【推荐1】塑料的主要成分为聚氯乙烯(PVC)、聚乙烯(PE)和聚丙烯(PP)等，塑料制品方便人们生活的同时，也造成了短时期难以降解的“白色污染”。自然界有多种细菌可以降解塑料的不同成分，研究人员欲通过筛选，并利用基因工程技术培育能降解多种塑料成分的“超级菌”。
(1)研究人员欲比较肠杆菌YT1和芽孢杆菌YP1两类细菌降解PE塑料的能力，配置固体培养基，接种菌株后表层覆盖0.1mm厚的PE塑料。分组实验结果如表所示：

培养基及接种菌株	培养基1	培养基2	培养基3
	单独培养并接种YT1	单独培养并接种Y1	提取YT1和YP1的核酸，并与YT1和YP1混合，培养一段时间后选取YP1接种
降解圈（直径D/mm）	3.5	1.8	4.2

①在筛选能分解PE塑料的菌株时，应将菌株接种到以________为唯一碳源的培养基，从功能上讲，该培养基属于________培养基。
②培养基3中接种混合培养后的YP1，其降解圈直径明显加大，其原因可能是________。
(2)研究人员发现了一种胞外酶基因A，有降解PVC塑料的功能。对A基因测序可知，如果在其调节功能区增加一个碱基对A/T，可大大增强其表达能力。通过经典的大引物PCR定点诱变技术在体外改造A基因(如图1)，然后构建表达载体(如图2)，导入受体菌进而培育“超级菌”。
   
①图1所示，通过PCR1获得的大引物②是指以________(选填图中引物)延伸得到的DNA链为模板，________(选填图中引物)与之结合延伸得到的DNA子链。要获得图1中的改良A基因至少需要________个PCR循环。
②图2中为实现质粒和改良A基因的正确连接，应选用的限制酶是__________。将构建的表达载体导入受体菌后，在含氨苄青霉素和β-半乳糖苷的平板上培养，长出的白色菌落是成功导入了重组质粒的菌株，判断依据是________。

【推荐2】PCR技术应用非常广泛，可用于扩增目的基因，制作探针，引入定点突变，定量检测DNA等。完成下列有关PCR技术和相关应用的问题：
（1）在利用PCR技术扩增某DNA中的某一目的基因时，需要用到的酶是_____________，依据的原理是___________。 PCR技术可用于基因工程四个基本步骤中的__________和__________步骤。
（2）在影响扩增反应的各种因素中，引物的设计最为重要，引物的3′端应采用简并密码较少的氨基酸的对应核苷酸序列，否则会导致扩增的非特异性序列数量__________。
（3）PCR反应后期，由于_____________________（至少写两点）等原因，反应速率会降低。
（4）PCR过程中，温度的控制至关重要，变性温度过低会因为__________，最终都会导致反应效率降低。退火温度过高则会因__________导致目标产物的量__________。 不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链DNA的方法。这两种引物分别称为限制性引物与非限制性引物，其最佳比例一般为1∶50~1∶100，在PCR反应的最初10~15个循环中，其扩增产物最初主要是双链DNA，但当限制性引物消耗完后，非限制性引物引导的PCR就会产生大量的单链DNA。假设反应体系中原来有a个模板DNA，最初10个循环扩增产生双链DNA，后20个循环均只扩增一条链，则需要限制性引物__________个。

【推荐3】科学家将从链霉菌中分离出来的抗除草剂Bar基因成功导入水稻细胞内，获得了抗除草剂转基因水稻，流程如图所示，回答下列问题：

（1）基因工程的操作中，可以通过PCR技术扩增目的基因，也可以通过________的途径获取目的基因。过程①构建重组质粒时需要使用限制酶，该酶的特点是________。
（2）据图分析，要先将Bar基因插入农杆菌Ti质粒的________中，再用该农杆菌感染水稻细胞，通过DNA重组将目的基因插入水稻细胞的________上。
（3）图中过程是用农杆菌转化法将Bar基因导入水稻细胞的，转化是指________。为了检测Bar基因是否转录出mRNA，常用________技术。
（4）过程④表示水稻细胞经过________获得水稻幼苗的过程，该过程必须经历的两个阶段是________。

