【推荐1】埃博拉病毒（EBO）呈纤维状，目前分离出五种类型:，其中EBOV是一种烈性的、泛嗜性的病毒，它首先破坏吞噬细胞，其次是肝、脾等细胞，进而导致血管通透性增加，出现严重的出血热现象。目前尚无针对该病毒的特效药或疫苗。

（1）EBOV感染者的血清中很难形成高浓度的抗体，这是因为___________________________。
（2）较难制作EBO疫苗的原因与其遗传物质的种类以及表达方式有关。EBO病毒容易变异，这是因为____________________________________________________________________。
（3）EBO基因组为单股负链RNA，负链RNA的互补链才能与核糖体结合。EBO基因组在人体细胞内表达蛋白质的过程是（以遗传物质、箭头、过程名等表示）：________________________________________________________________
目前，抗击EBO的药物与疫苗的研制主要有两类技术。
技术类型一：细胞技术

（4）过程①获得的甲细胞是________细胞；过程②是____________；所用瘤细胞的作用是__________________。
（5）要获得纯净的单一品种抗体，上述操作的要点是__________________________________。
技术类型二：基因过程技术——转基因疫苗
EBO衣壳外有包膜，包膜上有5种蛋白棘突（GP蛋白和VP系列蛋白，见左图），其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞强烈识别。EBO基因组如右图所示。

（6）该技术的目的基因是 ________________。
细菌是疫苗生产重要的角色；腺病毒具有弱致病性，常被用来携带目的基因进入宿主细胞的运载体，腺病毒基因组如下图。其中基因E与复制、转录有关；基因L是腺病毒衣壳基因。

病毒在人体细胞内增殖会导致正常细胞裂解、死亡。因此，需要对腺病毒进行改造。图18表示转基因技术生产EBO蛋白疫苗与重组病毒粒子疫苗的基本过程。

（7）以EBO病毒包膜蛋白作为疫苗比较安全，其原因是_______________；缺点是______________
（8）生产含目的基因重组病毒粒子作为目的基因的运载体，优点是_________________________________________________；为保障安全，基因重组病毒粒子需要除去自身原本的一些基因，改用辅助质粒携带这些基因。则除去的基因主要是_______________________两类基因。
（9）辅助质粒携带EBO病毒上的这些基因，与EBO携带一样，均能在真核细胞中表达，说明_______________________________
左图中neo是新霉素抗性基因，amp表示氨苄青霉素抗性基因，ori是质粒的复制子，限制酶BamHI、 HindIII、 PstI、BglII作用位点如右图。

（10）要能在大肠杆菌中不断表达目的基因，同时又能提高重组效率，选择的限制酶是______________________
（11）要筛选出成功导入重组质粒的大肠杆菌，并准确定位所需大肠杆菌的菌落，实验室至少需要两种培养基，他们分别是________________________________两种培养基。

【推荐2】下图为植物体细胞杂交过程，据图回答：

(1)①过程是____________，目前最常用的方法是__________

(2)②过程的发生需要进行________，通常利用显微操作、离心、振动、电刺激等________法，而化学法常用________作诱导剂。

(3)原生质体融合的关键是____________，其结构基础是________________。

(4)融合后的原生质体会生出细胞壁，新细胞壁的产生与细胞内________(细胞器)有关。

(5)③   ④ 过程是一个________和________的过程，该过程中细胞分裂的主要方式是________。

【推荐3】现代生物工程技术推动了医药学、免疫学的发展，依据现代生物工程技术的相关知识和原理，回答下列问题：
(1)据权威机构预测到2100年，借助辅助生殖技术(即试管婴儿技术)诞生的人数可能将达到全球总人口的3.5%——约4亿人。试管婴儿技术是体外受精技术、早期胚胎培养和_________技术等人工助孕技术的俗称。通常情况下，医生会为受孕者移植1～3枚胚胎以提高受孕率，往往是借助于胚胎分割技术得到多个胚胎的，胚胎分割操作过程需要特别注意的问题是将_____________________________均等分割。
(2)人体器官移植面临的主要问题之一是免疫排斥。目前临床上提高器官移植成活率的主要措施是使用_____________________，如类固醇、环孢霉素A等，这些药物可使免疫系统中的_____淋巴细胞增殖受阻。人们还可以通过对患者的_____________________进行诱导定向分化培育出特定人造组织器官，进而解决免疫排斥问题。
(3)单克隆抗体制备融合体系中除含有杂交瘤细胞外，还有_________________，细胞融合体系中出现多种细胞类型的原因是_______________________________________________(答两点即可)。

【推荐1】红豆杉属于珍稀植物，比其他本土树木生长慢，从红豆杉中提取的紫杉醇具有独特的抗癌作用。目前，生产紫杉醇的主要原料是天然生长的红豆杉树皮。科学家利用植物组织培养的方法培养红豆杉的流程如图所示。请回答下列问题：

