遗传毒性物质常存在于被化学物质污染的水体，可损伤生物的DNA，严重威胁人类健康。研究人员通过基因工程改造大肠杆菌，以期筛选对遗传毒性物质反应灵敏的工程菌株，用于水质检测。
（1）大肠杆菌DNA中存在可被遗传毒性物质激活的毒性响应启动子序列。将毒性响应启动子插入图1所示表达载体的P区，获得基因工程改造的大肠杆菌。当改造后的大肠杆菌遇到遗传毒性物质时，_______ 识别并与启动子结合，驱动噬菌体裂解基因（SRR）_____ ，表达产物可使大肠杆菌裂解。
（2）研究人员选取启动子sul准备与图1表达载体连接。图2显示了启动子sul内部存在的酶切位点，右向粗箭头表示转录方向
①据图1、2信息，克隆启动子sul时，在其A端和B端应分别添加限制酶______ 和__ 的酶切位点，从而确保启动子sul可与已被酶切的表达载体正确连接。
②将重组表达载体导入大肠杆菌，置于含有_______ 的选择培养基中进行筛选、鉴定及扩大培养，获得工程菌sul。
（3）研究人员陆续克隆了其他4种启动子（rec、imu、qnr、cda），分别连入表达载体，用同样的方法获得导入重组载体的工程菌，以筛选最灵敏的检测菌株。
①将5种工程菌和对照菌在LB培养基中培养一段时间后，检测菌体密度，结果如图3。图中结果显示_____ ，说明工程菌在自然生长状态下不会产生自裂解现象。
②上述菌株在LB培养基中生长2h时加入遗传毒性物质，检测结果如图4。据图可知，5种工程菌均启动了对遗传毒性物质的响应，应选择转入______ 启动子的菌株作为最优检测菌株。
（4）对上述工程菌进行工业化培养，通常采用______ 培养基，将工程菌置于可持续更新营养物质的培养罐中，这种营养物质的添加方式相比于传统的一次性添加营养物的优势是______ 。
（5）下列关于该工程菌的叙述，正确的包括______ 。
A．该工程菌可能用于检测土壤、蔬菜中的遗传毒性物质残留量
B．该毒性响应启动子序列广泛存在于自然界所有物种中
C．其表达产物可裂解大肠杆菌，检测后的剩余菌液可直接倒掉
D．为长期保存该工程菌，应加入一定浓度的甘油冻存于-20℃
（1）大肠杆菌DNA中存在可被遗传毒性物质激活的毒性响应启动子序列。将毒性响应启动子插入图1所示表达载体的P区，获得基因工程改造的大肠杆菌。当改造后的大肠杆菌遇到遗传毒性物质时，
（2）研究人员选取启动子sul准备与图1表达载体连接。图2显示了启动子sul内部存在的酶切位点，右向粗箭头表示转录方向
①据图1、2信息，克隆启动子sul时，在其A端和B端应分别添加限制酶
②将重组表达载体导入大肠杆菌，置于含有
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①将5种工程菌和对照菌在LB培养基中培养一段时间后，检测菌体密度，结果如图3。图中结果显示
②上述菌株在LB培养基中生长2h时加入遗传毒性物质，检测结果如图4。据图可知，5种工程菌均启动了对遗传毒性物质的响应，应选择转入
（4）对上述工程菌进行工业化培养，通常采用
（5）下列关于该工程菌的叙述，正确的包括
A．该工程菌可能用于检测土壤、蔬菜中的遗传毒性物质残留量
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C．其表达产物可裂解大肠杆菌，检测后的剩余菌液可直接倒掉
D．为长期保存该工程菌，应加入一定浓度的甘油冻存于-20℃
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更新时间：2021-05-29 08:48:58
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【推荐1】2023年春节后，新冠病毒感染的第一波高峰已过，但正确佩戴口罩仍是预防二次感染的有效手段。某研究小组对非灭菌的一次性口罩中的细菌进行检测，通过分析细菌的种类和数量来确定口罩的合格性。部分操作如下：从口罩上剪取样品10cm2（体积近似1mL），剪碎后加入灭菌的生理盐水中，定容至100mL，充分混匀，得到样液。回答下列问题。
(1)对样液中的细菌计数，可以在显微镜下用__________ （填工具名称）直接计数，也可以在培养基上用稀释涂布平板法计数；制作培养基时通常要加入碳源、无机盐、__________ （答出两点即可）；制备培养基的基本步骤为：__________ →称量→溶化→调pH→灭菌→__________ ，该实验中pH需调至__________ 。
(2)在培养基上可以通过菌落特征初步判断微生物种类，菌落特征包括_________ （答出两点即可）。
(3)培养一段时间后发现培养基上的菌落连成一片，可能的原因是_____ ；修正后，取1mL样液稀释102倍，在3个平板上用涂布法分别滴加0.1mL稀释液，经适当培养，3个平板上的菌落数分别为148、155、153，据此可得出，1cm2的口罩上活菌数约为__________ 个。
(1)对样液中的细菌计数，可以在显微镜下用
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【推荐2】以工业废水、沥青(一种有机物)等为原料，通过发酵获得的微生物菌体，即单细胞蛋白，其营养物质丰富，可用作微生物饲料。科研人员试图从被污染的土壤中筛选能降解沥青的细菌菌株并进行培养，回答下列问题:
(1)图中乙培养基比甲培养基多的物质是______ ，甲、乙培养基都应以______ 为唯一碳源。
(2)乙培养基制备完成，平板冷凝后，通常需要将平板_______ ，以免影响平板分离培养效果。若要检测乙培养基灭菌是否合格，可以________________
(3)为提高筛选的细菌对沥青的降解能力，可对筛选的菌株进行诱变育种，其原理是__________ 。结合题干信息分析，筛选的菌株应具有___________ 特点。将辐射处理后的菌种涂布在乙培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径______ 的菌落，纯化后获得人们需要的菌株。
(4)不同的单细胞蛋白可能因其成分不同，其营养价值也有所差异，细菌蛋白一般不能直接食用，需要除去其中的细胞壁、核酸和灰分等杂质，对细菌蛋白提取处理后一般采用__________ 试剂检测其是否含有蛋白质。
