【推荐1】盐分是限制植物生长发育的重要因素之一。科研人员尝试利用獐茅液泡膜Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（AINHX基因）培育转基因耐盐马铃薯。
（1）通常从獐茅的__________中获取AINHX基因用以构建基因表达载体，构建基因表达载体过程中必须使用的工具酶是_______________________________。
（2）为保证目的基因在马铃薯根细胞中能够正常表达，运载体上应含有特定的_________________。
（3）马铃薯的转化过程常用农杆菌转化法，这种方法是利用了农杆菌的Ti质粒上的T-DNA具有__________________的特点。
（4）为探究目的基因整合到马铃薯基因组是否转录，可从转基因植株的细胞中提取所有mRNA并反转录成_______________，再利用PCR方法进行基因扩增，基因扩增时需要先根据__________________________合成引物。若对基因扩增n代，则共需消耗____________对引物。若以根细胞为材料扩增结果为阳性（有产物生成），以叶细胞为材料扩增结果为阴性（无产物生成），则说明______________________。
（5）为证明转基因马铃薯获得了耐盐性，将生长至4叶期的转基因幼苗转入___________________培养液中培养，30天后观察植株生长状况。

【推荐2】CD87是一种癌细胞膜上的受体蛋白，与癌细胞的转移和增殖有关。研发针对CD87的抗体类药物能提高癌症的治愈率。
(1)单克隆抗体制备过程如图]所示，其中HAT培养基用于筛选杂交瘤细胞。

细胞①表示小鼠的___________细胞，获取杂交瘤细胞后，需在全营养培养基中培养一段时间，目的是_________。经过筛选的杂交瘤细胞可通过注入小鼠腹腔或在培养液中进行扩大培养并不断产生单克隆抗体。
(2)双特异性抗体是指同时具有两种抗原结合位点的人造抗体，研究人员利用基因工程等技术制备具有CD3和CD87结合位点的双特异性抗体（见图2）。备注：CD3是T细胞表面特异性抗原，在所有T细胞膜上均有表达，该抗原被激活后，能极大促进T细胞的免疫效力。

①设计目的基因序列：通过查阅基因数据库，获得CD3和CD87蛋白对应的碱基序列和氨基酸序列，为使两种抗体蛋白能结合形成有功能的抗体，利用计算机辅助设计技术，设计改造蛋白质的___________，推测其可能的氨基酸序列和碱基序列。
②获取目的基因：利用___________获取目的基因后，通过PCR扩增，采用的引物如图3所示。

③构建重组质粒：选用含LacO位点的质粒作为载体。LacO位点常与阻遏蛋白（LacⅠ基因表达产物）结合，阻止RNA聚合酶的移动，环境中的乳糖能解除阻遏蛋白的作用。将目的基因与质粒连接，形成图4所示的重组质粒。LacO位点的作用是___________。
④重组质粒的导入和检测：将重组质粒与经CaCl₂处理的大肠杆菌共培养一段时间后，将菌种接种在含四环素的培养基中培养，获得的大肠杆菌需鉴定是否含有重组质粒，原因是_________。提取大肠杆菌总DNA后，根据表中4种限制酶的识别序列，采用___________酶进行酶切，电冰后若存在1150bp左右长度的条带，则说明导入了重组质粒。

酶	识别序列
EcoRⅠ	5＇-G^AATTC-3＇
BgⅢ	5＇-A^GATCT-3＇
BamHⅠ	5＇-G^AGATC-3＇
XhoⅠ	5＇-C^ATCGA-3＇
备注：“^”表示酶切位点

⑤双特异性抗体的生产：将筛选出的大肠杆菌扩大培养后，接种在发酵罐中进行大规模发酵。
(3)相对于单克隆抗体，图示双特异性抗体在治疗癌症时的效果更好，推测原因是__________。

【推荐3】人血清白蛋白（HSA）是血浆中含量最丰富的蛋白质，在维持血浆渗透压、抗凝血等方面起着重要作用，具有重要的医用价值。如图是用基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。请据图分析并回答下列问题。

(1)获取的HSA基因可以利用PCR又叫_______技术进行快速扩增。扩增后需要用______电泳鉴定。
(2)一个基因表达载体除了包括目的基因外，还应包括______和标记基因，复制原点。
(3)在利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让____整合到植物细胞染色体DNA上。
(4)为了鉴定宿主细胞中是否产生rHSA，可以用（填字母）方法来进行检验____。

