【推荐1】透明质酸是一种应用广泛的粘性多糖，研究者欲改造枯草芽孢杆菌，通过添加诱导型启动子来协调菌体生长与产物生产之间的关系。
(1)为通过外源添加诱导剂来控制基因的表达，研究者选择了含木糖诱导型启动子的p质粒，其中EcoRV酶切位点的识别序列为5'-GATATC-3'，Xbal酶切位点的识别序列为5'-TCTAGA-3'。透明质酸合成酶基因H以a链为转录模板链。利用PCR扩增H基因时，需要在引物的5'端添加限制酶识别序列。为了使图1中酶切后的H基因按照正确的方向与p质粒连接，依据图中已知碱基序列，PCR引物的碱基序列为_____。   
(2)为协调菌体生长与产物生产之间的关系，将构建好的重组质粒转入经_____处理后的枯草芽孢杆菌（D菌），在含_____的培养基上筛选，得到枯草芽孢杆菌E（E菌）。对E菌进行工业培养时，培养基应先以蔗糖为唯一碳源，接种2小时后添加_____，以诱导E菌产生更多的透明质酸。
(3)外源质粒在细菌细胞中遗传不稳定、易丢失，研究者尝试将重组质粒进行改造，利用同源区段交叉互换的方法将H基因插入枯草芽孢杆菌D的基因组mpr位点，得到整合型枯草芽孢杆菌F（F菌）。请在图2方框中画出F菌的基因组_____。

(4)对三种枯草芽孢杆菌进行培养，结果如图3。结合上述研究，请选择适宜工业发酵生产的菌种并阐明理由_____。

【推荐2】黄曲霉毒素B1 (AFB1)存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起瘤变。某些微生物能合成AFB1解毒酶。将该酶添加在饲料中可以降解AFB1，清除其毒性。下图为采用基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图

请回答：
（1）基因工程常见的运载工具(体)有______________。将目的基因导入酵母细胞，最常用的化学方法是______________。
（2）酵母细胞导入AFB1解毒酶基因后，采用______________技术，检测到AFB1解毒酶基因存在酵母细胞内。实验发现酵母菌中没有检测到合成的AFB1解毒酶，分析原因可能是______________。
（3）采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是:从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的__________________________________。
（4）生态工程需遵循其基本原理，系统整体性原理强调各组分之间要有______________，只有这样地才能顺利完成能量、物质、信息等的转换和流通，并且实现___________________。

【推荐3】应用生物工程技术可获得人们需要的生物新品种或新产品，请据图回答：

（1）在培育转人生长激素基因牛过程中，①过程需要的工具酶是_______ 、 _________，②过程常用的方法是__________。
（2）转人生长激素基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有__________。
（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是__________细胞，Ⅲ代表的细胞具的特点是__________。
（4）在抗虫棉培育过程中，经④过程，重组Ti质粒使目的基因进入受体细胞，并整合到该细胞的__________上。

【推荐1】2016年10月19日美国新希望生殖医学中心正式宣布，世界首个核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生。为中东一位线粒体携带有亚急性坏死脑病基因的母亲带来了希望。培养过程如下图，据图回答：

（1）获得重组卵母细胞A也会用到体细胞核移植技术，完成①过程需要用微型吸管吸出______________，完成④过程的B细胞需要选择_______________________（时期）的卵母细胞。
（2）卵母细胞的获取过程中，需要对女性进行超数排卵处理，超数排卵的方法是给女性注射_______激素，超数排卵技术带来的危害之一是______________________________________________________。
（3）为了提高已有胚胎的利用率，可采用________________技术。若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意的问题是_______________________________________。
（4）根据___________(填标号)判断，此种繁殖方式是________生殖。细胞A的培养过程③所需气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是___________________________。
（5）设计试管婴儿技术与解决不孕问题而进行的试管婴儿技术的主要区别是前者需要在植入前对胚胎进行______________________________。

