乳头瘤病毒(HPV)持续感染可导致宫颈癌发生。科研人员将HPV外壳L1蛋白基因与在人体中不能复制但能有效表达外源基因的痘苗病毒重组,制备新型疫苗。
(1)用痘苗病毒感染鸡胚细胞,一段时间后洗去吸附的病毒,将鸡胚细胞转入液体培养基中培养,培养基中加入适量抗生素以避免_____________ 。在培养基中加入L1蛋白基因与质粒连接构建的重组质粒,使L1蛋白基因与_____________ 在鸡胚细胞内发生DNA重组,得到重组病毒疫苗。依据L1基因序列设计引物扩增重组病毒DNA,以检测______________________ 。
(2)为研究重组疫苗的保护作用,将生长发育状况一致的小鼠随机均分为三组,1组注射用PBS缓冲液配制的重组病毒疫苗100μL,2组注射_____________ 作为对照,3组注射_____________ 作为空白对照。
(3)给上述三组小鼠皮下注射C3细胞(含有HPV基因的癌细胞),观察、记录小鼠成瘤情况,结果如下。
据实验结果分析,尽管各组小鼠都可成瘤,但实验组小鼠__________________________ ,说明重组病毒疫苗具有一定的免疫保护作用。接种重组病毒疫苗的小鼠体内表达_____________ 作为抗原,刺激机体产生特异性免疫。皮下注射C3细胞时,HPV引起_____________ 细胞迅速增殖、分化,产生大量抗体,从而起到免疫保护作用。根据免疫学知识,注射疫苗后,只有诱发出机体的_____________ 免疫,才能有效清除癌细胞。
(4)若欲检验重组病毒疫苗是否有治疗作用,对小鼠进行的处理最恰当的是_____________ (选填下列字母)。
a.先注射HPV病毒,一段时间后注射重组病毒疫苗
b.先注射重组病毒疫苗,一段时间后再注射HPV病毒
c.先注射C3细胞,一段时间后注射重组病毒疫苗
d.先注射重组病毒疫苗,一段时间后再注射C3细胞
(1)用痘苗病毒感染鸡胚细胞,一段时间后洗去吸附的病毒,将鸡胚细胞转入液体培养基中培养,培养基中加入适量抗生素以避免
(2)为研究重组疫苗的保护作用,将生长发育状况一致的小鼠随机均分为三组,1组注射用PBS缓冲液配制的重组病毒疫苗100μL,2组注射
(3)给上述三组小鼠皮下注射C3细胞(含有HPV基因的癌细胞),观察、记录小鼠成瘤情况,结果如下。
组别 | 各组平均瘤重(g) |
1 | 0.192 |
2 | 0.347 |
3 | 0.916 |
据实验结果分析,尽管各组小鼠都可成瘤,但实验组小鼠
(4)若欲检验重组病毒疫苗是否有治疗作用,对小鼠进行的处理最恰当的是
a.先注射HPV病毒,一段时间后注射重组病毒疫苗
b.先注射重组病毒疫苗,一段时间后再注射HPV病毒
c.先注射C3细胞,一段时间后注射重组病毒疫苗
d.先注射重组病毒疫苗,一段时间后再注射C3细胞
更新时间:2017-08-15 16:48:04
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【推荐1】科学家利用耐盐碱植物中的耐盐基因,培育出了耐盐水稻新品系。如图是培育过程简图。回答下列问题:
(1)阶段Ⅰ的核心步骤是________________ ,在该过程中,一般需用限制酶切割________ 个磷酸二酯键。
(2)为保证耐盐基因的正常转录,重组质粒b上耐盐基因的两端应含有______ 和________ 。
(3)阶段Ⅱ的核心过程是________ 和________ ,人工配制的培养基中除了必要的营养物质和琼脂外,还必须添加________ 。
(4)现有两个二倍体水稻品种,其基因型分别为yyRr、Yyrr。科学家进行如下实验:将上述两种基因型水稻产生的花粉除去细胞壁后进行原生质体融合,再把这些融合细胞进行组织培养,培育出水稻植株。该过程中,一般用________ 作为化学诱导剂来诱导花粉原生质体融合。若原生质体之间只考虑两两融合,培育的后代有________ 种基因型。
(1)阶段Ⅰ的核心步骤是
(2)为保证耐盐基因的正常转录,重组质粒b上耐盐基因的两端应含有
(3)阶段Ⅱ的核心过程是
(4)现有两个二倍体水稻品种,其基因型分别为yyRr、Yyrr。科学家进行如下实验:将上述两种基因型水稻产生的花粉除去细胞壁后进行原生质体融合,再把这些融合细胞进行组织培养,培育出水稻植株。该过程中,一般用
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【推荐2】 人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白,可通过转基因技术在羊乳中获得。流程如下:
