【推荐1】重组质粒pMM085常用来生产工程疫苗，但因含氯霉素抗性基因cat，有增加环境中抗药基因的风险。pKD46是一种热敏感型工具质粒，只能在低于37℃的温度条件下稳定存在，它携带的Red基因在阿拉伯糖的诱导下表达Red重组蛋白，通过体内同源重组进行靶向基因敲除，原理如图1所示。asd基因编码细菌二氨基庚二酸（DAP）合成途径的关键酶，DAP是大肠杆菌细胞壁的主要成分，当asd基因缺失时，将导致菌株生长对DAP的依赖性。研究人员将质粒pMM085和pKD46导入asd缺失型大肠杆菌中，通过Red同源重组，将pMM085中的cat基因替换为asd基因，构建无抗性菌苗株，如图2所示。

(1)据图1分析，与传统转基因技术相比，Red体内同源重组具有的特点是：_____
(2)无抗药性菌苗的构建过程中（图2），①中应先用_____处理，使asd基因缺陷型大肠杆菌处于感受态，然后将pMM085和pKD46转入大肠杆菌，经_____诱导后，电击导入asd基因，获得重组质粒。
(3)将②中获得的菌液采用_____方法接种到LB培养基上，37℃培养得到单菌落。37℃培养的目的是_____（请答出两点）
(4)挑取步骤③中获得的10个单菌落细胞进行PCR鉴定，得到电泳图谱（图3），电泳结果说明_____。科研人员在上述实验基础上重新提取③中质粒再转化宿主菌，经选择性培养基筛选后获得仅含重组质粒的单菌落，请简要写出筛选的思路_____。

【推荐3】乙醇作为可再生清洁能源，具有良好的应用前景。酵母菌可利用纤维素生产乙醇，此过程中产生的乙酸等物质会抑制酵母菌的生长和发酵，进而影响乙醇的产量。为选择合适的菌株，提高乙醇产量，科研人员进行下列实验。
(1)酵母菌细胞通过____________（填生理过程）产生乙醇，此生理过程的场所是____________。
(2)科研人员基于前期实验，获得两株高表达MRP8的酵母菌菌种P1和P2。将菌种________后，分别涂布于不同的培养基上，培养一段时间后，记录菌落生长情况，结果如图1。实验结果表明__________。

   

(3)将野生型酵母菌和P2菌分别接种于含4.8g/L乙酸的两个发酵罐中。一段时间后，检测发酵罐中葡萄糖消耗量和乙醇的生成量，结果如图2。

   

科研人员认为：在实际生产中，使用P2菌株比使用野生型菌株更有利用提高乙醇产量，判断的依据是______。
(4)高浓度乙酸会导致野生型酵母菌细胞内活性氧自由基（ROS） 积累，引起细胞器损伤，加速细胞衰老， 乙醇产量下降。为抵御ROS的伤害，野生型酵母菌细胞内SOD1增加，清除部分ROS。研究发现，与无乙酸条件相比，在5g/L乙酸条件下P2中MRP8表达量提高了约11倍、SOD1的表达量明显降低。依据上述信息， 完善P2菌株乙酸耐受的机理：
乙酸→诱导____________→____________ →细胞器损伤程度降低→提高乙醇生产强度

【推荐3】酵母菌的液泡中存在着多种水解酶，其中包括CPY（羧肽酶）和API（氨肽酶I）。科研人员对CPY和API的运输途径进行了研究。
(1)CPY和API在细胞内的______上合成，进入液泡后，能够催化蛋白质的分解，使液泡具有了类似______（填细胞器名称）的功能，进而调节细胞内的环境。
(2)已有研究表明，通过内质网-高尔基体途径进入液泡的蛋白质，要经过在内质网中切除信号肽、在高尔基体中糖基化（添加糖链）、进入液泡后再切除肽段，才能成熟。为判断CPY和API进入液泡的途径，科研人员进行了下列实验。
①实验一：科研人员提取这两种蛋白质，利用电泳技术检测二者加工前后分子量的变化，结果如下图1。B组与A组相比，加入衣霉素2小时后，蛋白质分子量______；API成熟过程中______（有/没有）糖基化，推断API的加工过程可能与CPY不同。

注：衣霉素能抑制蛋白质的糖基化
②实验二：利用温度敏感型酵母菌突变体sec（高温下，内质网到高尔基体囊泡运输受阻）进行实验，在高温和常温下检测CPY和API是否加工成熟，实验结果如下图2所示。由电泳结果可以判断，CPY和API进入液泡的途径分别是______。
A.CPY和API都经过内质网-高尔基体途径进入液泡
B.CPY和API都不经过内质网-高尔基体途径进入液泡
C.CPY经过内质网-高尔基体途径进入液泡，API不是
D.API经过内质网-高尔基体途径进入液泡，CPY不是
(3)科研人员对API进入液泡的途径提出了两种假说：一是API的肽链一边合成，一边穿过液泡膜；二是API在细胞质基质中被生物膜包裹形成小泡，而后进入液泡。科研人员在电子显微镜下观察野生型和另一种酵母菌突变体cvt（API蛋白质无法成熟），结果如下图3。


注：液泡内的黑色颗粒是API的位置；箭头所指为包裹着API的小泡。
①据观察，API进入液泡的途径符合假说______。
②尝试解释野生型和突变体cvt液泡内API存在方式不同的原因______。