【推荐1】我国在新冠疫情防控方面取得了显著的成绩，但全球疫情形势仍然非常严峻，尤其是病毒出现了新变异株，更是威胁着全人类的生命健康。科学家们正在加紧开展针对新冠病毒的疫苗等研究工作。研究发现，棘突蛋白（S蛋白）是新冠病毒非常重要的抗原蛋白，与病毒的传染能力密切相关，N蛋白在新冠病毒中含量丰富，是一种高度免疫原性蛋白；基因测序结果显示，新冠病毒的变异主要发生在棘突蛋白，比如“奥密克戎”变异毒株棘突蛋白有32处出现突变。结合图示信息，回答下列问题：

(1)核酸检测是确诊新冠病毒感染的重要指标，图3中适合作为核酸检测靶标的基因有_____（至少写出两个）。核酸检测利用了PCR技术，图2中①过程利用_____酶合成cDNA，①过程结束后靶RNA消失，可知该酶还具有_____酶的功能。
(2)接种疫苗是遏制新冠疫情蔓延的重要手段，我国科学家自主研发了灭活疫苗、重组蛋白质疫苗、腺病毒载体疫苗等多款新冠疫苗。其中腺病毒疫苗的制备技术要点是：将腺病毒的复制基因敲除，目的是_____；将以新冠病毒的S蛋白基因为模板合成的DNA插入腺病毒基因组，构建出重组腺病毒作为疫苗。该疫苗进入人体细胞内通过_____，从而引发特异性免疫反应。与蛋白质疫苗相比，该疫苗能够更有效的诱发_____免疫。
(3)针对当前疫情发展，结合科学研究进展，2022年2月，国家卫健委启动部署新冠疫苗异源序贯加强接种策略，即使用不同技术路线的疫苗交替接种，如前两针接种灭活新冠疫苗，第三针接种腺病毒载体新冠疫苗或者重组蛋白新冠疫苗。请分析异源序贯接种能起加强免疫作用的可能原因：_____。

【推荐2】已知鸡蛋的绿壳（G）对白壳（g）是由一对常染色体等位基因控制的相对性状。蛋壳颜色由母鸡的基因型决定，与鸡蛋本身的基因型无关。下图是以A、B为亲本的绿壳蛋鸡育种过程（椭圆形表示鸡蛋，字母表示孵化出的鸡），据下图回答。

(1)由图推测，A的基因型是____，B的基因型是______；C产下的鸡蛋中，绿壳蛋占____%。
(2)与母鸡相比，公鸡的基因型较难被确定。为提高绿壳蛋鸡育种效率，可以采用分子生物学方法直接筛选出基因型为GG的公鸡亲本。
实验思路：依据_____基因设计引物，提取公鸡DNA进行PCR扩增及______鉴定。

【推荐3】胰岛素是治疗胰岛素依赖糖尿病的特效药物，但是天然胰岛素在人体内的寿命具有几个小时，通过蛋白质工程改变胰岛素的空间结构，以延长岛素的半衰期，可以得到长效胰岛素。如图是用蛋白质工程设计长效胰岛素的生产过程

（1）基因工程中限制酶切割后的运载体与目的基因能再次拼接的理由_______________。
（2）在基因工程中获取目的基因的方法除图中方法，还有利用PCR技术扩增和_______。
（3）上述基因工程中除质粒外，______也可作为运载体。
（4）构建新的蛋白质模型是蛋白质工程的关键，图中构建新的胰岛素模型的主要依据是_____________________。
（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大旸杆菌作为受体细胞，原因是________________________。
（6）新的岛素为什么还要加工、修饰？____________________________。

【推荐1】1型糖尿病是因免疫系统将自身胰岛素作为抗原识别而引起的自身免疫病。小肠黏膜长期少量吸收胰岛素抗原，能诱导免疫系统识别该抗原后应答减弱，从而缓解症状。科研人员利用1型糖尿病模型小鼠进行动物实验，使乳酸菌在小鼠肠道内持续产生人胰岛素抗原，为此构建重组表达载体，技术路线如下。据图回答：

(1)为使人胰岛素在乳酸菌中高效表达，需改造其编码序列。下图是改造前后人胰岛素B链编码序列的起始30个核苷酸序列。据图分析，转录形成的mRNA中，该段序列所对应的片段内存在碱基替换的密码子数有_____个。

