【推荐1】研究发现人溶菌酶（hLZ）是天然抗生素替代品。科学家培育出转入溶菌酶基因山羊，以大规模生产人溶菌酶（从乳汁中提取）。过程如图所示。其中编号①~⑨表示过程;质粒S中的基因Leu通过控制相关酶的合成而控制亮氨酸的合成（亮氨酸是山羊细胞维持生命活动必不可少的一种必需氨基酸），基因GFP控制合成绿色荧光蛋白。四种限制性核酸内切酶的识别序列及切割位点见下表。请回答下列问题：

限制酶	BamHI	BglⅡ	HindⅢ	XbaI
识别序列和切割位点	G↓GATCC	A↓GATCT	A↓AGCTT	T↓CTAGA

(1)过程②需要的限制性核酸内切酶是_____________在③中，B与切割后的质粒S用DNA连接酶连接，在两个片段相邻处形成______________，获得重组质粒T。
(2)为成功筛选出含重组质粒T的成纤维细胞。质粒S中用作标记基因的是_____________。为达到筛选目的，培养基的营养成分中特殊之处是_____________。若用PCR检测目的基因是否成功导入受体细胞中，实验组以待测的样本DNA为模板，使用目的基因的特异性引物进行PCR扩增，同时将以目的基因片段为模板的组别作为阳性对照组，将以_____________为模板的组别作为阴性对照组。
(3)过程⑧中_____________（填“需要”或“不需要”）添加胚胎成纤维细胞，图中早期胚胎的_____________（填结构）将发育成完整转基因羊个体。培育出的山羊可从乳汁中获得基因表达产物，但是与膀胱生物反应器相比，它还是受到了转基因动物的_____________（答出2点）的限制。

【推荐2】为解除柑橘黄龙病对柑橘产业的严重影响，美国科学家近日从菠菜中获得了一种能抵抗柑橘黄龙病的蛋白质的基因，并已经成功地进行了一系列培育转基因植株的研究。其过程大致如下，请分析后作答。

（1）有两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从菠菜基因组DNA上切下目的基因并取代Ti质粒（4．0 kb）上相应的EF区域（0．2 kb）形成重组质粒，该过程还必须用到的酶是_____，形成的重组质粒_____填“能”或“不能”）被E酶切割。
（2）若图中Ti质粒上限制酶G切割位点与E的切割位点距离0．9 kb，限制酶H切割位点距F切割位点0．5 kb，分别用限制酶G和限制酶H酶切两份重组质粒样品，结果如下表。据此可判断目的基因的大小为_____kb;并将目的基因内部的限制酶H切割位点标注在下图中____。

G	H
1．8 kb 3．2 kb	1．3 kb 3．7 kb

（3）在上述培育过程中两次用到农杆菌，它与柑橘细胞相比较，在结构上最主要的区别是_____，导入重组质粒后的农杆菌的作用是_____。

【推荐3】2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

注：图中通过过程①、②形成重组质粒，限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
(1)在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接_____，理由是：_____。
(2)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_____。可以利用转基因克隆猪技术解决的医学难题是，在器官移植中可以避免_____。
(3)上述图中转基因克隆猪运用了基因工程、 _____ 、_____等生物技术。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：_____（用数字表示）。①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）④表达出蓝色荧光蛋白。

【推荐1】黄曲霉毒素B1 (AFB1)存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起瘤变。某些微生物能合成AFB1解毒酶。将该酶添加在饲料中可以降解AFB1，清除其毒性。下图为采用基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图。请回答：

(1)AFB1属于______致癌因子，使细胞内的原癌基因和抑癌基因发生突变，导致正常细胞癌变。
(2)基因工程常见的运载工具(体)有______________等（至少写两个）。将目的基因导入酵母细胞，最常用的化学方法是______________。
(3)酵母细胞导入AFB1解毒酶基因后，采用______________技术，检测到AFB1解毒酶基因存在酵母细胞内。实验发现酵母菌中没有检测到合成的AFB1解毒酶，分析原因可能是______________。
(4)采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是:从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的__________________________________。
(5)生态工程需遵循其基本原理，系统整体性原理强调各组分之间要有______________，只有这样地才能顺利完成能量、物质、信息等的转换和流通，并且实现___________________。

【推荐2】利用蛋白质工程可以提高玉米赖氨酸含量，改造途径如下：

结果：改造后玉米叶片和种子中游离赖氨酸含量分别提高5倍和2倍。探究下列问题：
(1)结合上述资料，可以通过何种途径提高玉米中的赖氨酸含量？____
(2)为什么改变一个氨基酸就可以改变蛋白质的稳定性甚至某种蛋白质酶的活性？____

【推荐3】1965年中国科学家人工合成了具有生物活性的结晶牛胰岛素，摘取了人工合成蛋白质的桂冠。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：AB法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；BCA法是利用胰岛B细胞中的mRNA得到胰岛素基因，导入工程菌获得胰岛素。这两种方法使用同一种质粒作为载体。
(1)AB法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列的原因是___________。用___________（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
   
