【推荐1】回答下列(一)、(二)小题：
(一)各种微生物对氧的需求是不同的，研究组开展了氧对微生物的影响实验，请回答下列问题：
(1)将含有LB固体培养基(刚配好，尚未凝固)的锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅，若在121 ℃条件下灭菌，则灭菌时间一般为________min，灭菌时间从________________开始。灭完菌后将锥形瓶取出，待温度下降到60 ℃(不烫手的温度)时，用________擦拭桌面和双手，在超净工作台的____________旁将锥形瓶中的LB培养基分装到一系列试管中，并做标记。
(2)当试管温度下降到40 ℃(培养基还是液态)时，用灭菌过的移液器吸取0.1 mL的各类微生物悬液加到相应试管中并封口，双手快速搓动试管，使菌种__________于培养基内后迅速将封口的试管放置在________条件下使培养基凝固。
(3)将上述试管放置于常温条件下培养48小时后观察实验结果，下图中表示果酒制作菌种的图是________。

(二)下图为培育抗病转基因植物操作过程，请回答下列问题：

(1)抗病基因与载体结合常用__________________________________处理，获得的重组载体通过____________方法导入________形原生质体中。
(2)图中①表示________，培养过程中需保持________，防止杂菌污染，愈伤组织需适当配比的____________和生长调节剂诱导。
(3)抗病转基因植物获得的原理是_____________________________________。

【推荐2】科学家将绿色荧光蛋白(GFP)基因转入小鼠胚胎干细胞(ES)内，GFP基因若表达就会使细胞带有绿色荧光，继而利用带有绿色荧光的ES细胞培育出嵌合型的小鼠沼于科学研究，流程如图所示。请回答:

（1）在步骤①中构建基因表达载体时，需要在GFP基因的首端加入________________酶识别和结合的部位，有了它才能驱动GFP基因转录出mRNA，最终获得GFP。GFP基因的尾端还需有_______________,使转录在需要的地方停止下来。
（2）步骤②的受体细胞是小鼠ES细胞，ES细胞一般从囊胚的_______________分离得到。在培养ES细胞时，细胞充满培养皿底部后停止分裂，这种现象称为_______________。如果想继续培养则是需要重新用______________酶处理，然后分瓶继续培养，这样的培养过程通常被称为传代培养。
（3）图中重组囊胚在步骤⑤之前要先检测是否有_______________，再通过_________________技术移入代孕母鼠子宫内继续发育。

【推荐3】柽柳是强耐盐植物，某科研小组利用其抗盐基因培育能在盐碱地种植的抗盐烟草，培育流程如下图（其中amp'为氨苄青霉素抗性基因，Pst I、Sma I、Alu I、Hind II为四种限制酶）。请回答下列有关问题：

(1)从遗传学角度分析，基因工程的原理是_____。基因工程的工具酶，除了图中以外还需要_____。
(2)题中获得目的基因的方法是_____，过程①适合选用Sma I和Pst I两种限制酶对_____进行切割，不选取另两种限制酶的理由是_____。
(3)过程②中将重组质粒导入农杆菌可用_____处理，使之成为_____细胞，以利于完成转化过程。
(4)转基因烟草自交，子代中抗盐植株与不抗盐植株数量之比接近3：1，由此可以得出的结论是_____（答出2点）。

【推荐1】F基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转F基因的高绒质绒山羊的简单流程如图：

（1）利用PCR技术扩增F基因时，需要加入两种引物，原因是____________，引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异地复制的DNA序列，一个DNA分子三轮复制以后，含有两种引物的DNA分子有____________个。
（2）在过程②中，用__________________处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于5%的CO₂的气体环境中，CO₂的作用是__________________________。
（3）在过程③中，用______________处理以获取更多的卵（母）细胞。
（4）从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是_____________________。在胚胎移植前，可通过______________技术可获得较多胚胎。