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【推荐3】科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株Q，图1其筛选流程的主要步骤，图2是接种④的方法，请分析回答下列问题。
（1）培养基中加入的多环芳烃菲的目的是作为___________________________ 。将锥形瓶放在摇床上振荡培养的目的是_______________________________________ 。
（2）从功能上来说，图1中固体培养基属于______________ 培养基，培养基常采用的灭菌设备是___________________ 。
（3）根据图2可知，接种④是利用____________________ 法纯化菌株Q，图中所示接种环最少灼烧___________ 次。
（4）若在稀释倍数为106倍下涂布了三个平板（每次取0.1mL），统计菌落数分别为166、169、175，则稀释前10mL菌液中所含细菌为_________________ 个。
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【推荐1】某小组为构建含有双标记基因的通用型动物转基因载体（质粒b），将1种标记基因（Neo基因）插入到质粒a中。但Neo基因两端无相应的限制酶识别序列，因此需要先设计一对引物，让Neo基因的两端分别增加相应的序列，然后通过PCR扩增得到DNA序列1，再经过酶切和连接后得到质粒b。构建动物转基因载体的过程如下图所示。（其中扩增DNA序列1的引物为：P1 5＇-TATGTCGAC……3＇；P2 5＇-TATATCGAT……3＇。限制酶及其识别序列为Hind Ⅲ： A↓AGCTT、Sal Ⅰ：G↓TCGAC、ClaⅠ： AT↓CGAT NheⅠ ： G↓CTGGC）回答下列问题：
(1)根据引物分析，应使用______________ （填限制酶名称）对DNA序列1和质粒a进行切割，经_______ 酶连接后得到质粒 b。
(2)含有Neo基因的细胞对G418 （一种抗生素）具有抗性，可用含G418的培养基筛选转基因细胞。为检测质粒b是否成功插入了Neo基因，首先将质粒b转染羊成纤维细胞，然后对细胞进行抗性检测。
①培养成纤维细胞的过程中，需要用_______________ 处理贴壁细胞，使之分散成单个细胞，离心收集后再进行传代培养。
②将转染质粒b的成纤维细胞分为两组（T1、T2），CTR组为未转染质粒b的成纤维细胞，进行细胞培养，结果如下表，T2组的细胞生长情况为________________ 时说明质粒b成功插入了Neo基因，理由是___________________________________________________________ 。
(1)根据引物分析，应使用
(2)含有Neo基因的细胞对G418 （一种抗生素）具有抗性，可用含G418的培养基筛选转基因细胞。为检测质粒b是否成功插入了Neo基因，首先将质粒b转染羊成纤维细胞，然后对细胞进行抗性检测。
①培养成纤维细胞的过程中，需要用
②将转染质粒b的成纤维细胞分为两组（T1、T2），CTR组为未转染质粒b的成纤维细胞，进行细胞培养，结果如下表，T2组的细胞生长情况为
组别 | T1 | T2 | CTR |
培养基 | 不含G418 | 含G418 | 含G418 |
细胞生长情况 | 未死亡 | ？ | 全部死亡 |
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【推荐2】据调查，随着化学农药的产量和品种逐年增加，害虫的抗药性也不断增强，危害很严重，如近年来，棉铃虫在我国大面积爆发成灾，造成经济损失每年达100亿元以上.针对这种情况，我国科学工作者经研究发现一种生活在棉铃虫消化道内的苏云金芽孢杆菌能分泌一种毒蛋白使棉铃虫致死，而此毒蛋白对人畜无害。通过科技攻关，我国科技工作者已成功地将该毒蛋白基因导入到棉花植株内并成功实现表达。由于棉铃虫吃了新品种“转基因抗虫棉”植株后会死亡，所以该棉花新品种在1998年推广后，取得了很好的经济效益。
请据上述材料回答下列问题：
（1）在培养转基因抗虫棉新品种过程中，所用的基因的“剪刀”是___________________ ，基因的“针线”是__________________ ，基因的运载工具是_________________ 。
（2）基因工程的操作程序主要包括的四个步骤是：_____________________________ 、________________________________ 、_____________________________ 、________________________________ 。
（3）该目的基因在导入受体细胞前需要与载体结合，目前经常使用的载体有：___________ 、_____________ 和_______________ 。
请据上述材料回答下列问题：
（1）在培养转基因抗虫棉新品种过程中，所用的基因的“剪刀”是
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【推荐3】接种疫苗是预防疾病的措施之一，某种DNA疫苗的制备与使用过程如下图所示，图中①～④代
表过程。
回答下列问题：
（1）上述实验利用M蛋白基因制备DNA疫苗的原因是M蛋白至少具有2个特性，分别是_____ 。
（2）①所需的工具酶有_____ 。需要进行筛选的过程有 _____ （填写编号）。过程②的目的是 _____ 。
（3）DNA疫苗在人体中发挥免疫作用的过程是_____ 。
（4）相比于注射M蛋白质，注射DNA疫苗的优点是_____ 。
（5）根据细菌的结构与特性分析，在基因工程中选择细菌作为受体细胞的优点和缺点分别是_____ 。
表过程。
回答下列问题：
（1）上述实验利用M蛋白基因制备DNA疫苗的原因是M蛋白至少具有2个特性，分别是
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