下表中列出了几种限制性核酸内切酶识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制性核酸内切酶的酶切位点。请回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/9/30/2819470592417792/2822022793682944/STEM/afb89fe1b2f44e30afbeff940e093d13.png?resizew=455)
(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后,分别含有________ 个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造,插入的SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性越________ 。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割,原因是____________________________________________________________
(4)与只使用EcoRⅠ相比较,使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制性核酸内切酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止________________ 。
(5)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入________ 酶。
(6)现使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制性核酸内切酶同时处理质粒、外源DNA,并经拼接获得的重组质粒进行再次酶切,假设所用的酶均可将识别位点完全切开,请根据图1、2中标示的酶切位点及表所列的识别序列,对以下酶切结果作出判断。
①采用BamHⅠ和HindⅢ酶切,得到________ 种DNA片段。
②采用EcoRⅠ和HindⅢ酶切,得到________ 种DNA片段。
限制性核酸内切酶 | BamHⅠ | HindⅢ | EcoRⅠ | SmaⅠ |
识别序列及切割位点 | G↓GATCC CCTAG↑G | A↓AGCTT TTCGA↑A | G↓AATTC CTTAA↑G | CCC↓GGG GGGCC↑C |
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(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后,分别含有
(2)若对图中质粒进行改造,插入的SmaⅠ酶切位点越多,质粒的热稳定性越
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割,原因是
(4)与只使用EcoRⅠ相比较,使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制性核酸内切酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止
(5)为了获取重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合,并加入
(6)现使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制性核酸内切酶同时处理质粒、外源DNA,并经拼接获得的重组质粒进行再次酶切,假设所用的酶均可将识别位点完全切开,请根据图1、2中标示的酶切位点及表所列的识别序列,对以下酶切结果作出判断。
①采用BamHⅠ和HindⅢ酶切,得到
②采用EcoRⅠ和HindⅢ酶切,得到
更新时间:2021-10-05 19:53:09
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【推荐1】如图是某核苷酸与核苷酸长链的示意图,据图回答问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2018/9/3/2024506005790720/2027802972569600/STEM/81060ab6cc644beb870432fb5c8eee27.png?resizew=263)
(1)已知图1的分子结构式右上角的含氮碱基为腺嘌呤(A),则图1所示的核苷酸的名称是________ 。该核苷酸是构成哪一种核酸的原料?________ 。
(2)图2为一条核苷酸长链的片段, 4、5的名称分别是________ 、________ 。此结构中与另一种核酸相比较,其特有的碱基中文名称是________ 。
(3)通常由________ 条图示的核苷酸长链构成一个DNA分子,真核细胞中其主要分布在________ 。
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(1)已知图1的分子结构式右上角的含氮碱基为腺嘌呤(A),则图1所示的核苷酸的名称是
(2)图2为一条核苷酸长链的片段, 4、5的名称分别是
(3)通常由
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【推荐2】通过大量的科研实验证明,将双链DNA在中性盐溶液中进行加热,两条DNA单链会分开,该现象叫做DNA变性。变性后的DNA如果慢慢冷却,又能恢复成为双链DNA,该现象叫做DNA退火。据此回答以下问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/8/15/9fea8b33-7897-4f71-94cf-5f8995959a84.png?resizew=258)
(1)低温条件下DNA不会变性,说明DNA有稳定性,从结构上分析,外侧由磷酸和脱氧核糖交替连接形成基本骨架结构,内侧碱基对遵循____________ 原则。
