组卷网 > 高中生物综合库 > 生物技术与工程 > 基因工程 > 基因工程的基本操作程序 > 基因表达载体的构建
题型:非选择题-解答题 难度:0.65 引用次数:784 题号:12476351
新冠肺炎疫情暴发以来,在党中央的关怀下,全国人民共同努力,疫情防控取得重大战略成果,很多新冠肺炎患者康复,这些康复者的血清中含有相应的抗体,可帮助患者更快地清除病毒,是治疗新冠肺炎的有效方法。但目前康复者的血清来源较少,不能满足临床需求,理论上可采用基因工程或动物细胞工程的方法获得相应抗体。请回答下列有关问题:
(1)传统抗体的制备是向生物体内反复注射某种抗原,使生物体产生抗体,从动物的__________中分离所需抗体,但用这种方法提取的抗体,具有_______________(至少写出两点)等缺点,现在逐步被单克隆抗体取代。
(2)单克隆抗体制备时需要从康复者的脾脏中分离出B淋巴细胞,在体外将其与_________细胞进行融合,常见的融合方法有电激、聚乙二醇、______________等,然后再经筛选、培养等步骤大量获得。
(3)科学家不断探索寻求制备新冠病毒抗体的方法,某科研小组欲利用基因工程技术制备新冠病毒抗体,其大致流程如下图:

①抗体基因确定后,可通过PCR技术特异性地快速扩增,PCR技术扩增目的基因的前提条件是________________________。基因表达载体的组成除了目的基因外,还必须有______________以及标记基因等。
②人体合成的抗体需要膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性,与大肠杆菌作为受体细胞相比,选择酵母菌作为受体细胞的优势是_____________________________

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【推荐1】β-葡萄糖苷酶(BglB)是工业生产中降解纤维素的关键酶,研究人员利用基因工程技术,将编码BglB的基因转移到了大肠杆菌的细胞中并使之表达。下图1~3分别表示Bgl II、BamHI两种限制酶的识别序列和酶切位点,及其在质粒和含凝乳酶基因的外源DNA片段上的切割位点。其中,质粒含有leu2基因,可用于合成亮氨酸,目的基因含有卡那霉素抗性基因KanR。回答下列问题:

(1)在基因工程中,质粒和目的基因构建重组质粒时必需的工具酶有__________。为了扩增重组质粒,需用____处理将其转入处于_______态的大肠杆菌细胞中。
(2)根据图1分别写出BgI Ⅱ与BamHⅠ酶切后形成的末端序列_________
(3)BgI II酶切后的质粒与BamHⅠ酶切后的目的基因能够连接的原因是_______
(4)将连接后的产物转入某种大肠杆菌,该细菌对卡那霉素敏感,且不能在缺乏亮氨酸的培养基中培养。使用BgI II处理重组质粒,可以得到长度为_____bp的环状DNA.若要筛选含有重组质粒的大肠杆菌,应选择______的培养基进行培养。
(5)大肠杆菌不能降解纤维素,但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力,这是因为_____
2022-08-29更新 | 160次组卷
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【推荐2】某种病毒的N蛋白(棘突蛋白)可与宿主细胞的受体结合,是决定病毒入侵易感细胞的关键蛋白。下表是两种针对该病毒的疫苗研发的技术路线,请回答相关问题:

方法

技术路线

基因工程疫苗

N蛋白基因→基因表达载体- * 大肠杆菌→N蛋白→人体

腺病毒载体重组疫苗

N蛋白基因→腺病毒基因表达载体人体

(1)研究人员利用PCR技术特异性地扩增N蛋白基因,PCR过程中温度的控制至关重要。将处理温度控制在90~95℃,是为了______
(2)在构建基因表达载体的过程中,需要用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒,目的是防止_____以及目的基因和质粒反向连接。构建的基因表达载体上需要有启动子、终止子、复制原点、____等结构。将基因表达载体导入大肠杆菌,首先用______处理大肠杆菌细胞,使其处于一种能吸收周围环境中 DNA分子的生理状态。
(3)基因工程疫苗制备过程中需要分离和提纯大肠杆菌。通常情况下需要对培养基进行_____灭菌。当采用平板划线法分离大肠杆菌时,第二次及以后的划线都要从上一次划线的末端开始,其目的是______
(4)制作腺病毒载体重组疫苗时需要将腺病毒的毒力相关基因除掉,删除基因时需用到____
酶,这种酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的_____键断开。与基因工程疫苗相比,腺病毒载体重组疫苗的优点是能持续表达抗原,使人体免疫应答更持久。
2023-04-12更新 | 299次组卷
非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
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【推荐3】人的血清蛋白(HSA)具有重要的医用价值,研究人员欲用乳腺生物反应器来大量生产HSA。下图所示为HSA基因片段和人工构建的大肠杆菌质粒pBR322,图中Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Neor表示新霉素抗性基因,箭头表示切割形成末端完全不同的4种限制酶的切割位点。请据图回答问题:

(1)人工构建pBR322质粒除了含特定限制酶切割位点、标记基因、复制原点外,还必须有__________(答出两点)等。
(2)若选用牛作为受体动物,可将人血清蛋白基因与_________等调控组件重组在一起,通过_________方法将目的基因导入牛的受精卵中,然后使其发育成转基因牛。
(3)据图分析,在构建基因表达载体时,选择____________作为切割质粒和目的基因的限制酶可提高目的基因和载体的正确连接效率,其原因是_________
(4)为了排除普通受体细胞(未导入质粒)、空质粒受体细胞(导入pBR322质粒而非重组质粒)的干扰,目的基因导入后,进行了进一步筛选:制备甲、乙两种培养基,甲培养基含新霉素,乙培养基含新霉素和氨苄青霉素。含重组质粒的受体细胞在甲培养基上___________(填“能”或“不能”)生存,在乙培养基上___________(填“能”或“不能”)生存。
(5)据下图分析,利用PCR技术获取HSA基因时,应选择甲、乙、丙、丁四种引物中的_________﹔若扩增4次,共需要引物__________个。
2023-03-06更新 | 733次组卷
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