【推荐1】如图为转基因抗虫植株的培育过程，①一⑤为不同过程。根据所学知识回答下列问题：

（1）A的本质是_____，基因工程的运载体除此之外还有_____。
（2）过程①和过程②需要用到的工具酶是_____。过程②得到的B中含有标记基目的作用是_____。
（3）图中过程不涉及碱基互补配对的过程是_____，过程④使抗虫基因插入植物体细胞染色体DNA，原因是_____。检测抗虫基因是否整合到棉花细胞DNA分子上可采用_____。
（4）过程④、⑤得到转基因抗虫植株的原理是_____，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加_____。

【推荐2】维生素A在体内转化为11-顺式视黄醛后，与视网膜特定细胞中的视蛋白结合成视紫红质。视紫红质接受光信号后，11-顺式视黄醛转变为全反式视黄醛，视紫红质构象发生变化，激活细胞内的信号通路，最终产生视觉。全反式视黄醛与视蛋白脱离，经复杂的转运和酶促反应，再度转变为11-顺式视黄醛而被重复利用。最新研究表明，一种G蛋白偶联受体RGR可能参与了视觉产生的某些过程。为研究RGR的作用机理，某研究小组利用基因工程培育出含RGR反义基因（反义基因是通过原基因反向连接在载体的启动子和终止子之间，其转录出的mRNA与原基因转录出的mRNA互补配对）的转基因小鼠（rgr），研究该基因的功能。回答下列问题：
      
(1)为构建RGR反义基因重组载体，需先设计引物，通过PCR技术特异性扩增RGR基因。为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，即在引物A和引物B分别添加____________限制酶识别序列。引物的化学本质一般是___________。
(2)培养转基因小鼠过程中，将基因表达载体导入受体细胞常用的方法是__________，常用的受体细胞是受精卵，选择培养基中除有动物细胞培养的必需成分，还需要添加___________起筛选作用。
(3)研究人员将正常小鼠（WT）和转基因小鼠（rgr）都平均分成两组，一组在黑暗中饲养12h，另一组在光照下饲养12h；随后测定小鼠眼睛中11-顺式视黄醛、全反式视黄醛和视紫红质的含量，结果如图所示。据图分析，光照条件下RGR的作用机理可能是__________。

   

【推荐3】科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ四种限制性内切核酸酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为氨苄青霉素抗性基因），其中①~④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，甲、乙表示相关结构或细胞。请据图作答：

(1)在构建重组DNA时，可用一种或多种限制性内切核酸酶进行切割，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实验中应该选用限制性内切核酸酶_____分别对鱼抗冻蛋白基因和质粒进行切割，切割后产生的DNA片段分别为_____种和_____种。
(2)基因工程中的核心步骤是_____（填序号），该步骤的目的是_____。为了使目的基因正常表达，其上游必须有启动子，它是_____识别和结合的部位。若限制酶切出了平末端，要选择_____进行连接（填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
(3)图中将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞的方法称为_____。它是利用载体Ti质粒中含有_____，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体DNA上。
(4)检测番茄植株细胞中鱼抗冻蛋白基因是否成功表达，从分子水平上常采用的方法是_____。

【推荐1】玉米由于含有Ppc酶，能在高光强、高温和高氧分压的条件下利用更低浓度的CO₂，水稻却不能。科学家想把该Ppc基因利用农杆菌转化法将其转入水稻体内，从而提高水稻的光合效率。请回答：
（1）利用玉米的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的_____，其原因是____________________________________________。
（2）经测定编码Ppc酶的cDNA序列（假设只编码从起始密码子到终止密码子之间的序列）为1256对碱基，则可判断对这段序列的测定是错误的，理由是________________________________。
（3）将Ppc基因插入Ti质粒的_______________中，构建基因表达载体并导入农杆菌中。目的基因是否成功导入植物细胞，可以用________________技术进行检测。
（4）若经组织培养获得的转基因植株的核DNA中仅插入一个基因，让其自交，在子代含Ppc基因的植株中，纯合子占_________；若转基因植株的核DNA中插入2个基因（插入到非同源染色体上）让其自交，在子代含Ppc基因的植株中，能稳定遗传的占_________。

【推荐2】【生物——选修3：现代生物科技专题】
基因工程又叫做DNA重组技术，植物细胞、动物细胞、微生物细胞都可以作为受体细胞。动物基因工程经常和胚胎工程结合使用，请结合所学知识回答下列问题：
（1）若要将某目的基因导入双子叶植物细胞采用最多的方法是____________。
（2）把目的基因导入动物细胞最有效的方法是____________技术：先利用____________激素做超数排卵处理从雌性动物体内获得多个卵子，直接与_____________________的精子在________________________（液体）中完成体外受精；再将含有目的基因的表达载体提纯，利用相应仪器进行操作，获得含有目的基因的受精卵；此受精卵经过____________培养一段时间后，再移植到雌性动物的输卵管或____________内，使其发育成为具有新性状的动物。此技术通常选择受精卵而不是体细胞做受体细胞，原因是_______________________。

