【推荐2】研究人员从南极发草中发现的一种能合成抗冻蛋白的抗冻基因(FglB基因)，为了使该基因在农业生产中有更好的应用，研究人员FglB基因导入酵母菌并进行了相关研究。回答下列问题：
(1)从南极发草细胞中提取mRNA，通过___________法获得cDNA然后采用PCR技术扩增。FglB基因的表达载体由FglB基因、启动子、___________和标记基因等组成。其中标记基因通常为抗生素抗性基因，抗生素抗性基因的作用是___________。
(2)下列不属于DNA连接酶底物的是___________。

(3)目的基因导入酵母细胞后，若要检测目的基因是否插入染色体中，需要从酵母细胞中提取_______进行DNA分子杂交，DNA分子杂交时应使用的探针是________。研究发现在PCR扩增FgIB基因的过程中，加入诱变剂可提高FglB基因的突变率，经过筛选，可获得能表达抗冻性更强的抗冻蛋白基因。与用诱变剂直接处理南极发草相比，上述育种技术获取抗冻性更强的抗冻蛋白基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_________(答出1点即可)。

【推荐3】降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人体内合成的降钙素活性很低，半衰期较短。某科研机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，将能人工合成降钙素的DNA与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。请分析回答:

(1)图1表示人工合成降钙素DNA的过程。从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA。从功能看 Klenow酶是一种___酶。
(2)若利用PCR技术对人工合成降钙素DNA进行扩增，在PCR反应体系中需加入模板序列、___种引物。设计引物时需要避免引物之间形成___，而造成引物自连。
(3)研究者利用4种限制酶切割目的基因和质粒，各限制酶的识别序列和切割位点如图2所示。研究者使用不同的限制酶切割目的基因能有效防止目的基因出现___。酶切后的产物连接时，目的基因上SalI切割产生的末端应与质粒上___切割产生的末端相连接。连接完成后，该连接点___(选填“能”或“不能”)被这两种限制酶中的某一种切割。
(4)大肠杆菌是理想的受体细胞，因为它具有___特点。重组质粒导入大肠杆菌前常用___处理大肠杆菌，使其处于感受态细胞。要进行重组质粒的鉴定和选择，大肠杆菌质粒还需要含有___。

【推荐1】H18杂交瘤细胞产生的抗人肝癌单克隆抗体（HAb18）对于人体肝癌的靶向治疗具有重要的意义，但H18杂交瘤细胞在培养过程中的凋亡现象制约着细胞的高密度培养以及生产能力的提高。通过基因工程可改造H18杂交瘤细胞的抗凋亡能力，相关研究步骤如下。请回答：
(1)请完善表格中的实验步骤。

实验步骤	具体操作
肝癌细胞的培养	将人肝癌细胞在培养液中培养一段时间后，用①____酶处理培养液，漂洗后调整细胞悬液浓度为1×107个·mL－1．
②____	向小鼠体内注射肝癌细胞悬液0.8mL，以后每隔2周免疫1次，共3次，最后一次免疫后3天，取脾脏制成细胞悬液备用。
细胞融合及筛选	将脾脏细胞悬液和③____细胞悬液进行融合，筛选出H18杂交瘤细胞。
改造H18杂交瘤细胞	利用PCR技术获得小鼠的④____基因
	使用⑤____酶构建基因表达载体，通过脂质体法导入H18杂交瘤细胞，再筛选出抗凋亡能力明显提高的H18杂交瘤细胞。

(2)向培养肝癌细胞的培养液中加入____，能为动物细胞生长增殖和保持动物细胞生物学性状提供不可缺少的物质，培养液中还需加入一定量抗生素的目的是____，培养时提供的二氧化碳气体的目的是____。
(3)在细胞融合及筛选步骤中，常用的生物诱导因素是____。在改造H18杂交瘤细胞时，通过脂质体法将基因表达载体导入H18杂交瘤细胞的原理是利用了____。
(4)与普通抗肝癌的化疗药物相比，用抗人肝癌单克隆抗体（HAb18）与相应抗癌药物结合制成的“生物导弹”治疗肝癌的主要优点是能____，减少对正常细胞的伤害，减少用药剂量。也可以使用____标记抗人肝癌单克隆抗体（HAb18），显示肝癌肿瘤的位置，诊断肝癌肿瘤病灶是否转移，以指导手术范围。

【推荐2】干扰素常用于治疗病毒感染引起的疾病，现在可以通过基因工程大量获得。请回答相关问题。
（1）已知干扰素的氨基酸序列，则获取目的基因的较简单方法是______________________。
（2）基因表达载体除含有干扰素基因外，还必须有____________、_________和 ___________等。
（3）如果受体细胞为受精卵，则此过程还涉及到动物细胞培养技术，动物细胞培养的条件包括_________、营养、______________、气体环境，提供气体中CO₂的主要作用是_____________________。
（4）转基因技术是否成功，需要对受体细胞进行分子水平的检测，首先是检测受体细胞__________上是否插入目的基因，这是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键，检测的方法是_______________。最后还要检测目的基因是否翻译成了相应蛋白质，利用的技术是______________________。

【推荐1】为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用________法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切点如下图所示。则用限制酶 ClaⅠ和______酶处理两个基因后，可得到______端与______端（填图中字母）相连的融合基因。
（2）将上述融合基因插入右上图所示Ti质粒的T－DNA中，构建_______并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含_________的固体平板上培养得到含融合基因的单菌落，再利用液体培养基振荡培养，可以得到用于转化的侵染液。
（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过________技术，可培育成转基因油菜植株。
（4）用________法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。