【推荐2】Ⅰ下面是从蛙体内剥离出的某反射弧结构的模式图，其中甲表示神经中枢，乙、丙未知。神经元A、B上的1、2、3、4为四个实验位点。现欲探究神经元A是传出神经元还是传入神经元，结合所给器材完成以下内容。

材料：从蛙体内剥离出的某反射弧(反射弧结构未被破坏)。供选择仪器：剪刀，电刺激仪，微电流计。
(1)如果该反射弧的效应器为传出神经末梢及其连接的肌肉。探究神经元A是传出神经元还是传入神经元的方法步骤(只在神经元A上完成)：
①先用剪刀在神经元A的______将其剪断；
②再用电刺激仪刺激神经元A上的实验位点______，若____________，则神经元A为传入神经元，反之则为传出神经元。
(2)如果在实验过程中要保证神经元A和神经元B的完整性，探究神经元A是传出神经元还是传入神经元的方法步骤(每个实验位点只能用一次)：
①将微电流计的两个电极分别搭在实验位点2和实验位点3的神经纤维膜外；
②用电刺激仪刺激实验位点________，若微电流计的指针偏转________次，则神经元A为传出神经元；若微电流计的指针偏转______次，则神经元A为传入神经元。该实验结果表明兴奋在神经元间传递的特点为______，具有这种特点的原因是______________。
Ⅱ.下图为科学家采用不同方法培育良种牛的过程，请据图回答有关问题：

（1）与一般的繁育良种动物方式相比较，胚胎移植的优势是____________。在获取卵母细胞之前需用促性腺激素对奶牛进行处理，目的是____________。
（2）“转基因牛”D培育过程中作为外源基因的受体细胞，主要原因是____________。
（3）图中数字标号③代表的结构为______，③将来发育为______，c→d过程需对其均等分割的目的是______和______。 A、B牛基因型是否相同？______。
（4）以上培育过程中，用到的生物技术名称是____________（至少答两个）。

【推荐3】某科研所对高产奶牛的繁殖进行研究，部分数据如下表所示。回答下列问题：

超排供体（头）	头均获胚胎（枚）	头均可用胚胎（枚）
1501	5.6	3.6

(1)超卵是超数排卵的简称，让供体达到该目的，则需要给供体注射________。
(2)由表格可知，并不是每个胚胎都可以使用，现分六组对不可用胚胎进行检查，以分析原因，则每组可获得的不可用胚胎数约为__________个，从中选择一个胚胎观察其染色体的数目，则最佳观察时期是________，观察后染色体数目是配子的三倍，这是多精入卵造成的，多精入卵的产生说明________失效。
(3)诱导小鼠细胞与去核的卵母细胞融合通常采用的方法是________，用物理化学方法激活重构胚的目的是________。
(4)若可用胚胎都能发育成个体，则后代为雌性的概率为________。为提高后代雌性概率，可对可用胚胎的滋养层细胞的DNA 进行 PCR，选择SRY 基因（该基因位于 Y 染色体上的性别决定基因）________（填“阳性”或“阴性”）的胚胎进行移植。
(5)代孕个体对移入子宫的重构胚________，这为胚胎在受体内的________提供了可能。
(6)胚胎分割可以增加胚胎数量，在对胚胎进行分割时要注意________。

【推荐1】2016年10月19日美国新希望生殖医学中心正式宣布，世界首个核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生。为中东一位线粒体携带有亚急性坏死脑病基因的母亲带来了希望。培养过程如下图，据图回答：

（1）获得重组卵母细胞A也会用到体细胞核移植技术，完成①过程需要用微型吸管吸出______________，完成④过程的B细胞需要选择_______________________（时期）的卵母细胞。
（2）卵母细胞的获取过程中，需要对女性进行超数排卵处理，超数排卵的方法是给女性注射_______激素，超数排卵技术带来的危害之一是______________________________________________________。
（3）为了提高已有胚胎的利用率，可采用________________技术。若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意的问题是_______________________________________。
（4）根据___________(填标号)判断，此种繁殖方式是________生殖。细胞A的培养过程③所需气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是___________________________。
（5）设计试管婴儿技术与解决不孕问题而进行的试管婴儿技术的主要区别是前者需要在植入前对胚胎进行______________________________。

