组卷网 > 高中生物综合库 > 生物技术与工程 > 基因工程 > 基因工程的基本操作程序 > 将目的基因导入受体细胞
题型:非选择题-解答题 难度:0.4 引用次数:333 题号:6628457
如图是培育优良种牛的流程图,a、b为操作过程,请据图回答有美关问题:

(1)a过程的技术名称是_________。此前,精子要进行______处理,此后,应将受精卵转入发育培养液中继续培养,以检查受精状况和受精卵的发育能力。
(2)卵细胞是由良种奶牛提供的,提供精子的公牛和接受胚胎的受体母牛是否也都要求是良种?为什么?__________________________________________________________________
(3)b过程常用的方法是_____________,检测外源基因是否在转基因牛D中表达成功的方法是_______;要从转基因牛D的牛奶中提取外源基因蛋白,在构建基因表达载体时应将外源基因与_______相连。
(4)为取得A、B同卵双胎,应在胚胎发育的_________期用机械方法将胚胎分割,其操作要注意_______,以免影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

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非选择题-解答题 | 较难 (0.4)
【推荐1】研究发现,酵母细胞基因转录需要转录因子,转录因子是组件式蛋白质,包括DNA结合功能域(DNA一BD)和转录激活结构域(DNA一AD),两结合域分开时具有功能,但不能激活转录,如果将待测蛋白质X与DNA一BD融合,蛋白质Y与DNA一AD融合,蛋白质X和Y有相互作用时,两结构域能重新呈现完整转录因子活性,并可激活报告基因启动子,过程如图1所示。科研人员为了验证蛋白质X和Y是否具有相互作用及作用位置是位于蛋白质的氨基端还是羧基端,分别PCR扩增蛋白质X和Y的全长基因序列、编码氨基端603个氨基酸片段的基因序列、编码羧基端539个氨基酸片段的基因序列,分别构建不同的酵母表达载体(如图2和图3所示),其中Ampr为氨苄青霉素抗性基因,His3和TRPI分别为控制组氨酸和色氨酸合成的基因。空白载体或单独一种载体均不能激活报告基因,载体对酵母菌无毒害作用。回答下列问题:

(1)为了将pLexA一JL和pB42AD载体分别与蛋白质X和Y的三种基因序列连接,需要先进行PCR扩增蛋白质X基因和蛋白质Y基因的6种序列,共需要设计__________种引物;扩增后再用限制酶____________________分别切割蛋白质X基因的3种序列和Y基因的3种序列。构建好pLxA一JL和pB42AD基因表达载体后,为确定是否成功,需要酶切两种载体后,根据__________结果观察是否出现预期大小的目标条带。
(2)色氨酸和亮氨酸合成缺陷型酵母菌菌株是实验室常用的营养缺陷型菌株,将成功构建的上述基因表达载体通过__________法导入到处于感受态的色氨酸和亮氨酸合成缺陷型酵母菌中,在培养基中需添加__________用于筛选成功导入基因表达载体的酵母菌。
(3)两种载体成功导入酵母并表达,结果为蛋白质X和蛋白质Y、蛋白质X羧基端和蛋白质Y、蛋白质X和蛋白质Y羧基端、蛋白质X羧基端和蛋白质Y羧基端之间有相互作用。据此可推测的结论是__________。不同蛋白质之间相互作用是通过检测__________得到的。
2022-03-24更新 | 1866次组卷
非选择题-解答题 | 较难 (0.4)
【推荐2】预防乙肝最有效的途径是接种疫苗。将乙肝表面抗原基因转移到植物细胞内可生产乙肝疫苗。回答下列问题。
(1)欲在短时间内大量扩增乙肝表面抗原基因。通过______(填写中文名称)技术,其原理是_______,利用该技术扩增乙肝表面抗原基因的前提是________
(2)将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法,此外采用_____法十分简便经济。用抗原——抗体杂交技术检测植物细胞是否成功合成乙肝表面抗原蛋白,若有_______出现,表明目的基因已形成蛋白质产品。
(3)将乙肝表面抗原基因导入植物细胞后,采用_______技术获得愈伤组织,该技术需在_______条件下进行。
(4)乙肝疫苗在2~8℃条件下保存,其不宜在常温下保存最可能的原因______
2017-05-11更新 | 111次组卷
非选择题-解答题 | 较难 (0.4)
【推荐3】研究表明来源于大肠杆菌的苏氨酸输出蛋白(由rhtA基因编码)能够识别5-氨基乙酰丙酸,并将其输出至细胞外。为探究苏氨酸输出蛋白的作用,研究人员从大肠杆菌的基因组DNA中扩增出rhtA基因,并构建出相应的重组质粒,获得转rhtA基因的工程菌,其基本操作流程如图所示,已知引物A、B的序列分别是:
5′AGGAAACAGACCATGGAATTCATGCCTGGTTCATTACGTAAAATG3′、
5′GCCAAGCTTGCATGCCTGCAGTTAATTAATGTCTAATTCTTTTATTTTGCTC3′。

回答下列问题:
(1)由图可知,获取大量rhtA基因要经PCR技术扩增,若要扩增出N个rhtA基因,需要引物A、B各__________个,对引物A的设计要求是____________________(答出2点即可);通过过程①得到重组质粒,需选用的两种限制酶是__________,两者起作用部位的化学键是__________
(2)过程②⑤在操作时,一般需用钙离子处理大肠杆菌细胞,使细胞处于一种_________的生理状态。过程③将大肠杆菌体内的质粒提取出来进行验证时,以EcoRI切割pEC-XK99E质粒为对照,分别对重组质粒用EcoRI单酶切、以(1)选用的双酶对重组质粒进行双酶切,然后用_________技术进行验证,其实验结果如图所示,若2是对照,则3、4分别是单酶切、双酶切的结果,做出此推测的依据是用EcoRI单酶切对照和重组质粒,均使质粒成为________,2的DNA条带略比3小,是因为________,4被双酶切后形成_____________
   
(3)将正确的质粒导入AL9后,后续的步骤是________。本技术选用微生物大肠杆菌作为受体细胞,而不选用动物细胞,理由是________(答出一点即可)。
2023-05-30更新 | 137次组卷
共计 平均难度:一般