【推荐3】我国全面放开二孩政策已正式实施。一些高龄产妇希望通过试管婴儿技术圆二胎梦。请回答以下相关问题:
（1）由于女性的自然周期产生的卵子太少，在取卵前通常需要注射促性腺激素，而不通过服用雌激素来直接促进更多的卵泡发育，原因是___________________________________。
（2）在体外受精前，医生借助超声波探测仪等工具用吸卵针从某女士卵巢中吸取卵母细胞；随后将取出的卵母细胞置于与____________中相似的环境，让它进一步发育成熟。受精过程中，精子顶体内含有的顶体酶能协助精子穿过____________，接触卵黄膜。
（3）胚胎的早期培养与动物细胞培养一样，都需要满足____________及相应的气体环境、营养等条件。
（4）对移植的胚胎进行性别鉴定时，要先从胚胎细胞中提取DNA，下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的有________________________。
A.DNA在2mol/LNaCl溶液中的溶解度大于在0.14mol/LNaCl溶液中的
B.实验中用冷却的酒精，可以进一步提取含杂质较少的DNA
C.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝
D.人血液中的红细胞可以作为提取DNA的材料
（5）若做试管婴儿的夫妇中，妻子患有线粒体疾病（线粒体DNA缺陷），丈夫正常，则子女患病情况为__________。若要获得健康的孩子，可通过特殊的设计试管婴儿技术即“三亲婴儿”（医生要去除女性捐赠者卵子中的细胞核，接着用母亲卵细胞中对应的遗传基因取而代之，最后再按照标准的试管婴儿技术进行培育）。“三亲婴儿”的获得过程，除运用胚胎工程的技术手段外，还要特别运用__________技术。

【推荐1】巢式PCR是一种特殊的聚合酶链式反应，使用两组不同的引物实现目标DNA片段的扩增。第一组外引物扩增出的DNA片段（中间产物）长度超出目标区域，第二组内引物称为巢式引物，其结合部位在中间产物内部的目标区域，从而扩增出目标产物，具体过程如下图所示。回答下列问题。

   

(1)巢式PCR反应体系中需加入模板、TaqDNA聚合酶、2种引物、Mg²⁺、__________、__________等。
(2)巢式PCR过程中反应温度最低的一步是__________。巢式PCR中外引物的第一阶段扩增和内引物的第二阶段扩增通常在不同的离心管中进行，可防止__________在第一阶段PCR中与模板结合。
(3)若直接用上图中的内引物对模板DNA扩增，则内引物与模板的非目标区域进行碱基互补配对的概率会__________（填“上升”或“下降”），不易得到目标产物。巢式PCR获得的产物特异性__________（填“高”或“低”）。
(4)家畜胚胎性别鉴定对畜牧业发展具有重要意义，科研人员利用多重巢式PCR技术同时扩增奶牛Y染色体上雄性决定基因（SRF）和常染色体上的酪蛋白基因（CSMS1），进行早期胚胎性别鉴定和胚胎移植，获得高产奶牛。请完成下表相关内容。

实验目的	方法步骤要点
囊胚样品DNA提取	选取__________细胞提取DNA
PCR引物的设计和合成	根据牛的SRY和CSMS1基因序列设计合成4对引物
PCR扩增	__________→变性→复性→延伸
鉴定分析	__________
__________	对受体奶牛注射孕激素
胚胎移植	将符合要求的胚胎移植到受体奶牛的子宫内

(5)下图是电泳鉴定的结果，其中1～5号为取自不同胚胎的DNA样品，A和B表示基因，则雌性胚胎是__________。

   

【推荐2】毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ)基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

(1)获取外源基因用到的工具酶是______________。
(2)在过程②中，用_______酶处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术，叫细胞克隆。未经克隆化的细胞系具有_______性。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的________，在培养过程中应将培养瓶置于___________培养。
(3)若要获得多只相同的转基因山羊，可对图中早期胚胎进行_______后进行胚胎移植。
(4)下列有关转基因山羊培育过程的叙述，错误的是_____________。
A.图中重组细胞的细胞核来自导入目的基因的细胞
B.重组细胞最初分裂时开始进行DNA复制和基因的转录
C.将早期胚胎（如早期囊胚）植入到代孕母羊的输卵管或子宫角部位
D.如果KIFⅡ基因的序列是已知的，则可用化学方法合成或用聚合酶链式反应扩增该基因

【推荐3】现代生物工程技术推动了传统行业的发展，对人类的生产和生活产生了越来越大的影响。下图是利用生物工程技术让羊通过分泌的乳汁生产治疗心脏病药物tPA的大致过程。请据图回答：

（1）步骤①所利用的技术名称是___________，为了快速扩增人tPA基因可以通过_______技术。在该技术反应体系中需要加入原料、酶和过量的引物等，若对一个含tPA基因的DNA扩增6代，则需消耗_____________对引物。
（2）步骤③的受体母羊事先应接受_____________处理。受体母羊对移入子宫的外来胚胎基本上不发生_____________，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。胚胎移植后需对受体母羊进行_______检查。
（3）步骤⑤是从羊分泌的乳汁中提取药物tPA，为了检测乳汁中是否含有所需药物可以用抗tPA蛋白的抗体进行_____________；利用羊分泌的乳汁提取药物tPA有哪些优点___________________。（写两点）