(1)上述基因工程中,目的基因是_______ ;在重组表达载体中有一段特殊的DNA片段,是RNA聚合酶识别和结合的部位,这段DNA被称为_____ 。基因工程所用DNA连接酶有两类,其中只能连接黏性末端的是________ DNA连接酶。
(2)常采用PCR技术扩增目的基因,在此过程中,由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA单链,只能从_____ 端延伸DNA单链,因此需要加入引物。
(3)成熟的基因表达载体除了含有目的基因外,还必须有启动子、终止子以及________________ 等。
(4)如果将基因表达载体导入大肠杆菌时,一般要用_________ 处理该菌,使之成为_____________ 细胞,以便吸收周围环境中的DNA分子。
(5)科研人员通过_____ 法,将基因表达载体导入猪的受精卵中。可通过______ 技术,来检测目的基因是否已导入到猪受精卵细胞的DNA分子上。
(6)在操作中要对供体母羊注射__________ 进行超数排卵处理;应采用____________ 法使精子体外获能;对供体母羊和__________ 进行同期发情处理。该转基因母羊进入泌乳期后,可以通过分泌的乳汁来生产htPA,因而被称为________________ 。
(7)为了获得含有htPA的羊乳,在移植前取早期胚胎滋养层细胞进行_____________ 。
(1)上述基因工程中,目的基因是
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【推荐3】人乳铁蛋白(hLF)广泛分布于乳汁和外分泌液中,初乳中含量较高,对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究,主要流程如下图,图中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相关限制酶切点,neor为新霉素抗性基因,BLG基因为B乳球蛋白基因,GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答:
(1)过程①方法的基本原理是先以人乳腺细胞总RNA为模板通过逆转录合成cDNA(互补DNA),再通过PCR技术扩增相应的DNA片段——hLF基因。但是过程①中,不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR,这是因为____________ ,在RT-PCR过程中,加入的引物需在______ 端添加____________ 两种限制酶的识别序列,以便于hLF基因插入pEB质粒中。
(2)人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体中含有终止子,终止子的作用是_________ 。过程②中,hLF基因插入到BLG基因之后,利用后者的启动子的目的是______ 。
(3)过程③中,使用人工膜制成的脂质体将重组质粒导入受体细胞,依据的主要原理是______ 。
(4)将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养,能够存活的细胞应该是导入了__________ 的细胞,再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞是否有__________ 以筛选出转染成功的细胞。
(1)过程①方法的基本原理是先以人乳腺细胞总RNA为模板通过逆转录合成cDNA(互补DNA),再通过PCR技术扩增相应的DNA片段——hLF基因。但是过程①中,不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR,这是因为
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【推荐1】动物乳腺生物反应器是基于转基因技术平台,使外源基因导入动物基因组中并定位表达于动物乳腺,利用动物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力,在动物的乳汁中生产一些具有重要价值产品的转基因动物的总称。
(1)动物乳腺生物反应器除了用到基因工程技术外,还需要用到________ (要求答两项)等技术。
(2)构建好的基因表达载体运用_______________ 注入到受精卵中,此受精卵的性染色体组成是_____________ 。