(2)在人胰岛素A、B肽链编码序列间引入一段短肽编码序列，确保等比例表达A、B肽链。下列有关分析正确的是_____（多选）。

A．引入短肽编码序列不能含终止子序列

B．引入短肽编码序列不能含终止密码子编码序列

C．引入短肽不能改变A链氨基酸序列

D．引入短肽不能改变原人胰岛素抗原性

(3)在重组表达载体中，SacⅠ和XbaⅠ限制酶仅有图示的酶切位点。用这两种酶充分酶切重组表达载体，可形成_____种DNA片段。

【推荐2】（原创）在转B基因（B基因控制合成毒素蛋白B）抗虫棉商品化的同时，棉虫对毒素蛋白B产生抗性的研究也正成为热点。请分析回答：
（1）棉虫对毒素蛋白B的抗性增强，是在转B基因抗虫棉的选择作用下，棉虫种群中抗B基因______的结果。为减缓棉虫种群对毒素蛋白B抗性增强的速度，可以在抗虫棉田区间隔种植____________。
（2）豇豆胰蛋白酶抑制剂（由D基因控制合成）可抑制昆虫肠道内蛋白酶活性，使害虫减少进食而死亡。研究者将同时含B基因和D基因的__________________导入棉花细胞中，获得转基因棉。与只转入B基因的转基因棉相比，棉虫种群对此转基因棉抗性增强的速度减缓。
（3）从防止抗虫基因通过花粉扩散至其他近缘植物中，提高转基因植物安全性，理论上可将抗虫基因转入棉花细胞的______（选填选项前的符号）。
a．细胞核       b．叶绿体       c．线粒体       d．核糖体
（4）棉花短纤维由基因A控制，研究者获得了多个基因型为AaBD的短纤维抗虫棉植株。其中B基因和D基因始终位于同一条染色体上，减数分裂时不发生交叉互换。
①植株I相关基因位置如图1，该植株自交，F₁中长纤维不抗虫植株的基因型为__________，能够稳定遗传的长纤维抗虫植株的比例是_________。

②植株II自交，F₁性状分离比是短纤维抗虫：长纤维不抗虫3：l，则植株II中B基因和D基因位于_______染色体上（填图2中编号）。
③植株III自交，F₁性状分离比是短纤维抗虫：短纤维不抗虫：长纤维抗虫=2：1：1，则植株III产生的配子的基因型为_____________。

【推荐3】CD47是肿瘤细胞表面的一种蛋白，为制备抗CD47的抗体，研究人员先利用基因工程制备CD47蛋白。回答下列问题：
(1)通过_____扩增获取CD47蛋白基因时，首先应根据CD47蛋白基因的碱基序列设计合成_____；整个扩增过程中，温度最低的过程是_____。
(2)基因工程的基本操作程序中，核心的步骤是_____，该过程需要使用DNA连接酶，图中属于DNA连接酶底物的是_____（填“①”或“②”）。

   

(3)将重组质粒导入大肠杆菌细胞时，一般先用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是_____。培养一段时间后，从受体细胞中提取蛋白质，可用_____技术检测CD47蛋白基因转录的mRNA是否翻译。

【推荐1】Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行治疗，其技术流程如图（图中数字序号表示的是相关过程）。请回答下列有关问题：

(1)步骤①中，分离上皮细胞时常用的酶是_____，过程②构建重组胚胎时_____（填“可以”或“不可以”）将整个上皮细胞注入到去核的MII期的卵母细胞。
(2)步骤③中，重组胚胎培养到_____期时，可从其______中分离出ES细胞。
(3)步骤④中，将获取的Rag₂基因导入ES细胞，该基因能否在ES细胞中稳定遗传的关键是______。
(4)步骤⑤中，ES细胞培养液中需加入_____才能诱导形成造血干细胞，改造成功的造血干细胞重新输入到Rag₂基因缺失小鼠的治疗方法称为_____。

【推荐2】请回答胚胎工程和基因工程方面的问题:
Ⅰ.(1)应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、____、以及在母体中发育和产出等过程。 
(2)在“试管牛”的培育过程中,要使精子和卵母细胞在体外成功结合,需要对精子进行处理,使其____。另外,培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期,该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和____。 
(3)利用基因工程可以获得转基因牛,从而改良奶牛的某些性状。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素,将该重组DNA分子导入受体细胞所常采用的方法是____,而培育转基因植物采用的导入方法有____、花粉管通道法和基因枪法。为获得能大量产生人干扰素的转基因牛,该基因表达载体应导入的受体细胞是____(受精卵、乳腺细胞)。 
Ⅱ.下图表示我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的具体培育过程。

请据图回答下列问题:
(1)上述过程涉及的现代生物工程技术,属于分子水平的是_____,其核心步骤是_____。 
(2)若要获得单个的成纤维细胞进行培养,需用_____处理猪胚胎的部分组织。 
(3)E过程中若要获得大量的卵母细胞需用_____激素处理成年母猪。 
(4)H过程的名称是_____,所选择的胚胎一般处于_____期较合适。 
(5)经过培养得到早期胚胎后可以用_____技术以获得更多基因型相同的转基因克隆猪胚胎,且在进行H过程之前,需要对代孕母猪进行_____处理。

