【推荐2】草甘膦是一种除草剂，但会影响水稻产量。水稻产量与高产基因有关，研究人员拟采用农杆菌转化法对水稻高产基因进行定位，并进一步培育能稳定遗传的抗草甘膦高产水稻新品种。回答下列问题：
Ⅰ.水稻高产基因定位水稻穗粒数可影响水稻产量。农杆菌 Ti质粒的 T－DNA 可以转移并随机插入野生型水稻基因组中（可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点），导致被插入的基因功能丧失，从而得到一系列水稻突变体。研究者从中筛选得到一株穗粒数异常突变体，并进行下列研究。
(1)提取 DNA。采集适量突变体和野生型水稻的幼嫩叶片，分别冷冻后研磨成粉末状，依次加入SDS、RNA酶等试剂，去除蛋白质和____ 等大分子杂质。提取过程中需加入____酶抑制剂并保持轻柔操作，以避免____，从而提高总 DNA提取率。
(2)PCR扩增。对提取获得的两组总DNA分别进行PCR 扩增。为避免外源DNA等因素的污染，微量离心管、枪头和蒸馏水等在 PCR 前需进行____处理。可以通过在紫外灯下直接观察电泳结果中DNA条带的____及粗细程度来评价扩增是否成功。
(3)结果鉴定。分别用EcoRI、Hind Ⅲ、BamHI三种限制酶处理突变体总DNA 扩增产物，处理后进行电泳，并与野生型 DNA 和 Ti质粒对照。电泳后的 DNA 与含放射性同位素标记的 DNA 探针（T－DNA的一条单链） 进行杂交，得到突变体总 DNA 不同酶切处理后的放射性检测结果如图1所示。

①不同酶切结果的杂交带位置不同的原因是：不同酶切后含____的片段长度不同，因此各组 DNA片段在凝胶中电泳时的____不同，最终导致分布于不同位置。
②若杂交结果显示突变体在不同限制酶处理时均出现杂交带，野生型组____（填“有”或“无”） 杂交带， Ti质粒组____（填“有”或“无”） 杂交带，则表明T－DNA 成功插入水稻染色体基因组中，且可判断突变体为T－DNA____位点插入，依据是____ 。（注：T－DNA 上没有 EcoRI、HindⅢ、BamHI三种限制酶的酶切位点）。
(4)用某种限制酶处理突变体的DNA（如图2所示），断开DNA 分子中的____个磷酸二酯键，再用____将两端的黏性末端连接成环，以此为模板，利用下表中的引物①②进行 PCR，扩增出____序列，扩增产物____（填“不含”或“含”）T－DNA 完整序列。经过与野生型水稻基因组序列比对，确定T－DNA 插入2号染色体上的B基因中。

T-DNA序列	引物序列
5ˊ-AACTATGCGC…….CGTAGCCTAT-3ˊ	①5ˊ-GCGCATAGTT-3ˊ
3ˊ-TTGATACGCG…….GCATCGGATA-5ˊ	②5ˊ-CGTAGCCTAT-3ˊ

(5)研究发现，该突变体产量明显低于野生型，据此推测 B基因可____（填“促进”或“抑制”） 水稻穗粒的形成，可控制高产性状。
Ⅱ.抗草甘膦高产水稻培育，研究者构建如图3所示的Ti表达载体，采用农杆菌转化法将抗草甘膦基因R 和基因B转入野生型水稻中，培育稳定遗传的抗草甘膦高产水稻新品种。

(6)转基因技术的理论基础有：T－DNA 和水稻 DNA 均为____结构、生物界共用一套____等。
(7)根据基因表达载体的结构组成分析，Ti质粒中的CaMV35S 是____，其功能是____酶的识别和结合部位。Ti 表达载体中，B基因和R基因转录的模板链的方向____（填“相同”或“相反”）。
(8)现需选出单一位点插入R基因和B基因且稳定遗传的水稻新品种，筛选方案如下：
①转基因后的水稻植株自交，收获种子（F₁） 并播种在含____的选择培养基上，若能够萌发并生长的个体即为____的个体；
②F₁存活个体自交所得种子（F₂） 按单株收种并播种于选择培养基上，选择存活率约____的培养基中的幼苗继续培养获得F₂植株；
③将F₂植株自交所得种子（F₃）按单株收种并播种于选择培养基上，选择种子全部存活的培养基中的幼苗即为单一位点插入且____的抗草甘膦植株。
④为实现最终育种目标，研究人员还需检测____。

【推荐1】CCR5是人体的正常基因，其编码的细胞膜CCR5蛋白是HIV－Ⅰ(人类免疫缺陷病毒Ⅰ型)感染的“入口”。有学者用“CRISPR/Cas9”技术对该基因进行定点编辑后植入志愿者体内，诞生了两位婴儿。这就是学术界和社会伦理界引起激烈争论的“基因编辑婴儿”事件请分析回答：

(1)将Cas9蛋白和向导RNA序列注入受精卵的方法称为________。据图推测，“CRISPR/Cas9”技术中，首先由________引导定位至目标DNA序列，然后由Cas9蛋白将DNA切断。这两种物质的作用结果类似于基因工程中________的作用。基因编辑过程中可能会产生“脱靶”(对CCR5基因以外的其他基因进行了编辑)现象，最可能的原因是________________________________________________________________________。
(2)细胞对被切断的DNA进行重新连接前大都会随机切掉或增加几个碱基对，此过程导致的变异属于________。胚胎2的两个变异CCR5基因编码的蛋白质中，氨基酸数目都可能减少，原因是____________________________。变异的CCR5蛋白无法装配到细胞膜上，从而实现了________________________________________________________________________。
(3)CRISPR/Cas9基因编辑技术是一种精准改变目标DNA序列的技术。下列现代生物科技中与该技术最接近的是________。
A.转基因技术　　　B.蛋白质工程　　　C.细胞核移植　　　D.胚胎工程
(4)现今基因编辑技术门槛低，很多人在实验室里都可以做，如果不及时制止，就有泛滥的可能性。基因编辑婴儿事件，在社会上引起了激烈的争论，从科研工作者应具备的科学道德、科学精神来思考，你应持有的正确观点是________________________________________________________________________。