（1）①过程的目的是让已经分化的细胞失去其特有的___________________而转变成未分化细胞。②、③过程的实质是___________________。
（2）上述培养红豆杉的过程利用的生物学原理是_________，该过程可以使红豆杉的遗传特性______（填“不断提高”“保持不变”或“不断降低”）。
（3）为了从红豆杉中提取紫杉醇来获利，盗伐者大量剥取红豆杉树皮，造成树木的死亡和资源的破坏，这主要违背了生态工程的___________原理。
（4）科研人员尝试采用植物体细胞杂交技术培养能产生紫杉醇的速生“桉树---红豆杉”杂种植株。在进行体细胞杂交之前，必须先利用_________________酶去除植物细胞壁，获得具有活力的原生质体。进行原生质体间的融合时，常使用的化学诱导剂是____，利用植物体细胞杂交技术培育成的“桉树一红豆杉”杂种植株通常是可育的，其原因是_____________________。

【推荐2】在20世纪初，科学家用植物体细胞杂交方法，将白菜的原生质体和甘蓝的原生质体融合，成功地培育出了 “白菜——甘蓝”杂种植株，据图回答下列问题：

（1）植物体细胞杂交技术的原理有______________________。过程中所用的化学诱导剂一般是__________ ，过程b完成的标志是_____________。
（2）在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，与植物组织培养技术相同的过程为_____________，过程c涉及的分裂方式为__________________________。
形成了白菜—甘蓝植株是否可育？_____________。如果用传统的杂交方法不能产生可育后代，原因是____________________________________________________。
（3）在植物组织培养过程中，愈伤组织的成功诱导是至关重要的步骤。科学家研究了植物生长调节剂对某药用植物愈伤组织诱导的影响，实验结果如下表:

培养基编号	2，4-D/mg·L-1	6—BA/mg·L-1	愈伤组织诱导率（%）
L1	1.0	0	65.41
L2	2.0	0	68.76
L3	3.0	0	91.01
L4	3.0	0.2	54.48
L5	3.0	0.5	57.35
L6	3.0	1.0	51.71

注:愈伤组织诱导率（%）=产生愈伤组织的外植体数/接种外植体总数×lOO%。
①从上表可以知道，在基本培养基中添加较高浓度的_____________有利于形成愈伤组织，而添加__________则不利于愈伤组织的形成。
②在上述研究的基础上，为了探究光照对愈伤组织形成的影响:应将已经消毒过的外植体平均分为甲、乙两组，分别接种到________（填培养基编号）培养基上；甲组置于___________环境，乙组置于________环境，其它条件相同且适宜;培养一段时间后，分别计算甲、乙两组中愈伤组织诱导

【推荐3】回答与生物技术有关的下列两小题：
Ⅰ.甘蓝型油菜引入我国历史较短，其遗传基础狭隘。菘蓝（别名“板蓝根”）是传统中药材，具有广谱抗病毒特性。研究人员利用甘蓝型油菜（体细胞中染色体数为38）与菘蓝（体细胞中染色体数为14）进行体细胞杂交，培育抗病毒的甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系，过程如图1。

(1)甘蓝型油菜与菘蓝的体细胞经__________酶处理后获得原生质体，再经__________诱导获得融合细胞。融合细胞接种到含有营养物质和__________的培养基上，经__________过程形成愈伤组织，发育形成完整的再生植株F₁。植物体细胞杂交技术依据的生物学原理有：__________。（至少答出两个）
(2)将F₁与甘蓝型油菜回交，获得BC₁，其染色体组成为__________（只用字母表示）。用BC₁与甘蓝型油菜再一次回交，得到的BC₂植株群体的染色体数目范围是_______。
(3)研究人员从BC₂筛选出7种只含有1条菘蓝染色体的甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系（A、B、C、D、E、F、G）。为探究甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系在抗新冠病毒（SARS-CoV-2）中的作用，研究人员用其提取物处理动物细胞，24h后感染新冠病毒，一段时间后收集病毒细胞培养液，检测病毒的含量，结果如图2。

   

①作为标准参考的GADPH蛋白表达量__________，可排除无关变量对实验结果的影响。
②结果表明：__________。
③尝试说出建立甘蓝型油菜-菘蓝单体附加系在育种方面的意义：__________。（答出两个方面）
Ⅱ.母源因子是初级卵母细胞在减数分裂Ⅰ前期的后段开始产生并积累的mRNA和蛋白质，其对于调控动物早期胚胎的发育十分重要。为研究不同母源因子的功能，相应母源突变体的培育显得尤为重要。
(4)母源因子由母源效应基因通过基因__________过程产生，其产生并积累的时期由于同源染色体未分离，因此只有纯合突变的雌性个体的后代才是母源突变体。
(5)获得母源突变体的传统方法是反复交配与筛选。以母源效应基因A为例，科学家利用基因编辑技术将斑马鱼的一个A基因敲除后获得杂合子，记作（+/-）。如图1是获得母源突变体的杂交方案，请补全下图__________。