【推荐3】生长激素在人的生长发育中具有重要的调节作用，在医疗领域页得到广泛应用。科研人员进行了利用小鼠膀胱作生物反应器生产人生长激素的试验。回答下列问题：
(1)在获取人生长激素基因时，要先从人的__________细胞中获得mRNA，再通过__________过程获得DNA片段，然后设计能与________的引物，通过_________技术实现人生长激素基因的扩增。
(2)在构建人生长激素基因表达载体时要利用的工具酶是___________，为了使人生长激素基因在膀胱细胞中表达，在构建基因表达载体时还需与_______等调控元件重组在一起。然后利用__________法将构建好的基因表达载体导入小鼠的受精卵。
(3)将导入目的基因的受精卵在体外培养到桑葚胚阶段，再通过__________技术移入受体的子宫中进行发育，选择桑葚胚进行移植的依据是______________。
(4)与乳腺生物反应器相比，膀胱生物反应器的优点是__________。（答两点）

【推荐1】2019年7月21日，我国首例完全自主培育的克隆猫“大蒜”诞生，标志着我国在克隆领域又迈进了一大步。“大蒜”是一只非常可爱的雄性短毛猫，为纪念死亡猫“大蒜”，给克隆猫也取名“大蒜”。下图为克隆猫“大蒜”培育过程的示意图，请回答下列有关问题：
   
(1)图中过程①和③，需要为培养细胞提供无菌、无毒的环境，为达到此目的对培养液采取的具体操作有______（答两点）。
(2)图中过程①需用______酶处理将组织分散成单个细胞，不能用胃蛋白酶的原因______。
(3)核移植时卵母细胞应处于______期，从卵巢中采集的卵母细胞需体外培养才能达到该期，目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是______。
(4)图中过程③称为______，通常需要发育到______阶段才能进行胚胎移植，不考虑致死情况，可利用胚胎分割的方法得到了多只克隆猫，利用这些克隆猫作为实验材料进行用于医学研究的优点是______。

【推荐2】胰岛素可用于治疗糖尿病，目前临床使用的胰岛素制剂注射后120min后才出现高峰，与人体生理状态不符，而且进入血液的胰岛素容易被分解，因此，治疗效果受到影响。科研人员通过一定的工程技术手段获得了速效胰岛素，并已通过临床检测。图甲表示速效胰岛素的生产过程，图乙表示图甲中步骤③所用的运载体，图丙表示速效胰岛素基因，表表示几种限制酶识别序列及切割位点。请回答下列问题：

限制酶	BamH I	Xma I	Bcl I	Sam I	Sau3A I	Msp I
识别序列及切割位点	-G↓GATCC-	-C↓CCGGG-	-T↓GATCA-	-CCC↓GGG-	-↓GATC-	-C↓CGG-

(1)通过转基因奶牛泌乳期分泌乳汁来获得所需要的速效胰岛素，这称为_____。图甲中流程①表示设计_____；流程②表示推测_____；④过程常用的方法是_____法；⑤表示筛选出含性染色体_____的精子。
(2)⑥步骤前可进行_____来提高胚胎的利用率，进而培育出更多的转基因奶牛，但是采用此技术产生同卵多胚的可能性有限，原因是_____。
(3)利用图乙和图丙构建基因表达载体时应选用表1中的_____限制酶切割质粒，酶切后的质粒、速效胰岛素基因以及一些调控组件，通过DNA连接酶作用后获得下图的基因表达载体，请标注好A、C所代表的结构（请将答案标注在答题卡）_____。

(4)若想获得更多的速效胰岛素基因，可利用PCR技术，此技术的每次循环可分_____、_____、延伸三步。

【推荐3】二倍体哺乳动物体细胞不易进行基因操作和筛选，而生殖细胞已高度分化，不能在体外扩增培养。我国科学家建立了小鼠哺乳动物单倍体胚胎干细胞系，为基因操作找到了新的动物模型（过程如图所示），据图回答下列问题：

（1）胚胎干细胞可以取自嚢胚的_________细胞，也可以从胎儿的_________获取。
（2）在过程①中，科学家采用两种策略来获得小鼠的孤雄单倍体胚胎，一是将受精后获得的合子胚胎的雌原核去除，另一种方法可能是向_________的卵母细胞中注射成熟精子的_________。
（3）图中过程③通常采用的方法是_________，过程④采用的技术手段是_________，由此可见，单倍体胚胎干细胞能够代替精子，使卵细胞成功“受精”支撑小鼠胚胎的全程发育。
（4）进行过程⑥的优势是__________________，为增加后代的数量可以通过_________技术对胚胎进行处理，要注意将_________均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。