【推荐1】回答下列（一）（二）两小题：
（一）回答下列与酿酒相关的问题：
（1）酒的种类大体分为白酒、果酒、啤酒和黄酒四类，制作方法各不相同，但都是由酵母菌发酵完成的。欲纯化野生酵母菌，最简单的分离方法是____________________，若用果汁酿造果酒，可在果汁中加入果胶酶和果胶甲酯酶将果胶完全分解成________________________，从而提高果汁的出汁率。
（2）啤酒是以大米和大麦为原料，用大麦芽的__________将淀粉水解糖化，过滤后得到麦芽汁，麦芽汁中加入啤酒花以抑菌并增加特有的苦味和香味，然后在麦芽汁中加入啤酒酵母发酵，发酵过程中通过控制____________________________（至少答出两点）等条件可得到不同风味的啤酒。
（3）如果制作的啤酒中含蛋白质较多且易混浊，可用木瓜蛋白酶处理使啤酒澄清。为节约生产成本，实现酶的重复利用，可以将酶进行__________处理。为测定木瓜蛋白酶对蛋白质的水解作用，可以用Lovery测定法对木瓜蛋白酶处理后的蛋白质溶液样品进行蛋白质含量检测。该检测方法的原理是：碱性环境下蛋白质分子中的肽键能与Cu²⁺生成络合物，同时将Cu²⁺还原成Cu⁺，BCA（二喹啉甲酸）试剂可特异性与Cu⁺结合，形成稳定的有颜色的复合物，在562nm处有高的光吸收值。颜色的深浅与蛋白质浓度____________，根据光吸收值大小，从____________________上查出相应值，计算出蛋白质的含量。若计算得到的蛋白质含量越高，则说明酶的活性__________。
（二）现代生物科技对人类生活、生产和社会发展产生了巨大影响，请回答下列与利用现代生物技术培育新品种有关的问题：
（1）转基因抗虫棉是改革开放以来我国棉花产业自主创新的缩影。与传统育种方法相比，基因工程育种的优点有 ________________________________________ （至少写两点）。
（2）苏云金杆菌含有抗虫基因，可以用于培育抗虫植物。首先获取苏云金杆菌的抗虫基因：提取苏云金杆菌的 DNA，用______________切割成不同片段，通过载体导入不同的受体菌，构建_____________，让全部基因表达，利用单克隆抗体获得______________与表达产物结合筛选出抗虫基因。然后以_____________作为载体，通过农杆菌转化法导入植物细胞。抗虫基因能在植物细胞中表达，关键是要在其两端连接上植物细胞特有的启动部位与终止部位，使植物细胞内的____________ 能与之结合及脱离，从而启动及终止转录。
（3）原生质体培养在育种中有重要作用：一方面可以借助基因工程方法培育转基因植株，再者可以通过_________________方法培育杂种植株。原生质体再生细胞壁后可发生类似受精卵发育成胚的过程，经过分裂、分化、_______________和形态建成而发育成胚状体。

【推荐2】养殖家禽的饲料中富含谷物，纤维素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纤维素的酶，阻碍了家禽对饲料的吸收与利用。研究人员利用转基因技术改造乳酸杆菌，将其添加于饲料中，以提高家禽养殖效率。请分析并回答下列问题。
(1)乳酸杆菌是动物胃肠道的优势细菌之一。家禽肠道内的乳酸杆菌可利用葡萄糖通过细胞呼吸产生酸性物质，抑制有害细菌的生长和繁殖，维持肠道的正常功能，乳酸杆菌与家禽的种间关系属于___。
(2)培养乳酸杆菌时培养基中除添加主要营养物质外还需要添加___以满足其生长对特殊营养物质的需求。农牧业上常将以制糖工业的废液为原料通过发酵获得的___制成微生物饲料提高饲料的品质。
(3)枯草芽孢杆菌分泌可降解纤维素的一种酶，这种酶由W基因编码。为在乳酸杆菌中表达W基因，需使用图1中质粒为载体。图2为克隆得到的含W基因的DNA片段，W基因以乙链为转录模板链。
   
①利用PCR技术扩增W基因时，需要用到___酶。扩增完成后，常采用___法来鉴定PCR的产物。
②很多启动子具有物种特异性，在图1质粒中插入W基因，其上游启动子应选择___（填字母）
A．枯草芽孢杆菌启动子
B．乳酸杆菌启动子
C．农杆菌启动子
③下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。

限制酶	EcoRI	BamHI	KpnI	MfeI	HindⅢ
识别位点

根据上述信息，应使用限制酶___切割图1中质粒，使用限制酶___切割图2中含W基因的DNA片段，以获得能正确表达W基因的重组质粒。④所得重组质粒导入到乳酸杆菌后，使用含氨苄青霉素的培养基筛选，以得到成功导入W基因的乳酸杆菌。
(4)为确定导入重组质粒的乳酸杆菌是否具有分解纤维素的能力，研究人员将导入了重组质粒的乳酸杆菌接种在___固体鉴别培养基上，若出现___现象，则证明导入成功。