(3)外源蛋白基因的表达需要与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,其原因是_____________ 。
(4)若要检测外源药用蛋白基因表达是否成功,可利用______________ ,表达后的蛋白经过纯化,之后还需要与天然产品的________ 进行比较。
(1)动物乳腺生物反应器除了用到基因工程技术外,还需要用到
(2)构建好的基因表达载体运用
(3)外源蛋白基因的表达需要与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,其原因是
(4)若要检测外源药用蛋白基因表达是否成功,可利用
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【推荐2】2018年11月有学者及其团队宣布,一对经“CRISPR/Cas9”编辑的婴儿在中国出生,由于编辑了CCR5 基因(HIV病毒入侵机体细胞的主要辅助受体之一),因此这两个婴儿有天然抵抗艾滋病的能力。CRISPR/Cas9 基因编辑技术示意图如图所示,回答下列问题:
(l)Cas9是一种_____ 酶(A.蛋白质 B.脱氧核苷酸 C.核酸 D.磷脂)。CRISPR/Cas9基因编辑是对目标 DNA 位点的靶向编辑技术,特异性强。由图中可知,该技术的靶向性之一由_____ 决定。经编辑的遗传物质需要借助_____ (仪器)注入受精卵。
(2)该婴儿的出生还需要借助体外受精、_____ (答出两点即可)等胚胎操作技术。体外受精过程中精卵可以结合的原因之一是_____ 。
(3)基因编辑技术尚有很多问题需要解决,例如在切除目的基因的同时,可能连带破坏了其他正常的基因。基于此项考虑,你认为基因编辑婴儿可能出现什么问题。_____ 。
(l)Cas9是一种
(2)该婴儿的出生还需要借助体外受精、
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【推荐3】基因工程中的载体分为克隆载体和表达载体。克隆载体用来克隆和扩增DNA片段,而表达载体是使外源基因在宿主细胞中有效表达。图1为利用乳腺生物反应器生产某种药用蛋白过程中使用的一种载体,其中含有氨苄青霉素抗性基因(Ampr)、四环素抗性基因(Tetr)及多种限制酶的识别位点;图2为目的基因及限制酶的识别位点。回答下列问题:
(1)图1所示的载体为______ 载体,判断依据是__________________ 。
(2)质粒上一般具有两种抗生素抗性基因,且其中一个会因目的基因的插入而失活。这种双标记和插入失活能使____________ (质粒)的受体细胞在含有抗生素的培养基中得以区分。
(3)构建重组质粒时不能使用SmaI的原因是________ 。限制酶的最好选择为______ 。
(4)重组质粒的受体细胞和目的基因表达的细胞分别是______ ,供体胚胎在受体内能够存活的最主要原因是_________________ 。
(1)图1所示的载体为
(2)质粒上一般具有两种抗生素抗性基因,且其中一个会因目的基因的插入而失活。这种双标记和插入失活能使
(3)构建重组质粒时不能使用SmaI的原因是
(4)重组质粒的受体细胞和目的基因表达的细胞分别是
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【推荐1】某动物体内含有研究者感兴趣的目的基因,研究者欲将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存和表达。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因(AmpR)、LacZ基因及一些酶切位点,其结构和简单的操作步骤如图所示。
注:普通大肠杆菌菌落为乳白色,LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质。
请根据以上信息回答下列问题:
(1)从动物体内获取细胞进行培养时,除了细胞需要的各种营养物质和适宜的温度、pH和渗透压外,还需要满足的环境条件有_________________ 、________________ 。
(2)利用PCR可以在体外扩增含该目的基因的DNA片段,其扩增循环一般可以分为________________ 、________________ 、________________ 三步。
(3)为了确保目的基因与载体的连接发生定向连接重组,以便定向克隆和成功表达,可以采用________________ 的方法。