(2)DNA变性时脱氧核苷酸分子间的共价键不受影响,而____________ 被打开;如果在细胞内,DNA复制过程中双链打开需要____________ 作用。
(3)研究发现,部分DNA完全解旋成单链所需的温度明显高于其他DNA,其最可能的原因是________________________ 。
(4)图A表示一个DNA分子两条链的N元素标记示意图。如果大量图A所示的DNA分子在变性后,经过降温退火会重新形成双链DNA分子。把这些重新形成的DNA分子进行离心,将位于图B所示的________ (轻、中、重)位置上。
(5)图A中α链中A、T之和占46%,则DNA分子中A、C之和所占比例为________ 。
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(1)低温条件下DNA不会变性,说明DNA有稳定性,从结构上分析,外侧由磷酸和脱氧核糖交替连接形成基本骨架结构,内侧碱基对遵循
(2)DNA变性时脱氧核苷酸分子间的共价键不受影响,而
(3)研究发现,部分DNA完全解旋成单链所需的温度明显高于其他DNA,其最可能的原因是
(4)图A表示一个DNA分子两条链的N元素标记示意图。如果大量图A所示的DNA分子在变性后,经过降温退火会重新形成双链DNA分子。把这些重新形成的DNA分子进行离心,将位于图B所示的
(5)图A中α链中A、T之和占46%,则DNA分子中A、C之和所占比例为
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【推荐3】下图是DNA分子结构示意图,据图回答下列问题。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/7/6/2758423785136128/2758990130241536/STEM/dfa7144e-c630-4964-b2d0-11de9b91cfc9.png)
(1)图中①是___________ ,②是___________ ,③与④之间通过___________ 连接,DNA分子两条链按反向平行方式盘旋成___________ 结构。
(2)DNA复制的方式是___________ ,发生在___________ 期。
(3)已知某一DNA片段中有100个碱基对,其中腺嘌呤有40个,在连续复制过程中,第四次复制时需要___________ 个游离的胞嘧啶脱氧核苷酸参加。
(4)DNA分子上分布着多个基因,基因是______________ 的DNA片段,遗传信息蕴藏在DNA分子的______________ 中。
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(1)图中①是
(2)DNA复制的方式是
(3)已知某一DNA片段中有100个碱基对,其中腺嘌呤有40个,在连续复制过程中,第四次复制时需要
(4)DNA分子上分布着多个基因,基因是
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【推荐1】根据基因工程的有关知识,据下图回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/11/1/3ad441af-bba4-4a53-bade-a8eb2b3fff6f.png?resizew=341)
(1)a代表的物质和质粒的化学本质都是_________ 。
(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下:
AATTC……G
为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切核酸酶切割,该酶必须具有的特点是__________________________ 。
(3)基因工程中除质粒外,_________ 和___________ 也可作为运载体;其作为运载体的必备条件___________ (至少两个)。运载体与目的基因连接时,DNA连接酶催化形成的化学键是___________ 。
(4)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上被称为_________ ,其作用是_____________ 。
(5)不同生物的基因可以拼接的结构基础是______________________________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/11/1/3ad441af-bba4-4a53-bade-a8eb2b3fff6f.png?resizew=341)
(1)a代表的物质和质粒的化学本质都是
(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下:
AATTC……G
G……CTTAA
为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切核酸酶切割,该酶必须具有的特点是
(3)基因工程中除质粒外,
(4)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上被称为
(5)不同生物的基因可以拼接的结构基础是
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【推荐2】如图是利用基因工程技术生产人胰岛素的流程示意图,请回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/7/22/77d8ac37-a1e3-4cf9-9786-bbf255319158.png?resizew=388)
(1)将质粒A和目的基因结合为重组质粒的过程中,需要使用的工具酶有__________ 。
(2)将重组质粒导入细菌B之前,常需要使用__________ 处理细菌B,使导入更易成功。
(3)在筛选目的细菌的过程中,我们应该选择__________(填选项)
