【推荐3】虾青素可由β-胡萝卜素在β-胡萝卜素酮化酶（BKT）和β-胡萝卜素羟化酶（CRTR-B）的作用下转化而来，具有抗衰老、增强免疫、保护心血管等功能，杜氏盐藻是单细胞浮游植物，生长快，易培养，能大量合成β-胡萝卜素，科研人员将BKT基因和CRTR-B 基因导入杜氏盐藻，构建杜氏盐藻细胞工厂高效生产虾青素。

(1)获取目的基因：雨生红球藻是天然虾青素重要来源，提取雨生红球藻的总 DNA为_____， 设计特异性引物扩增 BKT基因和CRTR-B 基因，此过程需要_____酶的催化。
(2)构建转化载体：“无缝克隆法”是构建重组质粒的新方法，指利用同源重组酶将末端具有 一致同源序列的线性化载体和目的基因连接形成重组质粒，图1表示利用“无缝克隆法”向质粒中插入抗除草剂基因的基本过程。
I．PCR获取抗除草剂基因过程中，为确保基因两端具有所需同源序列，需在引物的_____端添加对应的同源序列 。若要确保抗除草剂基因能够从重组质粒中切除，还 需要在基因两侧加入限制酶识别序列，则所需引物（5^，一3^，）的序列应为：_____。
A．同源序列十特异性扩增引物序列十限制酶识别序列
B．同源序列十限制酶识别序列十特异性扩增引物序列
C．特异性扩增引物序列十限制酶识别序列十同源序列
Ⅱ．科研人员利用“无缝克隆法" 同时将 BKT基因和CRTR-B 基因插入质粒，形成的重 组质粒对应部位如图2所示，推测此过程扩增 BKT基因所用的引物为_____； 扩 增CRTR-B基因所用的引物为_____；
Ⅲ．最终形成的重组质粒如图3所示，其中atpA启动子和 psbA启动子均为杜氏盐藻叶 绿体启动子，选用内源性启动子的目的是_____；
Ⅳ．与传统的酶切法构建重组质粒相比，“无缝克隆法"具备的优势有_____。
(3)准备受体细胞：选取初始杜氏盐藻涂布到杜氏盐藻固体培养基进行培养，一段时间后，挑取生长状态良好的单藻落到杜氏盐藻液体培养基中继续培养，期间可取藻液滴入_____，在显微镜下进行计数，两次培养的目的分别为_____、_____。
(4)目的基因导入及相关检测：采用基因枪法将重组质粒导入杜氏盐藻叶绿体，一段时间后，用含 _____的培养基筛选已转化的杜氏盐藻，通过相关技术检测是否成功表达_____。
(5)叶绿体转化是植物基因工程的新热点，叶绿体的诸多特点为叶绿体转化提供优势，如叶 绿体基因组小，功能清晰，使基因操作方便；叶绿体细胞具有自我复制功能，一个植物细 胞可含有多个叶绿体，每个叶绿体中含有多个基因组，可大大提高_____；另外，叶绿体基因位于细胞质中，可有效避免_____。