（2）多次免疫后，分别取上述3组小鼠的血清和未免疫小鼠血清，测定抗体与抗原的结合强度，结果如图所示。

①EV71免疫的小鼠血清抗体_______（填“是”或“不是”）单一抗体，判断依据是___________。
②测定各组小鼠血清与非EV71蛋白结合强度，目的是排除___________________的影响。
③制备抗EV71单克隆抗体时，选用_______免疫的小鼠脾脏细胞效果最佳，依据是___________________________________________。
（3）取相应免疫组小鼠的脾脏，剪碎并用________酶处理得到小鼠脾脏细胞，用灭活的病毒诱导，与________细胞融合，筛选获得5个不同的杂交瘤细胞株。
（4）为进一步研究抗体的作用效果，科研人员培养上述杂交瘤细胞株，获得5种单克隆抗体，分别将它们与等量EV71混合，加入到5组RD细胞（EV71的宿主细胞）中，测定______________，以分析抗体的作用效果。