(4)若通过乳腺生物反应器来生产人胰岛素,则通常将图示方法获得的目的基因与乳腺中特异表达的基因的__________ 等调控元件重组在一起,通过__________ 方法导入哺乳动物受精卵中。
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(1)将质粒A和目的基因结合为重组质粒的过程中,需要使用的工具酶有
(2)将重组质粒导入细菌B之前,常需要使用
(3)在筛选目的细菌的过程中,我们应该选择__________(填选项)
A.在含氨苄青霉素和四环素的培养基中都能存活的细菌 |
B.在含氨苄青霉素的培养基中能存活,在含四环素的培养基中不能存活的细菌 |
C.在含四环素的培养基中能存活,在含氨苄青霉素的培养基中不能存活的细菌 |
D.在含氨苄青霉素和四环素的培养基中都不能存活的细菌 |
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【推荐3】下图是三个DNA片段上(依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性内切酶的识别序列与切割位点)和某种质粒(质粒上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的)示意图。请回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2020/11/24/2599763545538560/2630986403676160/STEM/817113ad-bd1d-4ea0-b1ca-fb8de18c390c.png)
(1)某研究人员经BamHⅠ切割得到了目的基因。为了构建目的基因表达载体,质粒需用_____________ 进行切割,原因是_____________ 。将目的基因插入质粒中,还需用到_____________ 酶。
(2)目的基因的获得还可以采用PCR技术,设计引物时,引物中的碱基序列设计的依据是_____________ 和_____________ 。
(3)用单酶切法构建目的基因表达载体时,常会遇到目的基因自身环化和_____________ 的问题,因此在实践中,常用双酶切法。
(4)某研究人员利用图中的质粒构建了某种目的基因的三个表达载体,如图。其中不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有_____________ ,不能表达的原因是_____________ 。
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(1)某研究人员经BamHⅠ切割得到了目的基因。为了构建目的基因表达载体,质粒需用
(2)目的基因的获得还可以采用PCR技术,设计引物时,引物中的碱基序列设计的依据是
(3)用单酶切法构建目的基因表达载体时,常会遇到目的基因自身环化和
(4)某研究人员利用图中的质粒构建了某种目的基因的三个表达载体,如图。其中不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有
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【推荐1】回答下列(二)两个小题:
(二)植物被野生型农杆菌感染后会产生瘤状结构(类似愈伤组织),主要原因是农杆菌的Ti质粒中含有生长素合成基因(A)、细胞分裂素合成基因(B)和冠瘿碱合成基因(C)。已知T-DNA上的基因在农杆菌中不表达,在植物细胞中可以表达。冠瘿碱是农杆菌生命活动必需的有机物质。黄萎病是危害棉花种植的常见疾病,科学家通过基因工程技术将抗黄萎病基因导入棉花,获得抗黄萎病棉花。下图为农杆菌Ti质粒的T-DNA区段结构示意图,据图回答问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2022/2/26/2924541396189184/2924684248645632/STEM/6f1f05c8-a21c-4d66-ba6a-b806ee407f4b.png?resizew=315)
(1)获得碱基序列未知的抗黄萎病基因,可通过____________ 方法。构建重组Ti质粒时,需要用两种不同的限制酶切割目的基因和Ti质粒,目的是__________ 。
(2)为防止农杆菌侵染植物细胞时大量繁殖,导致植物细胞死亡,抗黄萎病基因必须把T-DNA片段上的基因__________ (用字母表示)替换掉。取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内,加入液体培养基,并置于摇床上__________ 振荡培养一段时间,从而完成转化实验。
(3)若棉花体细胞对农杆菌不敏感,还可以采用____________ 法,将目的基因导入受体细胞的细胞核。通常将重组细胞直接接种在适宜的培养基上进行组织培养,该培养基以MS培养基为基础,还需要加入适当种类和比例的植物生长调节剂、琼脂、水和____________ 。丛状苗分株培养后,为促使其生根,可通过____________ 无机物的浓度实现。
(二)植物被野生型农杆菌感染后会产生瘤状结构(类似愈伤组织),主要原因是农杆菌的Ti质粒中含有生长素合成基因(A)、细胞分裂素合成基因(B)和冠瘿碱合成基因(C)。已知T-DNA上的基因在农杆菌中不表达,在植物细胞中可以表达。冠瘿碱是农杆菌生命活动必需的有机物质。黄萎病是危害棉花种植的常见疾病,科学家通过基因工程技术将抗黄萎病基因导入棉花,获得抗黄萎病棉花。下图为农杆菌Ti质粒的T-DNA区段结构示意图,据图回答问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2022/2/26/2924541396189184/2924684248645632/STEM/6f1f05c8-a21c-4d66-ba6a-b806ee407f4b.png?resizew=315)
(1)获得碱基序列未知的抗黄萎病基因,可通过