A．检验HSA基因是否导入

B．检验细胞中是否产生相应的mRNA

C．抗原—抗体杂交

D．检测是否有标记基因

【推荐1】青蒿素是最有效的抗疟疾药物，但野生黄花蒿青蒿素产量低，为缓解青蒿素供应不足的状况，科学家将tms基因和tmr基因导入黄花蒿的愈伤组织从而获得了黄花蒿的冠瘿组织，改造过程用到的部分结构如图。

（1）科学家将目的基因导入黄花蒿愈伤组织细胞的常用方法是_____________________。
（2）图中结构P、T是基因成功转录的保证，其中结构P的作用是_______________________。为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，并将含有目的基因的细胞筛选出来，图中还缺少的结构是___________________________________________。
（3）在获得转基因的冠瘿组织过程中，__________________________是核心步骤，在具体操作中常常使用两种能产生不同黏性末端的限制酶对目的基因和运载体的两端分别进行切割，这样做的好处是______________________________________________________。
（4）要检测目的基因是否插入到冠瘿组织细胞的染色体DNA上，可采用_____________技术。
（5）与愈伤组织相比，冠瘿组织的生长速度更快，原因可能是____________________________________。

【推荐2】利用转基因技术可以生产出更多廉价的胰岛素，斜土为转基因实验过程示意图，其中数字表示相应过程。
天然大肠杆菌质粒一般含有LacZ基因而不含氨苄青霉素抗性基因；人工合成的大肠杆菌puc118质粒中除含有LacZ基因外，还含有氨苄青霉素抗性基因。

若lacZ基因完整，便可表达出β-半乳糖苷酶，β-半乳糖苷酶能将培养基中含有的IPTG和X-gal水解成蓝色，形成蓝色菌落；若lacZ基因中插入了外源基因，带有puc118质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，将形成白色菌落。此实验方法可以用于鉴别转基因实验是否获得成功。
（1）过程①②一般需要的限制性内切酶主要是从____________分离纯化出来的；过程③④需要______酶。
（2）检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒。培养一段时间后出现三种类型：蓝色菌落、白色菌落、无菌落形成。成功导入重组质粒的菌落的表现是________________。
（3）图中的培养基中除含有大肠杆菌必需营养成分外，还应加入____________等物质，用于筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。
（4）大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：首先用_____________处理细胞，使细胞处于一种____________的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。第二步是将____________与感受态细胞混合，在一定的温度下完成转化。

【推荐3】人血清白蛋白（HSA）是血浆中含量最丰富的蛋白质，在维持血浆渗透压、抗凝血等方面起着重要作用，具有重要的医用价值。下图是用基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。

（1）为获取HSA基因，首先要提取人血细胞中的mRNA，利用__________法合成cDNA，再利用 PCR技术进行快速扩增。PCR利用了________原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。
（2）构建基因表达载体的目的是使目的基因_________，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。
（3）构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体时，需要选择水稻胚乳细胞启动子，而不能选择其他物种和组织细胞的启动子，原因可能是_________________________。构建的重组质粒上启动子的本质是__________________，其作用是供RNA聚合酶的______以驱动目的基因的转录。
（4）在利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，为了吸引农杆菌移向水稻受体细胞，需添加_________物质。
（5）选用大肠杆菌作为受体细胞的优点有________________________（答出两点即可）。但相比于水稻胚乳细胞，利用大肠杆菌获得的rHSA也有一些缺点，请从生物膜系统的角度进行分析________________。
（6）利用上述方法获得的rHSA不能直接用于临床医疗，你推测的原因是___________。

【推荐1】IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿IKK基因编码区第1183位碱基T突变为C，导致IKK上第395位酪氨酸被组氨酸代替。为研究该患儿发病机制，研究人员利用纯合野生鼠应用大引物PCR定点诱变技术培育出SCID模型小鼠（纯合），主要过程如图甲、乙。分析回答下列问题：
   