(2)上图中是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶____________的识别序列。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，已知胰岛素基因左端①处的碱基序列为-CCTTTCAGCTCA-，则其中一种引物设计的序列是5'-_____________-3'。
(3)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。据此并结合图中信息简述将目的基因导入大肠杆菌，并筛选工程菌的实验思路是___________。
(4)科学家利用蛋白质工程技术，研制出了赖脯胰岛素，与天然胰岛素相比，其皮下注射后易吸收、起效快。写出获取赖脯胰岛素基因的流程：从___________→设计预期的蛋白质结构→___________→找到相对于的脱氧核苷酸序列→获得所需要的蛋白质。

【推荐1】图1为Ti质粒酶切图谱。图2为含Bt基因（杀虫毒蛋白基因）的外源DNA片段的限制酶酶切图谱。图3表示相关限制酶的识别序列及切割位点。现欲通过农杆菌转化法培育转Bt基因抗虫棉。回答下列问题：

(1)除四环素抗性基因和Bt基因外，作为表达载体，该质粒至少还应该具有________等调控元件；PstⅠ等的识别序列及切割位点应位于_____片段内，以确保Bt基因随Ti质粒进入棉花细胞后能插入到棉花细胞中的染色体DNA上。
(2)为保证Bt基因与Ti质粒的正常连接，应选用________酶和MseⅠ酶切割外源DNA，并将Ti质粒上的序列“GAATTC”改造为________________________。
(3)转Bt基因的棉花细胞经过____________过程可以培育成转基因棉花幼苗；利用抗原—抗体反应等原理，可以检测转基因抗虫棉幼叶中的Bt毒蛋白及其含量，以此来检测_____________。
(4)我国发放了6种转基因植物进口安全证书，但进口的基本上是转基因棉花的纤维而不是转基因玉米等粮食产品，从转基因技术安全性的角度分析，原因是_________________。

【推荐2】新型冠状病毒（COVID-19)的核酸检测采用反转录PCR技术。先将待测样本处理后先将样本RNA反转录为cDNA,再以cDNA为模板进行扩增。请据此回答下列问题：
（1）反转录PCR反应中热变性过程DNA结构的变化是____________________。
（2）COVID-19的遗传物质一般不能作为基因工程的载体，原因是 ______________________。
（3）研究人员在研发核酸检测的同时，为了临床快速缓解患者症状，需要短时间内制备大量抗体。具体步骤为：将减毒冠状病毒多次注射到小鼠体内，获取其脾脏中的______________细胞，与骨髓瘤细胞在适宜条件下共同培养，加入 ___________（诱导剂）使其融合，细胞融合过程运用了____________原理。该方法是_____________________技术的重要应用。

【推荐3】CD87是一种癌细胞膜上的受体蛋白，与癌细胞的转移和增殖有关。研发针对CD87的抗体类药物能提高癌症的治愈率。
(1)单克隆抗体制备过程如图]所示，其中HAT培养基用于筛选杂交瘤细胞。

细胞①表示小鼠的___________细胞，获取杂交瘤细胞后，需在全营养培养基中培养一段时间，目的是_________。经过筛选的杂交瘤细胞可通过注入小鼠腹腔或在培养液中进行扩大培养并不断产生单克隆抗体。
(2)双特异性抗体是指同时具有两种抗原结合位点的人造抗体，研究人员利用基因工程等技术制备具有CD3和CD87结合位点的双特异性抗体（见图2）。备注：CD3是T细胞表面特异性抗原，在所有T细胞膜上均有表达，该抗原被激活后，能极大促进T细胞的免疫效力。

①设计目的基因序列：通过查阅基因数据库，获得CD3和CD87蛋白对应的碱基序列和氨基酸序列，为使两种抗体蛋白能结合形成有功能的抗体，利用计算机辅助设计技术，设计改造蛋白质的___________，推测其可能的氨基酸序列和碱基序列。
②获取目的基因：利用___________获取目的基因后，通过PCR扩增，采用的引物如图3所示。

③构建重组质粒：选用含LacO位点的质粒作为载体。LacO位点常与阻遏蛋白（LacⅠ基因表达产物）结合，阻止RNA聚合酶的移动，环境中的乳糖能解除阻遏蛋白的作用。将目的基因与质粒连接，形成图4所示的重组质粒。LacO位点的作用是___________。
④重组质粒的导入和检测：将重组质粒与经CaCl₂处理的大肠杆菌共培养一段时间后，将菌种接种在含四环素的培养基中培养，获得的大肠杆菌需鉴定是否含有重组质粒，原因是_________。提取大肠杆菌总DNA后，根据表中4种限制酶的识别序列，采用___________酶进行酶切，电冰后若存在1150bp左右长度的条带，则说明导入了重组质粒。

酶	识别序列
EcoRⅠ	5＇-G^AATTC-3＇
BgⅢ	5＇-A^GATCT-3＇
BamHⅠ	5＇-G^AGATC-3＇
XhoⅠ	5＇-C^ATCGA-3＇
备注：“^”表示酶切位点

⑤双特异性抗体的生产：将筛选出的大肠杆菌扩大培养后，接种在发酵罐中进行大规模发酵。
(3)相对于单克隆抗体，图示双特异性抗体在治疗癌症时的效果更好，推测原因是__________。