【推荐3】新冠病毒的抗原性与感染性与其表面的S蛋白（刺突糖蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建S蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。请回答下列问题。

(1)①过程所使用的酶为______________，为保证PCR技术扩增S蛋白基因正常进行，该反应体系的主要成分有_____________。PCR技术中复性的目的是____________。
(2)PCR过程经过4次循环，消耗的引物的数量是______________个。
(3)构建好的重组质粒长度共2000bp，用限制酶HindIII及限制酶HindIII和BamHI分别对重组质粒进行切割并电泳，结果如图乙所示，可推测BamHI在重组质粒上有______________个酶切位点。
(4)腺病毒疫苗进入人体后，S蛋白基因利用人体细胞的蛋白质表达系统指导S蛋白的合成，其过程是S蛋白基因____________（用文字和箭头表示）。

【推荐1】研究人员利用生物工程技术，探究猪bmp15基因在不同组织细胞中的特异性表达。该工程技术基本流程如下图（EGFP基因控制合成增强型绿色荧光蛋白；过程②表示表达载体2成功导入各组织细胞）。请回答：

(1)过程①中，需利用_____________________限制酶处理表达载体1。
(2)过程②中，常采用 _______________技术将表达载体2成功导入受体细胞。
(3)培养受体细胞时，通常需在培养液中添加一定量的_________________，以防污染。
(4)在实验结果的基础上，提取上述猪肌肉细胞的__________（mRNA/DNA），利用标记的____________作探针，进行分子杂交，可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因。
(5)据实验结果推测，猪bmp15基因在_______________细胞特异性表达。

【推荐2】基因工程的相关技术可用于病毒检测，也可用于制备疫苗。利用荧光PC技术检测是否感染某种RNA病毒时，基本操作流程为：提取病毒的RNA→荧光PCR扩增反转录DNA→荧光检测。请回答下列问题：
(1)分离病毒的RNA通常在冰浴条件下进行，目的是抑制___________的活性，防止病毒的RNA降解。荧光PCR反应体系中需要加入的酶是___________，还需加入dATP、dCTP、dGTP、dTTP，其作用是______________________。
(2)荧光染料能掺入DNA双链中发出荧光，在游离状态下不发出荧光。若检测到荧光量达到某个临界值，则代表阳性，说明______________________，若检测出现“假阴性”现象，原因可能是______________________。
(3)某病毒的E蛋白和P蛋白会引起机体产生特异性免疫反应。构建重组活病毒载体疫苗时，获取该病毒的______________________插入腺病毒的基因组中。重组腺病毒侵染宿主细胞后，___________识别并结合启动子，利用宿主细胞翻译E蛋白和P蛋白，从而引发机体发生免疫反应。

【推荐3】人体肝脏细胞中的乙醛脱氢酶2（ALDH2）是人体酒精代谢中的关键酶，研究人员欲通过相应技术改造ALDH2，使其具有较好的溶解性。回答下列问题：
(1)研究人员可采用定点诱变PCR技术对_____进行改造，这属于_____工程的操作环节，该工程的基本途径是_____。
(2)利用一定的方法在ALDH2基因中部引入定点突变（G/C碱基对变为A/T），若N链为转录的模板链，则定点突变后的ALDH2基因转录合成的mRNA中该位点对应的碱基为_____。
   
(3)得到突变成功的ALDH2基因后，用乙图所示质粒构建基因表达载体，需在甲图ALDH2基因的左侧添加_____酶切序列，右侧添加_____酶切序列。构建完成后导入大肠杆菌细胞中，使用含_____的培养基进行筛选。
   

【推荐1】牛支原体是严重危害牛养殖业的一种病原菌，它能引起肺炎、关节炎等多种疾病。VspX蛋白是牛支原体表面的一种脂蛋白，在牛支原体感染宿主细胞时起黏附作用。科研人员制备抗VspX单克隆抗体，并进行相关研究。
(1)将等量的纯化VspX蛋白作为___________ 分别注射到5只小鼠体内，经过二次免疫后测定小鼠抗VspX抗体的免疫效果，取其中免疫效果最好的1号小鼠用于后面的融合实验。
(2)在融合前三天，对1号小鼠加强免疫一次，目的是_________ 。然后取小鼠的脾脏细胞用_______ 试剂诱导与骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到_________ 。
(3)一段时间后，将(2)所得细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，检测原理如下图。

   

①在检测时需要将VspX蛋白固定于固相载体表面制成 ______ ， 并加入多孔板培养槽中_______ (细胞、上清液)，即待测样本。加入待测样本后，需要用洗涤剂将________ 洗去。
②加入酶标抗体后一段时间，需要用洗涤剂将________ 洗去。
③加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表________ 。
将上述细胞经胰蛋白酶处理，制成细胞悬液，置于二氧化碳培养箱中进行扩大培养，提取抗VspX单克隆抗体与不同抗原进行杂交检测，结果如下图

   

(4)依据上图的实验结果表明抗VspX单克隆抗体不能与___________ 结合(图中数字)，具有很强的特异性，可用于后续关于牛支原体所引发相关疾病的___________ 等方面的研究。

【推荐2】研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗手段。

（1）原癌基因的作用是____________________。
（2）H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如图所示。制备免疫小鼠用的H蛋白（抗原）时，应构建胞外区基因，转入原核细胞表达并提纯。选择胞外区的原因是_________________。为了扩增出大量胞外区需要用到PCR技术。常规PCR技术一般包括变性、退火、延伸等步骤，退火的目的是________________________。设计引物是PCR技术的关键步骤之一，某同学设计的两组引物如下表所示。_________（填“引物对A”或“引物对B”）设计不合理，并说出不合理的理由：______________________________________。

