1 . 尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请回答。

(1)如图是利用___法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步___到培养基的表面。除此方法外，获得纯培养物的接种方法还有___。
(2)在培养基上进行划线操作中，在2至5区域每次划线之前都要灼烧接种环的目的是___。
(3)下面是两种培养基配方：
表1：A培养基配方

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	葡萄糖	尿素	琼脂	H2O
1.4g	2.1g	0.2g	10.0g	1.0g	15.0g	1000mL

表2：B培养基配方

纤维素粉	NaNO3	Na2HPO4·7H2O	KH2PO4	MgSO4·7H2O	KCl	酵母浸膏	H2O
5g	1g	1.2g	0.9g	0.5g	0.5g	0.5g	1000mL

①微生物纯培养的操作步骤：___（用字母顺序回答）。
a.接种b.配制培养基c.灭菌d.分离和培养
②如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择___（填“A”或“B”）配方的培养基，在该培养基中加入酚红指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。
③据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是___（“自养型”或“异养型”）。
(4)三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数量。在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，取0.2mL稀释液涂布，得到以下统计结果：
甲同学涂布了1个平板，统计的菌落数是260；
乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数是210、240和246，取平均值232；
丙同学涂布了3个平板，统计的菌落数是21、212和256，取平均值163；
在三位同学的统计中，___同学的统计结果是相对准确可信的。按照该同学的结果，每毫升原液中的菌体数是___。用这种方法测得的菌体数比实际活菌数量___。

2 . 自然界里有多种微生物，将其进行合理的筛选、培养和应用，能给医药和化工等生产领域带来巨大经济效益。回答下列问题：
(1)对接种环或涂布器灭菌时用_____法。
(2)若要将微生物采用平板划线法进行分离操作，在固体培养基表面连续进行了5次划线，则需要对接种环灼烧_____次。平板划线在做第二次及其以后的划线操作时，要从上次划线的_____开始划线，最后一次划的线不能与第一次划的线_____ 。
(3)将接种后的固体培养基和一个未接种的固体培养基放入恒温箱中_____ 培养，以减少培养基中水分的挥发。其中，培养未接种的固体培养基是为了_____。

4 . 将大肠杆菌接种到适宜的细菌培养基上，加盖后，以不同的方式处理，并放置在不同的温度环境中，培养24h后，观察所得结果如表：下列判断中，正确的是（　　）

编号	a	b	c	d	e	f
处理方法	接种大肠杆菌	接种大肠杆菌，并覆一吸有抗生素X的圆纸片	接种大肠杆菌，并覆一吸有抗生素Y的圆纸片	接种大肠杆菌，表面全被醋覆盖	接种大肠杆菌	无接种菌
温度	40℃	40℃	40℃	40℃	0℃	40℃
观察结果	全表面呈浑浊	纸片周围呈现一片清晰区，其余表面呈浑浊	全表面呈浑浊	全表面清晰	全表面清晰	全表面清晰

A．编号a和f比较可知，有大肠杆菌的培养基表面会变浑浊

B．根据编号b和c的观察结果可知，抗生素Y有较强的杀菌能力

C．将编号e和a的结果比较可知，0℃的环境不适合大肠杆菌生长

D．若揭开编号f的盖子，24h后可观察到培养基表面出现浑浊

5 . 下列关于微生物实验中仪器的使用，正确的是（　　）

A．玻璃刮刀使用时要先灼烧灭菌，灼烧要充分，直到玻璃刮刀被烧红为止

B．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃

C．接种环经灼烧灭菌后，可伸到试管内接触培养基达到冷却目的

D．接种微生物后，应及时在培养皿盖上做标记

6 . 在分离、纯化细菌的实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）分别如图所示，a、b、c、d是划线的四个区域。下列叙述错误的是（　　）