(6)传统交配筛选的方法存在耗时长、纯合的合子突变体的致死率高等缺陷。为了解决上述问题，科学家在CRISPR/Cas9基因编辑系统的基础上进行了改进。
①sgRNA编码序列能与相应靶基因序列发生碱基互补配对。为构建含有sgRNA编码序列的重组质粒，需对含有特定sgRNA编码序列的DNA用__________处理，然后将其插入到经相同酶处理过的质粒上。斑马鱼的卵母细胞与精子受精前停滞在减数分裂Ⅰ前期，此时还未开始合成母源因子，在此阶段前对卵母细胞进行基因敲除可避免母源因子的积累。
②为了实现卵母细胞中基因的特异性敲除，如图2所示，科学家将含有3个不同的但靶向相同基因的sgRNA编码基因的重组质粒组装到具有特殊元件的载体上，形成新的重组质粒后导入卵母细胞。

注：eflap—能够驱动基因广泛表达的启动子；EGFP—增强型绿色荧光蛋白基因；I-SecI一归位内切酶，可将质粒随机插入到斑马鱼的基因组中。
从理论上分析，一个sgRNA便能实现靶基因的敲除，请分析3个sgRNA串联有何优势，请答出2点__________。
(7)I-SecI介导的基因插入率并不能达到100%，请根据上述研究分析如何在斑马鱼早期胚胎中筛选出突变体，并说明理由_____。

【推荐1】2018年《细胞》期刊报道中国科学家率先成功地应用体细胞对非人灵长类动物进行克隆，获得两只克隆猴——“中中”和其妹妹“华华”。获体细胞郭母细胞得方法如下图所示。

(1)该过程用到的动物细胞工程的技术主要有__________、__________。
(2)在这项研究中，研究人员设计了两组实验：第一组是利用胎儿纤维组织母细胞(同一个流产的弥猴胚胎细胞)，作为融合细胞的细胞核来源；第二组实验，利用成年猴子的卵丘细胞作为融合细胞的细胞核来源。两组实验取得了不同的结果：在第一组实验中，21只代孕母猴中的6只成功怀孕，最终生下了2只健康的猴子，它们就是“中中”和“华华"；第二组实验中，42只代孕母猴中有22只成功怀孕，最后也有两只猴子出生，可惜的是，它们短暂存活后死亡。
①中中的性别为_______。
②第一组实验产生克隆猴明显比第二组容易。原因可能是_____________________。
③猴子作为灵长类动物比其他哺乳动物与人更接近，但克隆猴的成功并不是为了克隆人，而是在研究人与猴相近的某些遗传缺陷疾病时用克隆猴比非克隆猴更具优势，因为它可以很好的控制实验的_____变量，使其完全一致。

【推荐2】女性怀孕后会合成并分泌人绒毛膜促性腺激素（HCG），并且该激素会出现在尿液中。HCG是一种蛋白质，包括α亚基和β亚基。用抗人绒毛膜促性腺激素（HCG）单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”，在妊娠第8天就可以诊断是否怀孕。如图表示早早孕诊断试剂盒内部试纸条的构造，其中抗体1是以HCG的β亚基为抗原利用单克隆抗体技术制备，抗体2是以HCG的α亚基为抗原利用单克隆抗体技术制备，抗体3是针对抗体1的抗体，抗体2和抗体3分别固定在试纸条的检测 线（T线）和质控线（C线），抗体1进行了胶体金标记，该标记物可以在T线或C线处显色。回答下列问题：

   

(1)女性在妊娠第8天左右，尽管体内HCG含量很低，但仍可用抗人绒毛膜促性腺激素单抗制成的“早早孕诊断试剂盒”作出诊断，体现出单克隆抗体具有_____________的优点。
(2)图1中单克隆抗体2制备的过程中，需要反复向小鼠注射______作为抗原，然后从小鼠的脾脏中获取已免疫的B淋巴细胞，与小鼠的骨髓瘤细胞融合。经选择培养后获得的杂交瘤细胞的特点是_______。为了得到能够分泌所需抗体的杂交瘤细胞，需要进行克隆化培养和抗体检测，该过程一般在多孔细胞培养板上进行，先将细胞悬浮液稀释到7～10个细胞/mL，再在每个培养孔中滴入0.1mL细胞稀释液，其目的是___________。最后将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或________________，从而获取大量的单克隆抗体。
(3)图2表示三位女士的检测结果，其中表示没有怀孕的是______，检测结果无效的是______。出现甲结果的原理是________________________________________。