【推荐1】2023年由西北农林科技大学奶牛种业创新团队培育的首批优质克隆奶牛在宁夏灵武市出生，克隆奶牛的培育流程如图所示。请回答下列问题：

   

(1)体外进行甲牛体细胞培养时，需提供的气体条件为_____。前期操作若需大量采集获得乙牛的卵母细胞，可用激素对乙牛做_____处理。
(2)一般需将胚胎在体外培养到一定的发育阶段才能进行移植，过程②表示_____，该技术的优势是_____。图示过程中的重组胚胎还可放入_____中保存。
(3)奶牛丁的绝大部分性状和_____（填“甲”“乙”或“丙”）牛的性状一致，理由是_____。
(4)除图中所示外，胚胎移植技术中胚胎的来源还有_____（至少答出两点）。

【推荐2】2018年1月25日，我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶（Kd4d）的mRNA，经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物一食蟹猴，流程如图所示，①～⑥表示过程，该动物可作为研究癌症等人类疾病的动物模型。请分析回答：

（1）2001年，美国科学家已经培育出胚胎细胞核移植猴，获得食蟹猴的体细胞核移植技术难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是__________________________，恢复其全能性较难。
（2）进行过程①时，细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有____________。在进行细胞原代培养时会出现_____________和细胞接触抑制现象。
（3）动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是_____________，去掉卵母细胞细胞核的目的是_____________。
（4）图中过程⑤用到胚胎移植技术，其实质是早期胚胎在_____________条件下空间位置的转移。
（5）研究人员在确定去甲基化（Kd4d）的mRNA的作用时，做了两组实验，其中A组用正常培养液培养融合细胞，B组用正常培养液培养注入了Kd4d的mRNA的融合细胞，实验结果如下图所示。分析实验数据可知，Kd4dmRNA的作用是__________________________。

注：X为融合细胞发育成的胚胎数；Y为囊胚数；Z为内细胞团数，
（6）假如用胚胎分割移植的方式来克隆食蟹猴，依据的原理是_____________，胚胎分割时应注意的问题是_____________。

【推荐3】M基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得M基因失活的转基因克隆动物A，流程如图所示。回答下列问题：


(1)传统的细胞核移植技术中，受体卵母细胞普遍使用______________方法去核，所去的“核”是指______________。
(2)在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是______________。
(3)与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是______________。
(4)为了获得更多的克隆动物A，可在胚胎移植前进行分割，分割胚胎时要注意______________
(5)鉴定转基因动物：以免疫小鼠的______________淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选融合杂种细胞，制备M蛋白的单克隆抗体。简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否失活的实验思路______________。

【推荐1】二倍体哺乳动物体细胞不易进行基因操作和筛选，而生殖细胞已高度分化，不能在体外扩增培养。我国科学家建立了小鼠哺乳动物单倍体胚胎干细胞系，为基因操作找到了新的动物模型（过程如图所示），据图回答下列问题：

（1）胚胎干细胞可以取自嚢胚的_________细胞，也可以从胎儿的_________获取。
（2）在过程①中，科学家采用两种策略来获得小鼠的孤雄单倍体胚胎，一是将受精后获得的合子胚胎的雌原核去除，另一种方法可能是向_________的卵母细胞中注射成熟精子的_________。
（3）图中过程③通常采用的方法是_________，过程④采用的技术手段是_________，由此可见，单倍体胚胎干细胞能够代替精子，使卵细胞成功“受精”支撑小鼠胚胎的全程发育。
（4）进行过程⑥的优势是__________________，为增加后代的数量可以通过_________技术对胚胎进行处理，要注意将_________均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

【推荐2】毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFII基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。

   

(1)构建基因表达载体时，为确保KIFII基因在受体细胞中能顺利表达，必须在基因的两端加上____________。
(2)培养成纤维细胞和卵母细胞需要的气体环境是____________的混合气体。
(3)在过程③中为了获得比自然情况下更多的卵（母）细胞，需用____________处理成年母绒山羊。
(4)早期胚胎能够在代孕母羊子宫存活的生理学基础是____________。
(5)目前科学家通过蛋白质工程制造出了味道鲜美的羊肌肉蛋白，采用蛋白质工程制造出味道鲜美的羊肌肉蛋白的思路是____________（排序）
①推测羊肌肉蛋白的氨基酸序列
②从羊肌肉蛋白的预期功能出发，设计其结构
③找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列或合成新的基因
④获得味道鲜美的羊肌肉蛋白