【推荐2】几丁质酶可以催化真菌细胞壁的重要成分——几丁质的水解，从而抑制真菌的生长繁殖，提高植物的抗真菌能力。通过基因工程将几丁质酶基因转入杨树体内，可增强其抵抗真菌的能力。回答下列问题：

(1)为了便于目的基因与Ti质粒的连接，在利用PCR技术扩增目的基因时，需要在引物的____端（填“5”或“3”）增加特定的限制酶切割位点。在两种引物上增加不同限制酶识别序列的主要目的是____（答出两点即可）。
(2)受体农杆菌细胞在导入重组Ti质粒前，需要先用Ca²⁺处理，其目的是____。形成的重组Ti质粒需要先导入农杆菌细胞，再侵染杨树的愈伤组织，理由是____。
(3)外植体（幼嫩的茎段）经过_____形成愈伤组织。在愈伤组织形成的过程中，导致外植体被污染的原因可能是____（答出一点即可）。
(4)目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性，首先需要通过分子水平的检测，其次，还需要进行____水平的鉴定。

【推荐3】红豆杉因其次生代谢产物紫杉醇的显著治癌效果而备受关注。为了获得紫杉醇，可以先用植物外植体获得愈伤组织，然后在生物反应器中悬浮培养。请回答下列问题：
(1)以该植物的幼茎、树皮、针叶作为外植体，在一定条件下进行组织培养，均能获得试管苗，其原理是___________。研究发现用幼嫩茎段比成年老枝更易产生愈伤组织，且时间早，诱导率高，原因是幼嫩茎段细胞分化程度较___________。
(2)可采用___________(部位)进行植物组织培养获得脱除病毒的红豆杉。与从红豆杉树皮中直接提取相比，通过茎段组培获得的愈伤细胞悬浮培养生产紫杉醇的优点是___________。
(3)二倍体愈伤组织细胞经___________处理，会产生染色体加倍的细胞。
(4)不同有机溶剂及其组合作为浸提溶剂对紫杉醇的得率的影响如下图所示。

从溶剂单独和混合提取效果的角度分析，可得出的结论有：单一溶剂作为提取紫杉醇的浸提溶剂时，___________的提取效果最佳；溶剂混合浸提时，___________作为浸提溶剂提取紫杉醇效果最好。

【推荐2】植物体细胞杂交技术可将不同种植物的优势集中在一个个体上，培育人们生产所需的优良杂种植株。如图1为利用某种耐酸植物甲（4N）和高产植物乙（2N），培育高产耐酸植物丙的过程。回答下列问题。
   
(1)①过程为酶解法去壁，该过程所需的酶是_____，进行该操作前需对甲、乙植物细胞进行_____处理，以防止杂菌污染。
(2)PEG诱导后，除了“甲'+乙'”，还存在_____。
(3)图1中过程②称为_____。
(4)在再分化阶段所用培养基中，含有植物激素X和植物激素Y。逐渐改变培养基中这两种植物激素的浓度比，未分化细胞群的变化情况如图所示。植物激素X的名称是_____。当植物激素X与植物激素Y的浓度比大于1时，_____。
   
2017年11月～12月，中科院神经科学研究所研究团队利用体细胞克隆技术克隆出了猕猴“中中”和“华华”，该成果标志着中国率先开启了以体细胞克隆猴作为实验动物模型的新时代。如图是体细胞克隆猴的技术流程，请据图回答下列问题：
   
(5)图2中选择猕猴胚胎期而非成年期的成纤维细胞进行培养，其原因是_____。刚放入培养瓶中的细胞沉降到瓶底部后首先会出现细胞贴壁现象。传代培养时，常利用_____酶消化处理，制成细胞悬液后转入新的培养瓶中。
(6)图2所示过程涉及的主要技术有_____。（答出两点即可）
以体细胞克隆猴作为实验动物模型的显著优势之一是同一批克隆猴的遗传背景相同，图中克隆猴的遗传物质主要来自猕猴胚胎成纤维细胞的细胞核。图2中步骤①是克隆猴的技术难点之一，需要将卵母细胞培养到MⅡ期后进行去核操作，而后用物理或化学方法激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育进程。
(7)体细胞克隆猴的另外一个技术难点是猴的体细胞克隆胚胎发育差。科学家发现，胚胎发育障碍与克隆胚胎基因组上大量组蛋白的甲基化密切相关。由此推测，图2中KDM4d mRNA翻译产生的酶的作用是_____。

【推荐3】2020年5月中国科研团队发现了可有效阻断新冠病毒（SARS-CoV-2）感染的单克隆抗体，可用于抗新冠药物和疫苗的研发。该单克隆抗体如注射进人体，将抢先与新冠病毒的棘突蛋白（S蛋白）结合，使病毒无法感染人体细胞，从而被免疫系统清除。如图是单克隆抗体制备过程示意图，请据图回答下列问题：

(1)d过程可以用_____方法（至少写两种）诱导两个细胞融合，诱导动物细胞融合相比于诱导植物细胞融合所特有的方法是_____。
(2)在单克隆抗体制备过程的中要进行两次筛选，第二次筛选的目的是_____。
(3)通过上述过程得到的细胞C有特点是_____。单克隆抗体的特点是_____。在小鼠体内培养时，可以从小鼠_____中提取大量的单克隆抗体。
(4)核移植技术与产生单克隆抗体都用到的技术手段是_____和_____。胚胎细胞核移植技术难度明显低于体细胞核移植技术，原因是_____。