【推荐2】利用基因工程技术培育出油脂高产的四尾栅藻，是获取生物柴油的新途径。科学家欲从紫苏中提取DGAT1基因（催化油脂合成的关键酶基因），导入到四尾栅藻细胞，获得转基因油脂高产的四尾栅藻，流程如图。质粒pCAMBIA与PCR扩增出的DGAT1酶切位点如图所示。现有BamHI、Bgl Ⅱ、EcoR I三种限制酶，它们识别并切割的碱基序列如下表，
   

BamHI	5'—G，GATCC—3
BglⅡ	5'—A↓GATCT—3
EcoR I	5'—GAATTC—3

(1)从紫苏组织细胞中提取总RNA时，需要加入RNA酶抑制剂，目的是_____。过程①需要_____酶的催化，过程②通过PCR技术实现，进行PCR时，需要在两种引物的5'端添加限制酶_____的识别序列。
(2)启动子往往具有物种特异性，在载体pCAMBIA质粒中插入紫苏DGAT1基因，其上游启动子应选择_____（填“紫苏DGAT1基因”、“大肠杆菌”或“四尾栅藻”）启动子。
(3)将DGAT1与pCAMBIA分别用限制酶切割后进行连接可形成重组质粒，目的基因和质粒能连接成重组质粒的原因是_____。
   
若只考虑DNA片段的两两连接，构建重组质粒时可得到_____种大小不同的连接产物。将重组质粒导入大肠杆菌后，可向培养基中加入_____筛选出导入质粒的大肠杆菌。
(4)为进一步筛选出符合要求的重组质粒，选用_____限制酶对不同的重组质粒进行酶切处理，得到的电泳结果如图所示，其中_____组重组质粒为所需质粒。（已知质粒pCAMBIA中EcoRI的酶切位点与BamHI的酶切位点间的最短距离为600bp）
(5)转DGAT1基因四尾栅藻成功的标志是_____。

【推荐3】白细胞介素35（IL-35）是由调节性T细胞产生的一种细胞因子。IL-35是由p35、EBI3两个亚基组成的二聚体。为研究IL-35的作用机制，科研人员利用pSec质粒构建了I-35的重组表达载体，利用DNA重组技术和动物细胞培养技术在体外获取p35、EBI3的融合蛋白。请回答下列问题。
(1)利用PCR技术分别获取p35、EBI3基因时，可提取DNA作为模板的细胞为_________（“必须是调节性T细胞”或“任意一个体细胞”），在两个PCR反应体系中加入不同的________及其它必要组分，利用________技术对PCR产物进行检测。
(2)基因p35、EBI3及pSec质粒上的酶切位点如下图所示。据图可知，若要将EBI3、p35两个基因先后连入载体，应先选用限制酶Notl和限制酶________将基因EBI3连入，后选用限制酶________将基因p35连入。

(3)通常利用_________法将重组表达载体导入动物细胞。但该方法操作复杂，难以批量转化动物细胞，故可利用细胞膜具有_______的特点，将重组质粒包裹于脂质体中，使脂质体与细胞膜融合。

【推荐1】血管为肿瘤的增殖和转移提供了有利条件。M蛋白是人体内抑制血管生长的因子，可作为肿瘤治疗的潜在药物。将控制M蛋白合成的基因m导入酵母细胞中进行表达，可获得大量M蛋白。如图为酵母表达载体（质粒K）的示意图（SacⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、Sa1Ⅰ为限制酶切割位点，切割产生的黏性末端均不相同）。

回答下列问题。
(1)已知基因m中无上述任一限制酶切割位点。为提高连接效率并保证基因m和载体的定向连接，对基因m进行PCR扩增时，需在基因m的上游引物和下游引物中分别引入______限制酶切割位点。
(2)将PCR扩增获得的基因m与酶切后的质粒K进行连接，构建基因m的表达载体。随后，将酶切后的质粒K（a组）与构建的表达载体（b组）分别转入大肠杆菌，并在含有氨苄青霉素的培养基上培养。已知未环化的质粒会被大肠杆菌核酸酶水解，若a组与b组培养基中均有菌落产生，a组出现菌落的原因可能是杂菌污染或______（答出1点即可）。由此推测，b组培养基上的菌落______（填“一定”或“不一定”）含有基因m。
(3)将构建成功的基因m表达载体导入组氨酸合成缺失的酵母突变体中，在______的培养基上培养，以筛选出含有表达载体的酵母细胞。
(4)若观察到M蛋白对血管内皮细胞增殖有抑制作用，说明获得的M蛋白______。

【推荐2】某微生物能产生一种耐热纤维素酶（BglB），在工业生产中具有广阔的应用前景。下图1是获取该酶基因的流程示意图。图2为质粒上的限制酶酶切图谱，BglB基因不 含图中限制酶识别序列。结合所学知识及相关信息回答下列问题：

