2 . 新冠病毒肆虐全球，给人们的日常生产、生活带来很大的影响，因此研发新冠病毒疫苗受到广泛关注。疫苗研制时常需要构建重组病毒载体，部分过程如下图所示，其中A~C表示结构或物质，NcoI、SphI、NheI、BamHI四种酶的识别序列和酶切位点详见下表。

限制酶	Nco I	Sph I	NheI．	BamH I
识别序列和切割位点	C↓CATGG	GCATG↓C	G↓CTAGC	G↓GATCC

（1）分析图中C的黏性末端可确定，需要用_______（填限制酶名称）切割质粒B。
（2）重组质粒1用_______（填限制酶名称）处理获得线性化片段，在缓冲液中将其与某克隆片段混合，适宜条件下成功连接。由图可知线性分子可以与克隆片段连接成环的原因可能是_______。连接后可得到的环状DNA分子最多有_______ 种（上述片段均足量且不考虑3个及以上DNA片段的连接）。
（3）获得的重组病毒载体可以导入工程菌，高效表达出_______用于制备疫苗。与减毒活疫苗比较，该类疫苗安全性更高，其原因是_______。
（4）新型冠状病毒感染人体后，其S蛋白识别人体细胞膜蛋白ACE2并与之结合，使病毒侵入细胞，同时会引起人体相应的免疫反应。重组人源蛋白ACE2可用于治疗新冠病毒肺炎，请推测该药物的作用机理：_______。

3 . 阅读以下资料，回答（1）-（5）题。
资料一：S蛋白是新冠病毒（SARS-CoV-2） 感染机体的关键组分，也是研制新冠疫苗的关键起点。2021年2月25日，由中国工程院院士陈薇领衔研发的以腺病毒为载体的疫苗获准上市注册申请，为我国乃至世界预防新冠疫情又增加了一件利器。下图为陈薇团队以缺失E₁等基因的人复制缺陷腺病毒（E₁基因是腺病毒基因组复制的关键基因）为载体的新冠疫苗研制流程示意图。

（1） HEK细胞是一种特殊的人胚胎肾源细胞，在该细胞中，质粒I和质粒II可在相关酶的作用下进行同源重组，形成含S蛋白基因的复制缺陷重组腺病毒。为保证上述重组腺病毒能够大量复制，HEK细胞应含有______基因及其表达产物。对获得的重组腺病毒除用PCR检测s蛋白基因外，还需用__________的方法检测S蛋白。
（2）与复制型腺病毒相比，利用复制缺陷腺病毒为载体制备成的疫苗的优点是___________。
资料二：疫苗从研制走向临床使用，需经动物实验和临床实验等多重检测，以保证其安全性和有效性。陈薇团队对上述复制缺陷重组腺病毒疫苗的特异性免疫反应及其保护效果进行评价。图1、2表示不同的接种剂量和接种方式对小鼠免疫的影响，图3表示接种不同剂量疫苗，14天后接种新冠病毒，72小时后检测小鼠肺组织的病毒含量。

（3） IFNy是一种能增强效应T细胞活力的淋巴因子，在免疫系统组成中，它与抗体均属于 _____。 由图1、图2结果可知，该疫苗可诱导小鼠产生明显的___________免疫。
（4）图3实验中对照组的处理为_________，结果显示疫苗对感染小鼠有明显的保护作用。为了达到最大的保护效果，该疫苗最适合的接种方式和剂量为_________________。
（5）有人认为，最近出现的变异新冠病毒有可能使该疫苗失去保护作用。你是否赞同他的观点？请说明理由。 __________________________________