引物对A	P1   AAGCCGGGCGCGCCCGGAA P2   TTCGGCCCGCGTTATGCGCG
引物对B	S1   GTCCGCTAGTGGCTGTG S2   AGCTGGCGTTTAGCCTCG

（3）制备抗H蛋白单克隆抗体时，需将H蛋白注射到小鼠体内。这样做的目的是_____________________________。制备抗H蛋白单克隆抗体时，需要用到细胞融合技术，该技术的主要优点是_____________________________________。
（4）治疗乳腺癌时，方法之一是单独使用抗H蛋白单克隆抗体，试写出治疗乳腺癌的另一种疗效高、毒副作用小的、不损伤正常细胞的方法：________________。

【推荐3】下面为制备单克隆抗体和多克隆抗体的示意图，据图回答下列问题。

（1）与传统克隆抗体相比，单克隆抗体的优点______________________________。
（2）给小鼠注射抗原的目的是________________，图中选用B细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，说明细胞膜其有_______________，如果仅考虑细胞的两两融合，其融合细胞有_______种类型。
（3）图中两次筛选的目的不同，其中筛选①的目的是筛选出_________________，所用培养基是特定的_____________培养基，筛选②的目的是筛选出______________________________。
（4）科学工作者正在研究的用于治疗癌症的“生物导弹”是将________________与________________相连。用“生物导弹”治疗癌症的方法优于化疗的原因是_______________________。
（5）由图中可看出，单克隆抗体的制备过程中，运用了动物细胞工程中的_____________和_____________两大技术。

【推荐1】胚胎干细胞必须从胚胎中获取，但这涉及伦理问题，因而限制了它在医学上的应用。科学家通过体外诱导成纤维细胞，获得了类似于胚胎干细胞的一种细胞，称为诱导多能干细胞（简称iPS细胞）。因为诱导过程无须破坏胚胎，而且iPS细胞可来源于病人自身的体细胞，因此iPS细胞的应用前景优于胚胎干细胞。如图为iPS细胞的获得及用其培育不同种细胞的示意图（c﹣Myc、KIf4、Sox2和Oct3/4等基因与细胞的脱分化有关）。回答下列问题：

（1）在对成纤维细胞进行培养时，常用胰蛋白酶处理使之分散成单个细胞，这说明细胞间的物质为___，___（填“能”或“不能”）用胃蛋白酶处理成纤维细胞，原因是___。
（2）在培养iPS细胞的过程中，培养基中应含有细胞所需的各种营养物质，并定期更换培养液。定期更换培养液的目的是___。为了给培养物提供无菌环境，可进行的操作是___。
（3）过程③④为iPS细胞提供的条件不同，分化得到的细胞不同，可知细胞分化是___的结果。若iPS细胞来源于病人自身体细胞的诱导，再将其分化出的细胞移入患者体内的优势是___。
（4）如果诱导iPS细胞定向分化为原始生殖细胞，该技术可能的应用是___。

【推荐2】现代生物工程技术推动了免疫学、畜牧业和生态工程的发展，回答下列相关问题：
（1）植物组织培养就是在____________和____________条件下，将离体的器官、组织、细胞，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生____________、丛芽，最终形成完整的植株。
（2）对大面积烧伤病人，借助____________技术可获取大量自身健康皮肤用于移植。培养的条件需要____________、合适的营养、适宜的温度和PH、通入含有95%空气和5%C0₂混合气体。
（3）用细胞核移植技术繁育良种牛的过程需要进行胚胎移植，移植前需要对受体进行____________ 技术处理，因受体对外来胚胎基本不发生____________，为胚胎的存活提供了可能。
（4）依据生态工程的____________原理，黄河三角洲自然保护区的建立需考虑提高农民经济收入，使保护环境和经济发展相互协调。

【推荐3】《细胞》期刊曾报道，中国科学家率先成功地应用体细胞对非人灵长类动物进行克隆，获得两只克隆猴——“中中”和“华华”。克隆猴的成功培育标志着我国非人灵长类疾病动物模型的研究处于国际领先水平。请回答下列有关问题：

(1)培养成纤维细胞时，培养基中除了细胞所需要的营养物质外，通常还需要添加____等一些天然的成分。
(2)核移植前需将A猴卵母细胞培养至____期，并进行去核操作。目前普遍使用的去核方法是____。
(3)科研人员发现对于灵长类动物的体细胞来说，单靠核移植本身并不足以使重构胚顺利发育成存活个体，还需要对供体细胞核进行表观遗传修饰才能开启细胞核的全能性。研究表明染色体组蛋白动态可逆地被修饰酶所改变，控制着基因的表达（如图2所示）。

①据图分析，____（填“提高”或“降低”）组蛋白乙酰化水平和____（填“提高”或“降低”）组蛋白去甲基化水平有利于相关基因恢复表达，开启细胞核全能性，从而显著提高重构胚的发育率。
②科研人员通过设计实验验证以上观点。供选择试剂为：组蛋白去甲基化酶的mRNA、组蛋白甲基化酶的mRNA、组蛋白去乙酰化酶抑制剂、生理盐水。
实验思路：将重构胚均分为甲、乙、丙、丁四组，分别注入等量的组蛋白去乙酰化酶抑制剂、等量____、等量____、等量生理盐水。一段时间后分别检测各组的胚胎发育率。
实验结果：各组的胚胎发育率结果为：丙组>甲组=乙组>丁组。