【推荐3】肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。请回答：

（1）进行过程①时，需用相关酶切开载体以插入let-7基因，该酶破坏的化学键是___________。重组载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，该部位称为___________，同时，重组载体还应有___________以驱动自身复制以及___________以鉴别受体细胞是否含有目的基因。
（2）进行过程②时，当细胞生长到表面___________时，需用___________酶处理贴附在培养皿壁上的细胞并进行________________后继续培养。
（3）研究发现，let-7基因影响癌基因RAS表达的机理如图2所示。据图分析，肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中_________含量减少引起的，作出该假设的依据是_________________________。

【推荐1】紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草，但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁，单宁可与植物蛋白质结合，不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的新型牧草，科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如下图：（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的功能）

(1)在制备两种植物原生质体时，先将两种细胞分别置于0．5-0．6mol/L的甘露醇溶液中，使细胞在较高渗透压环境下处于_____状态，从而有利于用____去除细胞壁，分别获得两种植物的原生质体。
(2)①过程可使用____诱导细胞融合，其中只有异源融合体才能存活和具有再生能力，请推测原因是_______
(3)步骤②为_____，从步骤②到步骤③需要更换新的培养基，其主要原因是培养物在不同的培养阶段所需的______不同。经过步骤②、③到形成再生植株，体现的主要原理是______。
(4)利用图示技术进行育种的优点是_______。
(5)谷蛋白是野生清水紫花苜蓿中含量较高的一种蛋白质，科研人员为比较植株不同部位谷蛋白的含量，想通过制备相应的单克隆抗体进行检测，部分流程如下图：

图中注射的特定抗原是_____。经过a步骤，细胞两两融合的产物有______种。在步骤b的基础上经过步骤c       ______和抗体检测筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，获得的杂交瘤细胞可采用体外培养的方式进行扩大培养，培养一段时间后可从______中提取单克隆抗体。
(6)百脉根花的提取液可用于生产护肤品，为研究百脉根花提取液对受损皮肤的修复效果，需要一批遗传性状基本一致的实验小鼠，研究人员从______（填“同一”或“不同”）小鼠个体中取出体细胞核进行体细胞核移植，形成的多个胚胎再通过_____技术，以进一步增加胚胎的数量，最后移植到经过处理_____的受体雌鼠中获得实验小鼠。

【推荐2】实验室欲采取措施加快某动物优良性状的繁殖，根据所学知识，回答下列问题：
（1）若想选用动物细胞核移植技术，应先从具有优良性状的动物身上获取其体细胞中的______，然后将其导入_______的卵细胞中，若想要使后代尽可能保留优良性状，则___________，激活重组细胞活性采用的技术是___________________。
（2）若采用试管牛的工厂化生产方式进行繁殖，先从公牛体内取出精子后用钙离子A23187溶液处理，处理的目的是_____________，同时为让母牛进行超数排卵，需要给母牛注射___________，待精卵发育形成受精卵后需要通过_______________将其导入母牛体内。
（3）如需对初期胚胎进行性别鉴定时，宜取囊胚期的__________细胞进行鉴定。
（4）在重组细胞进行早期培养时，需向培养箱中通入CO₂，其主要作用是____________。
（5）在胚胎工程中，常需进行冲卵，冲卵冲出的_________（是或不是）卵子。
（6）如想继续获得转基因牛，需将目的基因导入_______中，常用的方法为__________ 。

【推荐3】回答下列与生物技术工程有关的问题：
(1)抗体—药物偶联物(ADC)通过细胞素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤，ADC通常由抗体、接头和药物三部分组成，其作用机制如图，请回答下列问题

①ADC在治疗肿的作用是___________。
②细胞毒素药物对机体正常组织会有毒性，若抗体的选择性较差或正常组织存在与抗体对应的抗原，则会造成细胞毒素药物投递到________________，造成靶向毒性。
③接头不稳会造成________，在体内暴露，从而造成脱靶毒性。
(2)引物是一小段能与DNA母链的一段基序列补配对的短单链核酸，用于PCR的引物长度通常为20~30个核酸，在配对时引物是与母链的________(填“3′”或“5′”)端配对，在DNA聚合用下将4种脱核添加到引物的_______(填“3′”或“5′”)端。
(3)高产奶牛的繁殖可以通过克隆，普通奶牛提供卵细胞，高产奶牛提供体细胞核若研究发现供体高产奶牛细胞中线粒体发达，故它的产奶量高，则获得的克隆小牛成年后________(填“具有”或“不具有”)这一优良性，分析的依据是______________。