A．接种环共灼烧了4次

B．每次划线前后都要对接种环灼烧灭菌

C．不能将a区和d区划线相连

D．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落

7 . 某化工厂为了处理排出污水中的一种有害的、难以降解的有机化合物A，研究人员欲通过筛选，并利用基因工程技术，培养高效降解该有害物质的“超级菌”。研究团队用化合物A、磷酸盐、镁盐和微量元素等配置了培养基，成功地筛选出能降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如图1所示，请分析回答问题。

   

(1)加化合物A的培养基从目的和功能来看属于___培养基，其目的是___。
(2)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量___的培养液，接入新的培养液中连续振荡培养，使目的菌数量扩增。振荡培养的目的是___。
(3)研究团队发现了一种脱氢酶基因X，有高效降解有害化合物A的功能，对X基因测序得知：编码区的一个碱基对A/T替换成C/G，可大大增强其降解能力。为改造X基因（图2），将人工合成的一段含有特定突变位点的单链寡核苷酸片段与带有目的基因的单链环状载体进行杂交；在相关酶的作用下进行DNA链的合成和连接反应，得到含有突变位点的双链载体。
①构建带有目的基因的单链载体，需要___酶和DNA连接酶，DNA连接酶催化目的基因片段和载体片段之间形成的化学键是__________ 。
②请在图2的◯中标出碱基___。

   

8 . 科研人员利用MRS-溴甲酚绿培养基，从传统臭鳜鱼中分离筛选到一株乳酸菌，并研究其对多种微生物的抑菌能力。MRS-溴甲酚绿培养基的配方见下表，乳酸能与碳酸钙反应出现溶钙圈，溴甲酚绿为pH显色剂，酸性显示黄色。科研人员分别将含有四种病原菌的培养基倒入A~D四个培养皿中，通过一定的方法使每个培养基上形成4个大小相同的小孔，标号为1~4。1号孔作为对照，2~4号孔中均加入100μL含有该株乳酸菌代谢产物的液体培养基，在适宜条件下静置培养24h，测量抑菌圈直径，结果如下图。下列叙述正确的是（       ）
MRS-溴甲酚绿培养基配方

物质	胰蛋白胨	葡萄糖	牛肉膏	碳酸钙	酵母粉	溴甲酚绿	番茄汁	琼脂
含量	10g/L	10g/L	10g/L	20g/L	10g/L	0.1g/L	200g/L	18g/L

A．分离筛选乳酸菌时，应选择具有溶钙圈的黄色菌落继续培养

B．应向1号孔中加入100μL无菌水作为对照

C．传统臭鳜鱼不容易变质与乳酸菌能抑制多种微生物的增殖有关

D．该株乳酸菌代谢产物对四种病原菌都有抑制作用，但对丁香假单胞菌的抑制效果最好

9 . 下列关于实验中出现异常现象的原因分析，合理的是（       ）

选项	实验名称	实验现象	可能原因
A	酵母菌的纯培养	对照组平板上出现菌落	无菌操作不规范
B	探究土壤微生物对淀粉的分解作用	实验组用斐林试剂检测不出现砖红色沉淀	加斐林试剂后未水浴加热
C	DNA的粗提取与鉴定	实验组试管中未出现蓝色	选择新鲜猪肝为材料
D	探究植物细胞的吸水和失水	加入清水后未出现质壁分离复原现象	使用的蔗糖浓度过高

A．A

B．B

C．C

D．D

10 . 金黄色葡萄球菌具有高度耐盐性，感染人体易导致肺炎肠炎等。某人饮用鲜牛奶后出现肠胃不适，怀疑是鲜牛奶中含有金黄色葡萄球菌导致，为验证这一推测，进行了如图实验。回答下列问题。

(1)实验中所用的肉汤培养基可为微生物提供的营养成分包括水、无机盐、________________、________________等；从培养过程分析，振荡培养的目的是________________。
(2)本实验接种环节方法为________________除本实验中方法外还有________________方法；后者除用于分离微生物外，还常用于统计样品中活菌的数目，依据是________________。
(3)实验中对培养基灭菌方法为________________，培养皿的灭菌方法为________________。