【推荐1】动物生长激素释放抑制激素（somatostatin，ss）为14肽小分子激素，具有抑制生长激素分泌的作用。人们设想将ss制成免疫原免疫动物，以期望能产生ss抗体进而中和体内ss，促进哺乳动物生长。科研人员设计将ss基因与乙肝表面抗原（HBsAg）基因融合并用痘苗（痘病毒）系统表达，获得表面带有大量ss决定簇的杂合颗粒，将它作为一种新型的ss激素疫苗用以促进并维持动物较长的生长期。
(1)哺乳动物中ss由____________细胞分泌，维持动物体内生长激素含量的相对稳定，抑制动物的过度生长。
(2)畜牧业生产中。为促进动物的生长，研究员利用基因工程方法制备ss亚单位苗，但不能刺激机体产生特异性免疫，可能原因是___________________。
(3)为使动物体内产生针对ss的特异性抗体，研究员构建ss基因与HBsAg基因融合并用痘苗（痘病毒）系统表达，如图所示，制备“生长抑素基因工程活载体疫苗”。

   

①根据ss的氨基酸序列，利用DNA自动合成仪合成A52和A23ss基因片段，且在5'端有____________酶切位点的，以便与pUC12质粒实现定向连接，构建成pUC12-ss质粒。筛选重组质粒时，培养基中需要添加_____________和无色的X-gal，挑选___________（填“不变色”或“变蓝色”）的菌落。
②从基因文库中提取HBs基因的质粒pWR13-HBs，从中切下HBs基因片段，用_____________酶构建成带有HBs/ss嵌合基因的pUC12-HBs/ss质粒。
③构建将HBs/ss嵌合基因克隆到痘苗病毒表达载体pGJP-5质粒中并导入大肠杆菌，获得的pGJP-HBs/ss质粒转染痘苗病毒，构建重组痘苗病毒vv-HBs/ss。
④重组痘苗病毒vv-HBs/ss感染的非洲绿猴肾细胞（CV-1细胞），冻存的CV-1细胞需进行___________后再用含胎牛血清的营养液在37℃的CO₂培养箱中培养24h，使CV-1细胞贴壁生长至单层细胞或80%表面积；加入适量经处理的____________，37℃培养4h，加入新鲜营养液继续培养。
(4)HBsAg测定：转染物培养48h后进行离心，取____________经缓冲液处理和稀释后加入吸附有抗HBsAg抗体的试剂盒中测定，同时以____________检测作为阴性对照。ss测定：收集上述离心得到的细胞用超声波破碎，并加入一定比例的上清液处理后进行酶联免疫检测，同时以HBsAg重组痘病毒感染的细胞培养液作为阴性对照。还可对上清液进行_________________，其中Marker中需要添加_____________。割胶回收后进一步在电镜下检查，若结果与HBsAg颗粒、大小、形态相似，表明本基因工程体表达颗粒性多价抗原，具有ss和HBsAg2种抗原。
(5)将经转染后的培养物系列梯度稀释，筛选高表达HBsAg-ss的培养瓶，继续______________培养筛选出高表达细胞株进行多次传代培养，收集重组痘病毒，用以制备疫苗。
(6)为检测疫苗的免疫效价，研究人员进行了相关实验，请完善实验思路，并设计一个表格用以记录实验结果。
I.实验思路：
①将收集的重组痘苗病毒vv-HBs/ss用____________进行10^-1至10^-5的梯度稀释；
②按痘病毒疫苗的标准剂量接种于___________的健康的家兔体，对照组接种等量的生理盐水；
③观察注射部位的丘疹、水疱、化脓等出痘反应，并且每隔一定时间检测家兔体内的___________（答2点即可）以及体重增长情况，同时还要计算饲料的消耗量，进行统计分析。
Ⅱ.实验结果记录表。请设计一个实验结果记录表，用以记录检测到的家兔体内指标。______