【推荐1】 在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA。PCR技术 （聚合酶链式反应）可以使样品DNA扩增，获得大量DNA克隆分子（如下图，图中黑色长方形是引物）。在很短的时间内将DNA扩增几百倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。

(1)PCR技术所依据的原理是________________________。
(2)图中的变性、延伸分别是指_____________________、______________________________。
(3)假设PCR反应中的DNA模板为P，第一轮循环的产物2个子代DNA为N₁，第二轮的产物4个子代DNA为N₂，N₁、N₂中分别含有模板DNA单链的DNA分别有______、______个。
(4)若下图为第1轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。（请标注两种引物的位置）

【推荐2】研究人员利用小鼠的单倍体ES细胞（只有一个染色体组），成功培育出转基因小鼠。其主要技术流程如图所示。请分析回答下列问题：

注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种限制酶；箭头指向的位置为限制酶的切割位点；Amp^r是氨苄青霉素抗性基因，Neo^r是G418抗性基因。
(1)PCR反应体系中除含缓冲液﹑模板DNA、4种脱氧核苷酸、引物外，还应含有_____；要扩增目的基因，引物应选用下图中的_____（填图中字母），引物的作用是_____。

(2)在基因工程操作步骤中，过程①②称为_____。已知氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo^r的小鼠细胞。结合上图推测，过程①选用的2种限制酶是_____（填图中的编号），过程②既能连接黏性末端又能连接平末端的DNA连接酶，称为_____。③处的培养液应添加_____（填“氨苄青霉素”或“G418”）。
(3)图中桑葚胚需移入代孕小鼠子宫内继续发育，胚胎移植实质上是_____。

【推荐3】大多数奶酪的生产需要使用凝乳酶来凝聚固化奶中的蛋白质。传统的制备凝乳酶的方法是通过杀死未断奶的小牛，然后将它的第四胃的黏膜取出来进行提取，此法已不再使用。现在科学家将编码牛凝乳酶的基因（长度1.5kb）导入大肠杆菌获得工程菌，再通过工业发酵批量生产凝乳酶。图为所用载体示意图，表为限制酶的识别序列及切割位点。请回答下列问题：

限制酶	HindⅡ	Pvit2	KpnⅠ	EcoRⅠ	PstⅠ	BamHⅠ
识别序列	A↓AGCTT	G↓GTACC	G↓GTACC	G↓AATTC	CTGC↓AG	G↓GATCC

(1)获取牛凝乳酶基因：提取小牛胃黏膜组织中的RNA,经_______________得到cDNA,将其作为PCR反应的模板，并依据牛凝乳酶基因两端的核苷酸序列，设计一对_______________来扩增目的基因。
(2)构建基因表达载体：为使目的基因与载体正确连接，在扩增目的基因时，应在其一对引物的5端引入_______________和_______________限制酶的识别序列。在目的基因和载体连接时，可选用_______________（填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”），此酶既能连接平末端和粘性末端。
(3)转化：先用_______________溶液处理大肠杆菌细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，将重组的基因表达导入其中。
(4)筛选与鉴定：将转化后的大肠杆菌接种在含_______________的培养基上进行培养，随机挑取菌落（分别编号为1、2、3、4）培养并提取质粒，用（2）中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图，_______________号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。

注：M为指示分子大小的标准参照物；小于0.2 kb的DNA分子条带未出现在图中。