【推荐2】科学家以耐冷基因（Cbcor15a）和抗除草剂基因（Bar）为目的基因，以绿色荧光蛋白基因（eGFP）为报告基因，构建了由Ubi－1启动子调控的二元植物表达载体（如图1）。载体中的Kar^s为卡那霉素抗性基因。通过转基因技术培育出既抗除草剂又抗冻的水稻新品种。请分析并回答：
   
(1)目的基因的获取和基因表达载体的构建
①构建基因表达载体pCambia1300—Cbcor15a—Bar用到的工具酶有__________等。
②用PCR技术从基因文库中获取Cbcor15a基因，需设计特异性引物____________（从图2C1～C4中选择）。
③为实现Cbcorl5a—eGFP融合基因的共表达，制备该融合基因必须____________
(2)将目的基因导入受体细胞
①转基因农杆菌的制备和选择：将表达载体pCambia1300—Cbcor15a—Bar导入具有利福平（一种抗生素）抗性的农杆菌，用含____________的培养基选择培养，培养液中添加利福平的作用是____________。
②农杆菌侵染愈伤组织：将愈伤组织浸泡在含有诱导剂乙酰丁香酮和转基因农杆菌的转化液中进行转化。据图3分析乙酰丁香酮诱导转化的作用机理：_____
(3)转化植株的检测
①根据目的基因Cbcor15a和Bar设计一对引物，以转化的水稻细胞的DNA为模板，进行PCR扩增并电泳检测，需用____________为阳性对照、未转化的水稻叶片细胞的DNA为阴性对照。
②若用基因探针法检测目的基因，可通过引物浓度不对称PCR获得检测探针，其原理是通过不等量（一般是1：50～1：100）的一对引物扩增得到大量单链DNA。在开始的15个循环中，扩增产物主要是____________链DNA，在15个循环以后，____________（选填“限制性”或“非限制性”）引物将继续引导单链DNA的合成。因为双链DNA和单链DNA的分子质量差异显著，可通过____________法将其分离。
③转基因水稻个体水平的检测可根据植株是否具有____________（特性）来进行筛选。