【推荐3】为大量生产人血清白蛋白，科学家将人血清白蛋白基因（HSA基因）导入到动物体内获得动物乳腺生物反应器。回答下列问题：
(1)以mRNA为模板可合成HSA基因，与从基因组文库获取目的基因相比，该方法获得的HSA基因中不包含____至少答出2项）序列。
(2)用PCR技术扩增HSA基因时，设计引物的依据是______。为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列。下图为所用载体结构示意图，载体中限制酶的识别序列及切割位点见下表（HSA基因序列中无图中限制酶的识别序列）。

限制酶	HindⅢ	EcoRI	PvitⅡ	PstI	KpnI	BamHI
识别序列及切割位点	A↓AGCTT TTCGA↑A	G↓AATTC CTTAA↑G	CAG↓CTG GTC↑GAC	CTGC↓AG GA↑CGTC	G↓GTACC CCATG↑G	G↓GATCC CCTAG↑G

则应在扩增的HSA基因两端分别引入_____________两种不同限制酶的识别序列。连接经过这两种酶切割的HSA基因和载体进行时，选用_____________（填“E.ColiDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
(3)为保证HSA基因成功表达，应将HSA基因与_______等调控组件重组在一起。将构建含有HSA基因的表达载体导入_____中，利用_________（答出2项）等胚胎工程的技术手段获得动物乳腺生物反应器。
(4)为获得更多动物乳腺生物反应器，科研人员采用细胞核移植克隆乳腺生物反应器。发现囊胚细胞核移植比体细胞核移植更有优势，其原因是________。

【推荐1】科研人员培育了一种能够降解餐厨废弃物并生成乳酸的转基因毕赤酵母。基本思路是在乳酸脱氢酶基因（LDH）的单基因表达载体中逐个接入糖化酶基因（Ga）表达盒与α-淀粉酶基因（Amy）表达盒，构建出AGL-三基因表达载体，如下图1所示。

(1)快速获得大量目的基因的技术是___________，获得的产物通常采用___________技术来鉴定。
(2)培育转基因毕赤酵母的关键步骤是___________，将图1所示结构“导入”毕赤酵母后，将毕赤酵母转移至含___________的培养基中进行培养，筛选出能够生存的菌落。
(3)构建三基因表达载体的难点在于构建目的基因的表达盒，下图2为Amy表达盒的构建过程。（pro为启动子；AOXTT为终止子；Bsp119Ⅰ、XbaⅠ、BglⅡ、BamHⅠ为不同限制酶，①②为操作过程。）

操作①的处理是：将质粒1与α-淀粉酶基因均用Bsp119Ⅰ与XbaⅠ两种不同的限制酶处理，然后拼接。与用一种限制酶处理相比，优点是___________（答出两点）；操作②中必须用___________酶对质粒2处理，才能获得能正常表达的α-淀粉酶基因表达盒。

【推荐2】我国科学家利用Bt毒蛋白基因转入普通棉花，培育出转基因的抗虫棉，对棉铃虫有较强抗性。回答下列问题：
（1）从苏云金芽孢杆菌中分离出Bt毒蛋白基因，构建基因表达载体导入棉花细胞。获得的抗虫棉也能产生相同的Bt毒蛋白，从翻译的角度分析,其原理是___________________________________。
（2）从分子水平检测抗虫棉是否培育成功，可以利用抗原-抗体杂交来检测。若有__________出现，说明已形成Bt毒蛋白。在该检测方法中，Bt毒蛋白属于____________ 。
（3）从个体水平鉴定抗虫棉是否培育成功，取一定量长势良好的转基因棉花植株接种适量的棉铃虫作为实验组，对照组如何设置：_______________________________。在相同且适宜的条件下培养一段时间，观察并统计两组棉花叶片的受损程度。获得的抗虫棉若要扩大生产， 可以通过_________________________ 技术进行微型繁殖。
（4）在农业生产中，抗虫棉大面积种植的区域还需配套种植一定量的普通棉花，从进化的角度分析，原因是__________________________________________________________________ 。