【推荐2】猪瘟病毒能与猪细胞膜上的LamR受体蛋白结合，进而侵入细胞引起猪瘟。利用基因编辑技术改变LamR受体蛋白基因，使LamR受体蛋白不能与猪瘟病毒正常结合，但不影响生理功能，从而培育出抗猪瘟病毒猪。基因编辑原理是由一条人为设计的单链向导RNA（sgRNA）引导Cas9蛋白到特定的DNA位点进行切割，从而完成对目的基因的编辑。基因编辑过程如下图所示。

（1）据上图，Cas9蛋白功能是________；向导RNA依靠___________与特定的DNA位点结合，其碱基序列具有高度特异性，这可以避免_____________ ， Cas9蛋白与向导RNA的复合物在功能上类似于___________。
（2）通过基因编辑技术改造前后的两种LamR基因之间的关系是___________。
（3）培育抗猪瘟病毒猪，一般选择______________作为基因编辑的受体细胞；改造后的受体细胞经培养发育到适宜阶段时，可将其进行冷冻保存或____________。为保证胚胎成活率，接受胚胎的母猪应进行___________处理。获得的抗猪瘟病毒猪最后还要进行___________，以判断改造是否成功。

【推荐3】人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值。科研人员通过生物工程技术获得转HSA基因奶牛，并通过乳腺生物反应器生产HSA，其主要技术流程如下图所示：

回答下列问题：
（1）如上图所示，供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10代以内的细胞，其原因是 _______________________________________________________________。
（2）SRY-PCR法性别鉴定的基本程序是：提取牛胎儿成纤维细胞的DNA，经PCR反应体系扩增SRY基因（Y染色体上特有的性别决定基因）片段，然后对扩增产物进行检测。

要大量获得SRY基因，PCR扩增时需要加入两种引物：__________________（选填“引物I”、“引物II”、“引物III”、“引物IV”），原因是DNA聚合酶只能从核苷酸链的______________开始延伸DNA链，用两种引物才能确保______________。除引物外，PCR反应体系中还包含缓冲液、模板DNA、____________和 ____________等成分。通过SRY-PCR法进行性别鉴定，可获得更多的转HSA基因________牛，以便其通过乳腺生物反应器生产人血清白蛋白。
（3）在胚胎移植操作中，应对供体和受体母牛进行_____________处理，目的是使供体和受体处于相同的生理状态，使胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致。由此可见，胚胎移植的实质是_____________________________________________。

【推荐1】如图是培育优良种牛的流程图，a、b为操作过程，请据图回答有美关问题：

（1）a过程的技术名称是_________。此前，精子要进行______处理，此后，应将受精卵转入发育培养液中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。
（2）卵细胞是由良种奶牛提供的，提供精子的公牛和接受胚胎的受体母牛是否也都要求是良种？为什么？__________________________________________________________________。
（3）b过程常用的方法是_____________，检测外源基因是否在转基因牛D中表达成功的方法是_______；要从转基因牛D的牛奶中提取外源基因蛋白，在构建基因表达载体时应将外源基因与_______相连。
（4）为取得A、B同卵双胎，应在胚胎发育的_________期用机械方法将胚胎分割，其操作要注意_______，以免影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