【推荐3】电影中，“蜘蛛侠”能产生高强度的蜘蛛丝，现实中的基因工程也创造出了“蜘蛛羊”，该羊的乳汁中含有蛛丝蛋白，高强度的蛛丝蛋白可用于许多重要的特种工业领域。请回答：
(1)为保证实验成功，产生蛛丝蛋白的基因需要从_________ (基因组/ cDNA)文库中获取，并与_______ 等调控组件重组在一起，然后与载体相连构建成为表达载体；再通过_________等方法，将表达载体导入羊的______________，获得重组细胞。
(2)将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过_________处理的受体母羊子宫内。因为我们对细胞所需的营养条件还没有完全研究清楚，所以在早期胚胎的培养中，往往还需要添加__________。若需要一次产生两头转基因“蜘蛛羊”，可将早期胚胎进行________处理。
(3)若所得到的“蜘蛛羊”（已知表达载体已进入细胞)乳汁中没有检测到蛛丝蛋白，科学家为判断问题所在，应该用_________的方法，先检测__________________，若已确认此步成功,则应该继续检测____________。

【推荐1】应用生物工程技术获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

（1）在培育转人生长激素基因牛过程中，①过程需要的工具酶是_________________，②过程常用的方法是_______________。
（2）转人生长激素基因牛可通过分泌的乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有_________________。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用________________和____技术，培育出多头相同的转基因犊牛。
（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是___________细胞，Ⅲ代表的细胞具有_____________________________的特点。
（4）在抗虫棉培育过程中，④过程中的受体细胞如果采用___________________，与采用叶肉细胞相比较，其优点是全能性高，⑤过程采用的技术是_______________________。

【推荐2】随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图回答下列问题：

   

(1)应用1中，细胞B的获取需对供体2注射____________以便获得更多的卵母细胞，使用核移植技术获得重组细胞，最终获得的良种小牛，该技术的原理是____________________。
(2)应用2中，将早期胚胎注入受体牛子宫内的技术叫_____________，为使受体牛生理状况更适合完成该技术操作，要对受体牛进行______________处理，以提高成功率。
(3)在应用2、3、4中，将收集的精子放在一定浓度溶液中进行培养，使其获得受精能力，这一生理现象称为__________。从母体内获得的卵母细胞需要培养到__________（填时期）才能与精子结合。受精过程中防止多精入卵的生理反应包括__________反应和__________反应。
(4)应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题：通过______________技术获得二分胚①和②，在分割囊胚阶段的胚胎时，要注意将_______________均等分割。
(5)应用4中细胞进行定向诱导，可分化形成各种组织和器官。在胚胎干细胞培养过程中，由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，因此在使用合成培养基时，通常需要加入________等一些天然成分。培养过程中除需要适宜的温度、pH和渗透压、无菌、无毒等环境条件以外，在进行细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，并将它们置于含有_______________的混合气体的CO₂培养箱中进行培养。

【推荐3】新冠病毒的遗传物质为RNA，下图为科研人员利用基因工程与胚胎工程获取新冠病毒疫苗的流程图，最终可从转基因牛的牛奶中获取抗原蛋白进行疫苗制备。请据图回答下列问题：

(1)①过程中若要获得能与质粒连接的抗原基因，需要用到的酶是_____，且要将该基因与_____基因的启动子等调控组件重组在一起。
(2)结构②称为_____，该结构可采用_____技术将其导入至受体细胞。
(3)受体细胞可采用受精卵或_____胚阶段的细胞，因为该阶段的每一个细胞都具有_____的潜能。
(4)为获得多个胚胎，可在③时期进行胚胎分割，为保证分割后的胚胎恢复和进一步发育，分割囊胚时应注意_____。获得的多个胚胎可分别移植到多个受体牛中，其生理学基础是_____。