【推荐3】2021年10月21日，习近平总书记在黄河三角洲农业高新技术产业示范区考察调研时强调。开展盐碱地综合利用对保障国家粮食安全、端牢中国饭碗具有重要战略意义。盐害是影响农业生产的非生物胁迫因子之一，植物在高盐胁迫下会产生大量H₂O₂和MDA（膜脂过氧化物）。LEA蛋白在植物遭受重大非生物胁迫时（如：盐害）起到很大的保护作用，科研人员将耐盐酵母LEA蛋白基因NLEAs导入大豆培育转耐盐基因大豆植株。
(1)为获取NLEAs基因，可从酵母中提取总mRNA，经___过程得到cDNA，再用PCR特异性的快速扩增。PCR利用了___原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。
(2)将NLEAs基因导入大豆细胞，常采用农杆菌转化法。在构建含目的基因的重组Ti质粒载体过程中，目的基因序列中能否含有用到的限制酶的识别序列___（能/不能），原因是___。
(3)科研人员从转耐盐NLEAs基因大豆根部提取到了大量LEA蛋白，但还是无法说明该基因工程操作是否成功，还需要从个体水平上设计实验进行验证。
实验设计思路___。
预期实验结果___。

【推荐1】甲植物(2n=18)具有由核基因控制的多种优良性状，远缘植物乙(4n=32)的细胞质中存在抗除草剂基因，科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗除草剂性状的优良品种丙，途径如图所示。已知X射线处理会使细胞分裂功能丧失但不影响线粒体功能，丙烯酸异辛酯(IOA)处理会使线粒体失活，但不影响细胞分裂。回答下列问题:
   
(1)利用植物体细胞杂交技术获得新植物体，利用的生物学原理是________。取植物的顶芽细胞进行培育，有利于获得脱毒苗，原因是________。
(2)过程①常用酶解法去除细胞壁，利用的酶是_________________。过程②常用物理法促进细胞融合，如________(答出1点)。
(3)在细胞融合体系中，未融合的细胞不能形成愈伤组织，原因是_________________。杂种植株丙抗除草剂基因不会通过花粉造成基因污染，原因是_________。
(4)植物体细胞杂交成功的关键是无菌操作，对培养皿采用的灭菌方法是_________________。

【推荐2】黄花蒿中含有的脂类化合物青蒿素，是治疗疟疾的特效药。目前从野生黄花蒿中提取的青蒿素在市场上已经供不应求。因此研究人员采用了多种不同技术来获取更多的青蒿素。请分析相关问题：
(1)利用植物组织培养技术快速繁殖黄花蒿。
选取黄花蒿的离体组织作为外植体，先经过_______过程，获得愈伤组织，再经过_______过程，得到黄花蒿幼苗。该培养过程中除需要控制适宜的温度、无菌等环境条件外，培养基中要加入充分而全面的营养物质以及_______。由于_______，所以离体繁殖速度比常规繁殖方法要快数万倍。
(2)以植物细胞为反应器获取青蒿素。
①制备黄花蒿单细胞悬液。细胞分离常用方法有三种方法：其一是直接从外植体分离，包括机械法或酶解法，后者常用_______酶处理；其二是愈伤组织诱导法，愈伤组织相对松散，可直接放入_______在摇床上进行振荡培养，获得单细胞悬浮液；其三是原生质体培养法，在0.5-0.6mol/L的甘露醇溶液（作用是_______）中，用纤维素酶和果胶酶处理根尖、叶片、愈伤组织等细胞，获得球形的原生质体，然后在适宜条件下诱导再生出_______，获得单个植物细胞。
②特定细胞系的培养。上述细胞经过初步培养，选出_______的细胞，在液体培养基中进行悬浮培养，获得大量能合成青蒿素的细胞系，用于工业化生产。在该培养过程中，能影响青蒿素产量的因素除培养基因素外，还有哪些因素？_______（列举两项）
③产物分离。根据青蒿素易溶于有机溶剂的特性，可以采用_______法分离产物。
(3)利用转基因技术培育生产青蒿素前体的酿酒酵母。
该方法是将青蒿素的前体物质青蒿酸合成过程中的两种关键酶的基因作为目的基因，导入酵母细胞，其技术的核心是_______，与植物细胞培养相比有哪些优点？_______（列举两项）

【推荐3】某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，它们的识别序列和黏性末端各不相同。质粒同时也含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）将抗盐基因导入烟草细胞内，使烟草植株产生抗盐性状，这种变异属于________。
（2）如果将抗盐基因直接导入烟草细胞，一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能________________________________。
（3）在构建重组质粒时，应选用________和________两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。
（4）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法（使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入了农杆菌。

培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有________、________。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是________（填数字）菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用__________标记的含抗盐基因的DNA片段作探针进行分子杂交检测，又要用______________的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。
（5）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用________技术，愈伤组织经________进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加______。