（1）从图1流程可知，目的基因可以从______中获取；获取的目的基因可以利用______大量扩增。B过程是______过程。
（2）将目的基因导入裸子植物细胞，通常采用的方法是_____；导入微生物细胞，通常采用Ca^2＋处理细胞，使之转化为_______细胞。检测目的基因是否翻译出蛋白质可采用______技术。
（3）重组基因表达载体的结构包括复制原点、目的基因、_________等几部分组件；为使 PCR 扩增的 BglB 基因重组进该质粒，扩增的 BglB 基因两端需分别引入________和________限制酶的识别序列。
（4）普通大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_________________。

【推荐3】国际水稻研究所人员从产量低的耐淹水稻中找到一种耐淹的基因，将其移入到高产热带水稻中，终于培育出耐水淹的高产水稻品系，其产量比高产热带水稻产量还要高。耐淹基因移入的方法可通过转基因技术实现。
（1）转基因过程中构建含耐淹基因的表达载体时，用到的酶主要是____、____。
（2）目的基因导入的受体细胞一般是_____________，常用的方法是_______________。
（3）将导入目的基因的受体细胞培养成植株时，要用人工配制的培养基培养。为防止感染，器皿、培养基必须进行____处理，植物组织必须进行____处理。为了保证受体细胞能正常生长发育，培养基中除了含有必需的营养物质外，还需添加比例适宜的____和____。
（4）鉴定培育出的高产耐水淹水稻植株，最直接的方法是____________。

【推荐1】除草剂的有效成分草甘膦能够专一地抑制EPSP合酶的活性，从而使植物体内多种代谢途径受到影响而导致植物死亡。草甘膦没有选择性，它在除掉杂草的同时也会使作物受损。解决这个问题的方法之一就是导入外源EPSP合酶基因培育抗草甘膦的品种。下图为转基因抗草甘膦矮牵牛的培育过程，回答下列问题：

(1)获得EPSP合酶基因后，可利用PCR技术大量扩增，其前提是________________，若循环5次，消耗_____个引物。
(2)外源EPSP合酶基因须插入到农杆菌Ti质粒的T-DNA上，原因是______________________。若外源EPSP合酶基因与Ti质粒上限制酶识别序列不同，为保证二者定向拼接，可在外源EPSP合酶基因两端添加______________________。
(3)过程4是_____________，甲细胞进行过程6前________（填“需要”或“不需要”）去壁。
(4)从分子水平检测转基因植株能否抗草甘膦的方法是____________________；从个体水平检测转基因植株能否抗草甘膦的方法是______________________。

【推荐2】科研人员克隆了猪白细胞抗原基因（SLA-2基因），构建了该基因的真核表达载体，进行了猪肾上皮细胞表达研究。实验的主要流程如下，SLA-2基因长度为1100bp，质粒B的总长度为4445bp，其限制酶切点后的数字表示距复制原点的距离。可能用到的限制酶识别序列和切割位点如下表所示。

限制酶	BclI	NotI	XbaI	Sau3AI
识别序列及切割位点	T↓GATCA	GC↓GGCCGC	T↓CTAGA	↓GATC

      
(1)过程①中，PCR扩增SLA-2的原理是____，下列4种引物中应选择的是____。
引物a：5’-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物b：5’-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
引物c：5’-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3’
引物d：5’-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3’
(2)过程②将重组质粒导入大肠杆菌的目的是____，该过程需要用____处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。然后将大肠杆菌涂布在含有____（抗生素）的培养基上培养。
(3)若用限制酶Sau3AI和XbaI完全切割质粒B和质粒C后电泳，请在图中画出预测的电泳结果____。
(4)科研中常用嘌呤霉素对真核细胞进行筛选，嘌呤霉素对细胞的毒性实验结果如图，根据实验结果最佳的嘌霉素筛选浓度为____，原因是____。
   
(5)筛选产SLA-2抗原肽的猪肾上皮细胞的方法是____。

【推荐3】科研工作者将径柳匙叶草液泡膜 Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（TaNHX2 基因）转移到棉花细胞内，获得了耐盐新品种。图 1 是含有目的基因的 DNA 片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ为三种限制酶（Sau3AⅠ、BamHⅠ切割形成的黏性末端相同）；图 2 是农杆菌 Ti 质粒结构示意图。请分析回答问题：

（1）将径柳匙叶草不同基因的 DNA 片段导入受体菌的群体中储存，再根据目的基因的特定序列从受体菌中提取该基因，这种获取目的基因的方法称为____________。
（2）计划用 EcoR Ⅰ 分别切割图 1 中 DNA 片段和图 2 所示质粒，以构建基因表达载体。
①构建表达载体除限制酶外还需要的工具酶是_____________；
②本方案的缺陷是：可能导致___________________以及目的基因与质粒的反向连接。
③为避免上述缺陷，最佳方案是用________切割图1的DNA，用________切割图2质粒。
（3）目的基因成功导入受体细胞后，还需要利用_________________技术才能得到转基因棉花苗，这一技术的原理是_________________。
（4）要在个体生物学水平上检测耐盐新品种的培育效果，检测方法是_____________。