(4)在完成第④步操作后,菌液中大肠杆菌分为未转化、导入空白质粒、导入重组质粒三种,它们在图中培养基中培养后的观察到的结果分别是:_________________ 、________________ 、________________ 。
注:普通大肠杆菌菌落为乳白色,LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质。
请根据以上信息回答下列问题:
(1)从动物体内获取细胞进行培养时,除了细胞需要的各种营养物质和适宜的温度、pH和渗透压外,还需要满足的环境条件有
(2)利用PCR可以在体外扩增含该目的基因的DNA片段,其扩增循环一般可以分为
(3)为了确保目的基因与载体的连接发生定向连接重组,以便定向克隆和成功表达,可以采用
(4)在完成第④步操作后,菌液中大肠杆菌分为未转化、导入空白质粒、导入重组质粒三种,它们在图中培养基中培养后的观察到的结果分别是:
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【推荐2】烟草易受烟草花叶病毒(TMV)感染而大幅度减产。绞股蓝(一种植物)细胞中含有抗TMV基因,能抵抗TMV感染。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV烟草。
(1)下表是相关研究中的一些步骤,请结合所学基因工程知识完成以下表格。
(2)如图为经人工改造后的某种Ti质粒,该质粒中部分片段序列及部分限制酶识别序列已标出。据此图完成Ⅰ~Ⅲ题:
Ⅰ、步骤②是整个基因工程操作的核心,为了将目的基因插入Ti质粒,需要用限制酶和_____ 酶。为了避免_____ ,一般采用双酶切法,使切开的DNA片段具有两个不同的末端。
Ⅱ、在用PCR技术获取目的基因时,为了方便后续的剪切和连接,设计引物时会将限制酶识别序列加在目的基因序列的两端,应选用下列_____ (填序号)作为PCR引物。
Ⅲ、穿梭载体是指同时可在两种不同生物中稳定存在的载体,因该载体含有两种生物不同的复制原点。Ti质粒即为一种穿梭载体,质粒上除启动子、终止子、多个限制酶酶切位点和标记基因外,还有_____ 的复制原点。
(1)下表是相关研究中的一些步骤,请结合所学基因工程知识完成以下表格。
实验步骤 | 方法要点 |
获取目的基因 | 从绞股蓝细胞中提取RNA,通过① |
② | 将目的基因插入Ti质检 |
转化细胞 | 常用③ |
④ | 在含有卡那霉素的培养基上培养受体细胞 |
获得再生植株 | 运用⑤ |
转基因植株分析 | 从分子水平与⑥ |
(2)如图为经人工改造后的某种Ti质粒,该质粒中部分片段序列及部分限制酶识别序列已标出。据此图完成Ⅰ~Ⅲ题:
Ⅰ、步骤②是整个基因工程操作的核心,为了将目的基因插入Ti质粒,需要用限制酶和
Ⅱ、在用PCR技术获取目的基因时,为了方便后续的剪切和连接,设计引物时会将限制酶识别序列加在目的基因序列的两端,应选用下列
Ⅲ、穿梭载体是指同时可在两种不同生物中稳定存在的载体,因该载体含有两种生物不同的复制原点。Ti质粒即为一种穿梭载体,质粒上除启动子、终止子、多个限制酶酶切位点和标记基因外,还有
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【推荐3】B基因存在于水稻基因组中,其仅在体细胞(2n)和精子中正常表达,但在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响,设计了如下实验。
据图回答:
(1)B基因在水稻卵细胞中不转录,推测其可能的原因是卵细胞中________ 。
A.含B基因的染色体缺失B.DNA聚合酶失活
C.B基因发生基因突变D.B基因的启动子无法启动转录
(2)在过程①②转化筛选时,过程__________ 中T-DNA整合到受体细胞染色体DNA上,过程__________ 在培养基中应加入卡那霉素。
(3)从转基因植株未成熟种子中分离出胚,观察到细胞内仅含一个染色体组,判定该胚是由未受精的卵细胞发育形成的,而一般情况下水稻卵细胞在未受精时不进行发育,由此表明____________ 。
据图回答:
(1)B基因在水稻卵细胞中不转录,推测其可能的原因是卵细胞中
A.含B基因的染色体缺失B.DNA聚合酶失活
C.B基因发生基因突变D.B基因的启动子无法启动转录
(2)在过程①②转化筛选时,过程
(3)从转基因植株未成熟种子中分离出胚,观察到细胞内仅含一个染色体组,判定该胚是由未受精的卵细胞发育形成的,而一般情况下水稻卵细胞在未受精时不进行发育,由此表明
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