【推荐2】请回答下列现代生物科技相关问题：
（1）利用基因工程技术，可以获得乳汁中含有药用蛋白的动物，这种动物叫做 乳腺生物反应器。为了获得该动物，需将药用蛋白基因与_______基因的启动子等调控组件重组在一起，构建基因表达载体，通常采用_______技术将该基因表达载体导入哺乳动物的受精卵中，经早期胚胎培养、胚胎移植到______________________动物体内，最终获得具有所需性状 的动物。欲提高胚胎的利用率，可采用胚胎分割技术，胚胎分割是指采用________ 方法将早期胚胎切割成 2 等份、4 等份或 8 等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。
（2）若从DNA分子中利用PCR技术扩增药用蛋白基因，经_____次循环后 可获得只含有药用蛋白基因核苷酸序列的 DNA 片段。
（3）若将药用蛋白基因导入植物细胞，可以用组织培养得到的_____（答一项即可）等为材料，经过人工薄膜包装得到人工种子，人 工种子在适宜条件能够萌发长成幼苗。
（4）若受体细胞为大肠杆菌细胞，则需从导入质粒的受体细胞中筛选出真 正导入重组质粒的细胞，该原理为：许多大肠杆菌的质粒上含有lacZ 基因（内含 EcoRI 的酶切位点），其编码的产物β﹣半乳糖苷酶在X﹣gal 和IPTG存在下， 可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。原理如图所示。请据 图回答：

菌落①②③中颜色为白色的是_____，原因是_____。

【推荐3】1997年，科学领域发生了一件大事，这就是克隆羊“多莉”的诞生。20多年过去了，科学家利用体细胞核移植技术克隆出了许多其他哺乳动物，如猪、牛、羊、猫、狗等。
事实上，这期间也有很多学者曾尝试克隆与人类更加接近的非人灵长类动物。1999年，俄勒冈国立灵长类研究中心成功用胚胎分割的方式克隆出一只恒河猴，即胚胎发育到8细胞时，人为地被分为2个4细胞的胚胎，再分别发育。该方法并非使用常规的动物克隆技术体细胞核移植进行，因此无论从科学意义还是实用性上，都比较受限。除此之外，多名科学家尝试用体细胞核移植技术克隆非人灵长类动物，但是均未成功。
分子生物学研究揭示，某些环境因素虽然没有改变基因的碱基序列，却会引起基因序列等的特定化学修饰，即表观修饰，进而影响基因表达。有科学家发现，高度分化的细胞核很难表现出全能性的本质在于其表观修饰。DNA甲基化是重要的修饰途径。如果在克隆的过程中加入去甲基化酶Kdm4d，就可以“擦掉”体细胞核基因的一些关键的表观遗传修饰，让体细胞核重新表现出全能性。
中国科学家在细胞核转移后，向融合细胞中注入去甲基化酶Kdm4d的mRNA，去除组蛋白甲基化修饰，并用组蛋白去乙酰化抑制剂TSA处理细胞时，能极大地改进滋养体发育和在代孕母猴中成功怀孕的比例。

（1）本文讨论的生物学话题是______________________________________________。
（2）细胞分化过程中，基因发生了什么样的变化？__________________________
（3）克隆猴与图中哪一只猴子最像？说明原因。_____________________________
（4）根据文中信息，图中“激活”的操作是什么？______________________________
（5）比较利用胚胎分割和体细胞核移植技术得到的克隆生物的异同点。_____________________
（6）请分析核移植克隆动物的局限和研究方向。除了用猴的胚胎成纤维细胞（体细胞）进行核移植之外，科学家还尝试用成年猴的卵丘细胞（体细胞）进行核移植，但这种方法得到的两只小猴子出生后表现畸形，并很快夭折。实际上，在获得克隆羊多莉时，进行了277次乳腺细胞核移植，获得29只胚胎，有13只植入代孕羊的子宫，只有1只小羊出生；用猴的胚胎成纤维细胞进行核移植时，有21只代孕猴妈妈，6只怀孕，只生出2只健康猴宝宝；用猴的卵丘细胞进行核移植时，有42只代孕猴妈妈，22只怀孕，仅生出的2只猴宝宝均夭折。__________________________________