【推荐3】人溶菌酶能分解细菌的细胞壁，是抗生素的替代品。科学家培育出转入溶菌酶基因山羊，期望从其乳汁中提取人溶菌酶，过程如图所示，其中编号①～⑨表示过程。质粒S上的基因Leu能控制合成亮氨酸（山羊的必需氨基酸），基因GFP能控制合成绿色荧光蛋白。四种限制酶的识别序列及切割位点见下表。回答下列问题：

限制酶	BamHI	BglⅡ	HindⅢ	XbaI
识别序列和切割位点	G↓GATCC	A↓GATCT	A↓AGCTT	T↓CTAGA

(1)过程①通过PCR技术扩增目的基因，反应溶液中加入Mg^2＋的作用是_____________；扩增过程中，变性后温度下降到50℃的目的是_____________；在酶的作用下，4种脱氧核苷酸加入引物的_____________（填“3'”或“5'”）端，延伸合成目的基因。
(2)过程②要选择合适的限制酶切割含目的基因的DNA片段，应选用的表中的两种限制酶是_____________，不选用其他限制酶的原因是_____________。
(3)为成功筛选出含重组质粒T的成纤维细胞，质粒S中用作标记基因的是_______________。将成纤维细胞培养一段时间后观察，_______________（填“保留”或“淘汰”）有绿色荧光的受体细胞。
(4)过程⑨通常将发育至_____________的早期胚胎移入受体。为了使得到的转基因羊都能分泌人溶菌酶，在选用重组质粒T的受体细胞时，应采取的措施是_____________。

【推荐1】近期爆发了新型冠状病毒（2019-nCoV）病例，该病毒是具外套膜的正链单股RNA病毒。目前，对于该病毒的检测手段主要为利用荧光PCR试剂盒对其核酸进行检测。其原理是，通过提取病人样本中的RNA，进行反转录•聚合酶链式反应（RT-PCR，即先通过逆转录获得cDNA，然后以其为模板进行PCR），通过扩增反应将样本中微量的病毒信息加以放大，最后以荧光的方式读取信号。如果PCR之后信号为阳性，那么就可说样本中存在着病毒（已经感染），反之则说明没有感染。

（1）PCR扩增时在加入一对引物的同时还需加入一个特异性的荧光探针，其两端分别标记一个报告基团和一个淬灭基团。如上图所示，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；Taq酶在催化子链延伸时，还具有外切酶活性，它可以沿着____________（填“5＇→3＇”或“3＇→5＇”）方向将探针酶切降解，使报告基团和淬灭基团分离。于是，随着DNA扩增次数的增加，荧光的强度会逐渐____________（填“增大”或“减小”），从而实现了荧光信号的变化与PCR产物的形成完全同步。
（2）目前2019-nCoV的全基因组序列测定已完成，这有利于我们在研发病毒核酸检测试剂盒时根据其基因组序列来设计___________。
（3）此外，对新型冠状病毒感染的诊断还可以通过抗体检测，这需要利用动物细胞工程中的__________技术，其优点为______________。
（4）为了预防、控制该病的发生、流行，科学人员正在紧急研发相应的疫苗，其中利用灭活的病毒制备的疫苗称为灭活疫苗，这里的“灭活”是指利用物理或化学手段使病毒失去_________，但是并不破坏病原体的_________。此外，还可以利用___________技术来表达抗原蛋白，以大规模生产疫苗。

【推荐3】东北酸菜是白菜经腌制而成的传统食品。发酵过程中若霉菌等微生物大量繁殖会导致酸菜腐败发臭。研究人员从酸菜中分离出具有抑菌活性的乳酸菌，该类乳酸菌因能分泌新型细菌素（多肽）而具有抑菌活性。为获得细菌素表达量更高的工程菌用于生产，进行了相关研究。回答下列问题。
(1)乳酸菌产生的乳酸能溶解碳酸钙而产生溶钙圈。研究人员为从市售多个品牌的酸菜中分离纯化乳酸菌，配制含有碳酸钙的固体培养基，利用_____法对该培养基进行灭菌，并采用_____法将酸菜液接种到培养基中，选择有溶钙圈的菌落并继续进行纯培养。
(2)通过上述方法筛选得到6种乳酸菌，测得它们对霉菌的抑菌率如下表，应选择乳酸菌编号为_____的菌株进行后续操作。

乳酸菌编号	Ll	L2	L3	L4	L5	L6
抑菌率/%	28．57	19．48	58．44	14．28	6．49	36．36

(3)研究人员从上述乳酸菌中提取细菌素基因，将其导入受体菌，再对受体菌做进一步的检测与鉴定。下面是细菌素基因及构建的基因表达载体的示意图。

①利用PCR技术扩增细菌素基因时，应选择的一对引物是_____。PCR过程中，经过4轮循环，消耗引物的个数是_____。
②若以细菌素基因甲链为转录的模板链，为构建基因表达载体，应在与甲链结合的引物的5＇端加入_____（填“BamH I”或“Nde I”）的识别序列。
③转化操作后提取受体细胞中的DNA，并利用选择的引物进行扩增，再对扩增产物进行电泳检测，结果如下图。

1：DNA标准样 2：普通受体菌的DNA 3：转化操作后受体菌的DNA 4：无菌水

设置4号的目的是_____（答出1点即可），电泳结果表明_____。