【推荐2】利用基因工程技术，可以让哺乳动物批量生产药物。如图为利用乳腺生物反应器生产血清白蛋白的技术流程。回答下列问题：

   

(1)①过程为构建基因表达载体，其目的是___。为使血清白蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达，应将血清白蛋白基因与___的启动子重组在一起。
(2)构建好的基因表达载体常利用___技术导入动物受精卵中。为筛选雌性胚胎，在胚胎移植前应从囊胚中的___取样做DNA分析，鉴定性别。
(3)④过程指___，该过程的实质是___。
(4)利用乳腺生物反应器生产蛋白质类药物的优势有___（答出一点即可）。

【推荐3】Brazzein是一种天然植物甜味蛋白，具有甜度高、能量低、稳定性好等优点，未经折叠的 Brazzein的甜味明显下降。因产 Brazzein的植物生长条件苛刻，在原产地之外不能结实，所以人们利用基因工程技术，让 Brazzein基因在微生物、真菌和动植物体内表达，并都取得了一定进展。请回答下列问题：
（1）为获得 Brazzein基因需构建cDNA文库，该过程要以mRNA为模板，构建的cDNA文库__________（填“含有”或“不含”）启动子序列。利用PCR技术扩增从cDNA文库中获取的目的基因时需要目的基因中一段已知的核苷酸序列，以便根据这一已知序列合成____________________。
（2）将人工合成的Brazzein基因导入大肠杆菌时要先用Ca²⁺处理大肠杆菌，其目的是____________________；再将重组基因表达载体溶于缓冲液中与大肠杆菌混合。若要让 Brazzein从动物的乳汁中获得，需将 Brazzein基因和____________________重组在一起，并且选用__________作为受体细胞。
（3）从大肠杆菌中获得的Brazzein的甜味远远不及从动物的乳汁中获得的 Brazzein，导致这种现象的原因是________________________________________________________________________________。

【推荐1】植物细胞工程在农业、医药工业等方面有着广泛的应用，并且取得了显著的社会效益和经济效益。请根据以下材料回答相关问题：
Ⅰ.下图为科学家利用比目鱼的抗冻基因培育转基因抗冻西红柿的过程示意图。据图回答下列问题：

(1)①过程中由mRNA得到DNA的过程中用到的酶是________。②过程中构建重组质粒时，相关酶作用的化学键是__________。抗冻基因需要转移到农杆菌的________上，才能进一步转移到西红柿细胞中。
(2)③过程中培养形成愈伤组织的培养基中生长素的浓度_________(填“大于”“等于”或“小于”)细胞分裂素的浓度。
Ⅱ.生姜既是一种重要的调味蔬菜，又具有较高的药用价值。科研人员对生姜的繁殖以及药用价值开展了一系列研究。
(3)生姜通常采用无性繁殖的方式进行生产，但感染的病毒很容易在植株体内累积。生姜的茎尖分生区附近无病毒，可作为组织培养的_______，经脱分化形成愈伤组织，进一步培养可获得_______进行大量种植。
(4)生姜块茎可以提取生姜精油，为进一步研究生姜精油的药用价值，科研人员进行实验研究发现生姜精油还有抗衰老的作用，向果蝇饲料中添加不同浓度的生姜精油后，测定衰老相关基因的表达量，结果如下图。
   由图可推测这三种基因与细胞衰老的关系是_______表达的产物能延缓细胞衰老，______表达的产物能促进细胞衰老。

【推荐2】下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8 Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度。请据图回答：

（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是_____、_____。
（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到_____酶和DNA连接酶。
（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用_____酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和_____kb，或者_____kb和_____kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。

【推荐3】微生物吸附是重金属废水的处理方法之一。金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在于动植物中的金属结合蛋白，具有吸附重金属的作用。科研人员将枣树的MT基因导入大肠杆菌构建工程菌。请回答下列问题。

(1)从枣树相关细胞中提取____，通过逆转录获得枣树的MTcDNA，然后根据枣树MTcDNA的核苷酸序列设计了相应的引物（图1甲），以通过PCR扩增MT基因。已知A位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置。选用的引物组合应为____，这些引物的长度一般包含15～23个碱基，过短会导致____差。若1个MTcDNA扩增n次，则总共消耗引物____个。
(2)本实验中，PCR所用的____酶扩增出的MT基因，其末端为平末端。由于载体E只有能产生黏性末端的酶切位点，需借助中间载体P将MT基因接入载体E。载体P和载体E的酶切位点及相应的酶切序列如图1乙所示。

①选用____酶将载体P切开，再用____酶将MT基因与载体P相连，构成重组载体P'。

②选用____酶的组合对载体P'和载体E进行酶切，将切下的MT基因和载体E用酶连接，将得到的混合物导入到用____离子处理的大肠杆菌，然后筛出MT工程菌。

(3)MT基因在工程菌的表达量如图2所示，结果仍无法说明已经成功构建能较强吸附废水中重金属的MT工程菌，以下叙述中能支持该观点的是____。

①尚未对MT工程菌合成的MT蛋白的活性进行测定

②尚未对MT工程菌吸附重金属的能力进行鉴定

③尚未在个体生物学水平进行抗原-抗体杂交

④尚未对MT基因进行碱基序列的测定和比较

【推荐1】2N/4N嵌合体胚胎是指将四倍体（4N）胚胎与二倍体胚胎（2N）或胚胎干细胞（ES细胞）进行聚合，形成的由二倍体和四倍体细胞组成的嵌合体。构建2N/4N嵌合体胚胎的常用方法如图，请据图分析回答：

(1)图中的卵细胞达到___期，才具备受精的能力，而精子需经过___过程才能与卵细胞结合。
(2)2N的ES细胞来自胚胎发育过程的___期，本实验中，从功能上说明该细胞___。
(3)2N/4N嵌合体胚胎构建过程用到的现代生物工程技术主要有：___（答出2项即可）。
(4)图中得到的嵌合体小鼠与体外受精得到的小鼠相比，最主要的区别是什么?___（从个体基因型是否相同的角度分析）。

【推荐2】 M 基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源DNA片段F插入M 基因的特定位置，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得M 基因失活的转基因克隆动物A，流程如图所示。回答下列问题：
   
(1)在构建含有片段F的重组质粒过程中，切割质粒DNA的工具酶是_________；常用_________方法将重组质粒导入成纤维细胞。
(2)在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是_________，在培养过程中细胞往往会贴壁生长这种现象称为_________。
(3)胚胎移植时的早期胚胎一般选_________期的胚胎；移植后一般不会发生免疫排斥反应，原因是_________。
(4)以免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，诱导融合的方法是_______（答出一点即可）。 筛选融合杂种细胞，制备M蛋白的单克隆抗体。简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M 基因是否失活的实验思路_________。

【推荐3】我国得到克隆猴的技术流程如图1所示。回答下列问题：

(1)通常通过显微操作处理进行“去核”，此处的“核”是指____，“去核”的目的是____。
(2)胚胎移植前，还需要对代孕母猴进行激素处理，以保证胚胎能够继续发育，胚胎移植的实质是____。
(3)获得的克隆猴与胎猴样貌有一些差别，主要原因是____，克隆猴的获得说明____具有全能性。
(4)体细胞克隆猴的技术难点之一是胚胎发育率低。上图中的Kdm4d为组蛋白去甲基化酶，科研人员为确定Kdm4d的mRNA的作用，进行了相关实验，其中A组用正常培养液培养重构胚，B组用正常培养液培养注入了Kdm4d的mRNA的重构胚，实验结果如下图2所示。根据实验结果推测， Kdm4d的mRNA的作用机理是____。

图2