   
(1)在PCR反应体系中，除需加入引物、IKK基因、缓冲液、Mg²⁺等外，还需加入__________等。
(2)在图甲获取突变基因过程中，需要以下3种引物：
       

则PCR1中使用的引物有__________，PCR2中使用的引物有__________和图中大引物的__________（填“①”或“②”）链。
(3)PCR的反应程序：94℃3min；94℃30S，58℃30S，72℃50S，30个循环。在循环之前的94℃3min处理为预变性；循环中72℃处理的目的是__________。
(4)研究人员经鉴定、筛选获得一只转基因杂合鼠F0，并确认突变基因已经稳定同源替代IKK基因，请你设计完成获得SCID模型鼠的实验步骤：
①杂交亲本：__________，杂交得F₁；
②F₁雌、雄鼠随机交配得F₂；
③提取F₂每只小鼠的基因组DNA，采用分子生物学方法，利用IKK基因探针和突变基因探针进行筛选，则__________的为模型鼠。

【推荐3】下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

限制酶	BamH Ⅰ	Hind Ⅲ	EcoR Ⅰ	Sma Ⅰ
识别序列及 切割位点

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有____个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越______。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是______。
(4)与只使用EcoR I相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_________。
(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入___________酶。
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了___________。
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

【推荐1】青蒿素是最有效的抗疟疾药物，但野生黄花蒿青蒿素产量低，为缓解青蒿素供应不足的状况，科学家将tms基因和tmr基因导入黄花蒿的愈伤组织从而获得了黄花蒿的冠瘿组织，改造过程用到的部分结构如图所示。分析回答下列问题：

(1)科学家将目的基因导入黄花蒿愈伤组织细胞的常用方法是___________________ 。
(2)图中结构P、T是基因成功转录的保证，其中结构P的作用是________________ 。为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，并将含有目的基因的细胞筛选出来，图中还缺少的结构是___________________ 。
(3)在获得转基因的冠瘿组织过程中，___________________ 是核心步骤。
(4)T－DNA的作用是使___________________ ，并插入到植物细胞中染色体的DNA上，要检测目的基因是否插入冠瘿组织细胞的染色体DNA上，可采用____________ 技术。
(5)与愈伤组织相比，冠瘿组织的生长速度更快，原因可能是______________。

【推荐2】马铃薯是世界上仅次于小麦、水稻、玉米的第四大粮食作物，目前广泛种植于世界各地。由马铃薯Y病毒（PVY）等引起的病毒性退化导致世界马铃薯产量每年至少减产20%。研究表明，表达病毒外壳蛋白基因（PVY－CP）的转基因马铃薯能显著延缓病害症状的发展和危害程度。目前，该转基因抗病毒马铃薯已经在云南试种成功。请回答下列问题：
（1）PVY－CP在基因工程中称为___。在基因表达载体中，除了要有PVY－CP外，还必须有启动子、终止子和___。将PVY－CP导入马铃薯细胞采用最多的方法是___。
（2）取40株扩繁后的转基因马铃薯作为实验组，另取40株___作为对照组，种植于相同且适宜的条件下，接种___，观察发病情况，以确定转基因马铃薯是否具有抗性以及抗性的程度。
（3）成功获得抗PVY马铃薯后，可采用植物细胞工程进行大批量繁育，其理论依据是___；一些分化的马铃薯细胞，经过激素的诱导，可以___形成具有分生能力的薄壁细胞，进而形成 ____，再进一步培养成植株。

【推荐3】拟南芥细胞中存在种转录因子能够明显提高其他基因的表达水平。研究人员将从拟南芥细胞中获取的转录因子转移到大豆细胞内，并使其过量表达，发现大豆中油酸和亚油酸的含量显著提高。图中限制酶EcoR V的酶切位点为—GAT↓ATC一。

（1）质粒P0具有氨苄青霉素抗性基因（amp）和四环素抗性基因（tet），对其进行切割时应该注意____________， 以便筛选重组质粒。研究人员利用限制酶EcoRV对载体进行处理后_____ （“能”或“不能”）与目的基因片段直接相连。用限制酶和T₄DNA连接酶构建基因表达载体时，研究人员常选用能产生黏性末端的限制酶，你认为这样做的理由是_____________。
（2）P3质粒导入受体细胞通常使用农杆菌转化法，转化指的是___________，若受体细胞能够体现氨苄青霉素抗性，能否说明目的基因已成功导入受体细胞，并说出理由________。
（3）受体细胞能够培育出转基因大豆植株的原因是______________________。
（4）大豆过量表达转录因子后，油酸和亚油酸的含量显著提高，推测转录因子在细胞内发挥的作用可能是___________________________________。