(2)为防止农杆菌侵染植物细胞时大量繁殖,导致植物细胞死亡,抗黄萎病基因必须把T-DNA片段上的基因
(3)若棉花体细胞对农杆菌不敏感,还可以采用
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【推荐2】氮是植物生长必不可少的一种元素,为了让植物能够拥有固氮超能力,科学家一直在尝试用已经发现的固氮基因改造植物基因组,但目前还没有获得植物界固氮“超人”。某研究团队报道通过基因工程方法,将一种蓝细菌中20多个固氮基因,转移到另一种不能固氮但能进行光合作用的蓝细菌中,让后者获得了固氮能力。回答下列问题:
(1)1967年,罗思和海林斯基发现细菌拟核DNA之外的质粒具有_____ 特点,这一发现为基因转移找到一种运载工具。
(2)获得目的基因后,若要在体外获得大量目的基因,常采用的_____ 技术。该过程所需的DNA聚合酶具有_____ 的特点。
(3)构建含固氮基因的重组质粒,需要用_____ (酶),并且将固氮基因置于_____ 和_____ 之间。
(4)若将含固氮基因的重组质粒导入蓝细菌,通常应使蓝细菌处于感受态,目的是_____ 。
(5)固氮酶基因在植物中是否翻译成蛋白质,检测的方法是_____ 。一些研究发现,某些转基因植物可以表达个别或全部固氮酶基因,但它们并没有表现出固氮能力。某些转基因植物没有表现出固氮能力,可能的原因是_____ 。
(1)1967年,罗思和海林斯基发现细菌拟核DNA之外的质粒具有
(2)获得目的基因后,若要在体外获得大量目的基因,常采用的
(3)构建含固氮基因的重组质粒,需要用
(4)若将含固氮基因的重组质粒导入蓝细菌,通常应使蓝细菌处于感受态,目的是
(5)固氮酶基因在植物中是否翻译成蛋白质,检测的方法是
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【推荐3】某科学工作者首先从真核细胞细胞质的多聚核糖体中获得mRNA,再将获得的mRNA与单链DNA分子杂交,从而分离获得目的基因。该方法的操作过程如图所示,请回答下列相关问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2019/6/1/2216434381750272/2217541567635456/STEM/230b2090d23140348fcd362569f7f6de.png?resizew=487)
(1)图中加热处理的目的是获得__________ ,利用PCR技术对DNA分子进行扩增时,需要的条件有___________________________________ (至少答出三点)。
(2)一个mRNA分子上可以相继结合多个核糖体(即多聚核糖体的存在),其意义是______________________________________________________________ 。
(3)mRNA与单链DNA分子杂交的原理是__________ ;分子杂交形成游离的凸环3、5、7的原因之一是DNA中含有____ ,这些非编码DNA片段被转录后在mRNA加工过程中会被剪切掉。与DNA复制相比,DNA与mRNA分子杂交特有的碱基配对类型是________________ 。
(4)在基因工程中,构建的表达载体应含有复制原点、目的基因以及标记基因之外,必须含有_________ 和启动子,其中启动子的作用是___________________________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2019/6/1/2216434381750272/2217541567635456/STEM/230b2090d23140348fcd362569f7f6de.png?resizew=487)
(1)图中加热处理的目的是获得
(2)一个mRNA分子上可以相继结合多个核糖体(即多聚核糖体的存在),其意义是
(3)mRNA与单链DNA分子杂交的原理是
(4)在基因工程中,构建的表达载体应含有复制原点、目的基因以及标记基因之外,必须含有
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【推荐1】我国科研团队在国际上首次利用猪唾液腺生产高纯度人神经生长因子(hNGF),hNGF对神经细胞的生长、分化和再生都有重要作用。流程如下图,回答下列问题:
(1)利用PCR技术扩增hNGF基因,需要设计引物,引物与模板DNA链结合发生在PCR的________ 阶段,对两种引物的设计要求之一是________ ,使用的引物________ (填“可以”或“不可以”)重复利用。
(2)为使hNGF基因能与表达载体高效连接,切割表达载体的限制性内切核酸酶为________ 。筛选导入重组质粒的猪胚胎成纤维细胞时,应在添加了氨苄青霉素的液体培养基中选择不发绿色荧光的细胞,原因是________ 。
(3)为提高人神经生长因子的品质,可先敲除猪体内的神经生长因子基因,再培育转基因猪。这样做的目的可能是________ 。
限制酶 | BamHⅠ | BglⅡ | HindⅢ | XbaⅠ |
识别序列和切割位点 | 5′-G↓GATCC-3′ | 5′-A↓GATCT-3′ | 5′-A↓AGCTT-3′ | 5′-T↓CTAGA-3′ |
(1)利用PCR技术扩增hNGF基因,需要设计引物,引物与模板DNA链结合发生在PCR的
(2)为使hNGF基因能与表达载体高效连接,切割表达载体的限制性内切核酸酶为
(3)为提高人神经生长因子的品质,可先敲除猪体内的神经生长因子基因,再培育转基因猪。这样做的目的可能是
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非选择题-实验题
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(0.65)
【推荐2】鸡干扰素是一种具有高效和广谱抗病毒作用的细胞因子,广泛用于动物领域的抗病毒治疗。科研人员将鸡干扰素基因作为目的基因,构建基因表达载体,通过农杆菌介导法导入烟草,以获得抗病毒烟草。回答问题:
(1)目的基因合成后可在Taq酶的作用下通过PCR技术大量扩增,该技术的原理是________________________ 。利用PCR技术扩增干扰素基因时,需要加入两种引物,原因是_____________________________________ 。
(2)基因表达载体中应有RNA聚合酶识别和结合的部位,该部位称为_________________ 。将基因表达载体导入农杆菌常用的方法是___________________________________ 。
(3)该实验中,将农杆菌转入烟草细胞的原生质体,原生质体再生出细胞壁。请从理论角度提出实验室检测原生质体是否再生出细胞壁的一种方法:________________________ 。
(4)科研人员提取烟草愈伤组织细胞的RNA后,先通过__________ 获得DNA,再进行PCR扩增。若最终未能检测出干扰素基因,可能原因是____________________ ;若转基因烟草植株对病毒的侵染表现出一定的抗性,但抗性较低,可能原因是__________________ 。
(1)目的基因合成后可在Taq酶的作用下通过PCR技术大量扩增,该技术的原理是
(2)基因表达载体中应有RNA聚合酶识别和结合的部位,该部位称为
(3)该实验中,将农杆菌转入烟草细胞的原生质体,原生质体再生出细胞壁。请从理论角度提出实验室检测原生质体是否再生出细胞壁的一种方法:
(4)科研人员提取烟草愈伤组织细胞的RNA后,先通过
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非选择题-解答题组
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适中
(0.65)
【推荐3】Ⅰ.ch1L基因是蓝细菌(蓝藻)DNA上控制叶绿素合成的基因,为研究该基因对叶绿素合成的控制,需要构建并获得缺失ch1L基因的蓝细菌细胞。技术路线如图甲所示,请据图分析回答问题。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2015/12/22/1567068704251904/1567068707037184/STEM/e42a7e438637437cab763abd897d75a9.png?resizew=468)
(1)与酵母菌相比较,蓝细菌在结构上最主要的特点是_____ ,在代谢上最主要的特点是能进行_____ 作用。
(2)①②过程中均使用的工具酶有_____ 。
(3)构建重组质粒B在整个操作过程中的目的是_____ 和_____ 。
Ⅱ.人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,制备的抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图为抗HCG单克隆抗体制备流程示意图,请分析回答下列问题。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2015/12/22/1567068704251904/1567068707037184/STEM/c33fd56091074933adb664233ab00c6d.png?resizew=493)
(4)制备单克隆抗体过程中要用到_____ 技术和_____ 技术。
(5)在细胞内DNA合成一般有两条途径。主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下,经酶催化合成DNA,而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
①利用两条DNA合成途径的不同特点配制的HAT培养基含有多种成分,其中添加的_____ 成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是_____ 。
(6)此过程生产的单克隆抗体可以与 特异性结合,从而诊断早孕。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2015/12/22/1567068704251904/1567068707037184/STEM/e42a7e438637437cab763abd897d75a9.png?resizew=468)
(1)与酵母菌相比较,蓝细菌在结构上最主要的特点是
(2)①②过程中均使用的工具酶有
(3)构建重组质粒B在整个操作过程中的目的是
Ⅱ.人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,制备的抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。如图为抗HCG单克隆抗体制备流程示意图,请分析回答下列问题。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2015/12/22/1567068704251904/1567068707037184/STEM/c33fd56091074933adb664233ab00c6d.png?resizew=493)
(4)制备单克隆抗体过程中要用到
(5)在细胞内DNA合成一般有两条途径。主要途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,而氨基嘌呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下,经酶催化合成DNA,而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。
①利用两条DNA合成途径的不同特点配制的HAT培养基含有多种成分,其中添加的
②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是
(6)此过程生产的单克隆抗体可以与 特异性结合,从而诊断早孕。
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