【推荐1】随着社会和科技的发展，人们越来越重视身体健康，然而传统医学技术尚存在诸多问题，现代生物技术的应用可为此类问题提供新的解决方法。
Ⅰ.寻求可替代器官解决器官短缺的难题，目前科学家借助CPISPR-Cas9基因编辑技术剔除猪的某些相关基因，用猪的器官作为供体。如下图为Cas9蛋白依据sgRNA片段切割DNA示意图（不同的sgRNA可以识别不同的DNA序列）请回答下列问题：

(1)DNA重组技术主要用到的工具酶包括限制酶和_____________，图中充当限制酶的是_____________。
(2)Cas9-sgRNA复合体能够精准识别某核苷酸序列的原因可能是______________。
Ⅱ.通过自体器官培养实现自体器官移植将病人的体细胞核放入去核的卵母细胞中，让重组细胞发育为早期胚胎，利用胚胎干细胞诱导分化为特定的器官。
(3)目前核移植技术中普遍使用的去核方法是_____________去核法。哺乳动物核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植，动物胚胎细胞核移植的难度明显低于体细胞核移植，原因是动物胚胎细胞_____________，恢复其全能性容易，而动物体细胞则相反。
Ⅲ.新冠疫苗研制的新方向，2020年新冠病毒正在全球肆虐，要想彻底消灭它，需要研制特定的疫苗，这需要漫长的等待。单克隆抗体技术是新冠疫苗研制的一个方向。
(4)生产抗新冠病毒单克隆抗体的过程，需要用到动物细胞工程中的______技术和_____技术。
(5)将获得的抗新冠病毒的单克隆抗体与药物结合制成“生物导弹”，注入患者体内，借助单克隆抗体的_____________作用，使药物在原位杀死病患细胞，体现了单克隆抗体在治疗疾病方面有广阔的前景。
(6)抗新冠病毒的单克隆抗体能准确诊断出某人是否感染新冠病毒，原因是______。诊断某人是否为新冠肺炎感染者，还可采用咽拭子取样检测，该技术检测的对象及物质是________。若某人已经确诊为新冠肺炎的重症患者，除注射抗新冠病毒的单克隆抗体外，还可以注射已康复患者的_____________以达到治疗该病的目的。

【推荐2】结核病是由结核杆菌引起的人畜共患病。结核杆菌通常以气溶胶形式传播，气溶胶颗粒被肺泡吞噬细胞吞噬，吞噬细胞破裂导致结核杆菌在机体内进一步传播。羊痒病是由正常细胞的非致病性朊蛋白异构化为痒病朊蛋白所致。为研制既能抗结核病又能抗羊痒病的双抗羊，科学家进行了如下操作。

(1)小鼠SP110基因是目前发现的具有抗结核杆菌感染功能的基因。为了验证SP110基因的功能，同时也为了验证山羊吞噬细胞特异性启动子MSR可以启动SP110基因在吞噬细胞内的表达，设计以下三组实验。实验组将MRS启动子与小鼠SP110基因形成融合基因，用___________将融合基因与质粒构建成重组质粒，导入山羊肺泡吞噬细胞（组2）。以___________（组3）和转入空质粒的山羊吞噬细胞为对照组（组1）。分别接种等量的结核杆菌，72h后加入_____________使吞噬细胞破裂，取裂解液进行涂布培养，结果如图1。由图可知小鼠SP110基因可用于双抗羊的研制，依据是________________。
(2)非致病性朊蛋白是由山羊13号染色体上的PRNP基因的第三外显子控制合成的，PRNP基因的结构如图2。以L4和R1为识别位点设计TALEN敲除载体，对山羊成纤维细胞L4与R1之间的序列实施定点敲除。然后，将TALEN敲除载体与供体DNA载体共转化幼羊成纤维细胞，可将SP110基因定点敲入PRNP基因的第三外显子中，原理如图3。请指出图4中的数字分别代表的结构。1_______2______3_______4________经______________检测，山羊成纤维细胞中非致病性朊蛋白基因和SP110基因的表达情况是___________________。
(3)欲用上述细胞获得双抗羊，需要用到的技术有_____________（至少写出三项）。

【推荐3】科研人员利用生物工程技术对干扰素基因缺失小鼠进行基因治疗，技术流程如图，分析回答

⑴步骤①的技术名称_________。
⑵将基因导入ES细胞而不是上皮细胞是因为____________。
⑶步骤③中，需要构建含有___________________的基因表达载体。之前利用PCR技术扩增目的基因，可以从图2的ABCD四种单链DNA片段中选取_______作为引物。对干扰素基因片段和质粒进行酶切时，可选用限制酶的组合为________________或_________。
⑷将步骤③获得的ES细胞在荧光显微镜下观察，选择发___________色荧光的细胞进行体外诱导。为检测干扰素基因是否表达，可以采用_________________________的方法。