【推荐1】已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原。疫苗的生产和抗体的制备流程如图1所示。请回答下列问题：

（1）过程①代表的是_________，过程③构建A基因重组载体时，启动子和终止子是重新构建的，它们应该能被受体细胞的_________所识别，以便于其催化转录过程。
（2）在给小鼠皮下注射A蛋白时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的__________数目。
（3）在将X进行扩大培养前，至少需要经过2次筛选，第一次是将_________筛选出来。第二次是将_________筛选出来。
（4）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的_________来制备疫苗。

【推荐2】真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有。原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。有人利用RT—PCR技术(mRNA逆转录为 cDNA再进行PCR扩增），获得了牛基因G，导入到大肠杆菌中，成功表达出G蛋白。请回答下列问题：
（1）RT-PCR过程需要的酶有___________。进行PCR扩增的前提是_______，以便能够设计出需要的________种引物序列。
（2）在构建基因表达载体时，RT—PCR的产物和PBV载体都要经过BamH I和 EcoRI两种酶切后再连接，目的是_________(答出两点）。
（3）若要检测基因G是否翻译出蛋白G，可采用的检测方法是___________。有人从牛的基因组文库中获得了基因G，同样以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白G，其原因是________。

【推荐3】新冠病毒是一种带包膜的RNA病毒，通常其核酸检测在1～2h内即可得到检测结果。新冠病毒核酸检测的原理为实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测法，具体方法为：取检测者的mRNA在试剂盒中逆转录出cDNA，并大量扩增，同时利用盒中荧光标记的新冠病毒核酸探针来检测PCR产物中是否含有新冠病毒的cDNA。探针两端连有荧光基团（R）和抑制荧光发出的淬灭基团（Q），完整的探针不发出荧光，当探针被水解后R基团会发出荧光（如图1）。随循环次数的增加，反应产物不断累积，荧光信号强度增加。通过荧光强度的变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图（如图2）。请据图回答：
   
(1)新型冠状病毒是一种RNA病毒，因此，在核酸提取后，进行RT-PCR时需要加入的酶是_________。
(2)除了荧光检测法，还可以通过 _______法分析PCR扩增结果。下列利用到荧光标记的研究有_______。
A.证明细胞膜具有流动性
B.观察染色体两端的端粒
C.探究DNA的复制方式
D.观察基因在染色体上呈线性排列
(3)引物在DNA复制中的作用是___________。PCR过程完成六次循环后，产生的双链等长的DNA片段数目是_______。
(4)在实时荧光定量RT-PCR过程中，通过荧光强度的变化监测产生量的变化从而得到一条荧光扩增曲线图（如图3）。最初数个循环里，荧光信号变化不大，设置为基线；之后进入指数增长期，在这个时期设置一个荧光阈值线；Ct值是PCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数，则Ct值越小，起始模板量越_______（填“多”或“少”），当PCR循环到一定次数时，会出现“平台期”，即荧光强度不再增加，此时限制因素可能是_______（答出2点）。

【推荐2】利用基因工程技术培育转基因生物生产可食用疫苗，将会克服常规疫苗使用时所面临的诸多问题．下图是部分过程示意图，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性内切酶

（1）质粒DNA分子中的两条链靠_____键维系成双链结构。
（2）以下说法错误的有_____
A．构建含抗原基因的表达载体时应选用限制酶PstⅠ和EcoRⅠ
B．抗卡那霉素基因的存在将有利于筛选含有抗原基因的细胞
C．抗原基因能和质粒重组是它们都是有四种脱氧核糖核苷酸构成的双螺旋结构
D．DNA连接酶不具有专一性体现在可连接任何两个脱氧核苷酸之间的化学键
（3）用Pst I、Sma I、EcoR I两两联合酶切含目的基因的DNA和质粒的结果见表．据表所列酶切结果判断目的基因的大小为_____kb，若用Pst I、Sma I、EcoR I三酶联合酶切表达载体，下列可获得的片段长度有_____．
酶切结果（1kb＝1000碱基对）

	Pst I+Sma I	Sma I+EcoR I	Pst I+EcoR I
含抗原基因 的DNA	1.2kb 0.9kb 0.1kb	1.3kb 0.6kb 0.3kb	1.2kb 0.6kb 0.4kb
质粒	2.9kb 0.8kb	3.0kb 0.7kb	2.2kb 1.5kb

A．2.9kb　　　B．0.3kb　　　C．2.5kb　　　D．0.7kb　　　E．2.3kb　　　F．0.4kb
（4）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是_____．
A．受精卵能使目的基因高效表达B．受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作
C．受精卵基因组更易接受DNA的插入D．受精卵可发育成动物个体
（5）乳腺生物反应器可以从转基因动物分泌的乳汁中获得人源性蛋白质药物，但受转基因动物的性别和生长发育时期的限制影响效益．研究者发现如果将药物蛋白基因移到动物如牛、羊的膀胱上皮细胞中表达，利用转基因牛、羊尿液生产提取药物比乳汁中提取药物具有更大的优越性．你认为这优越性的体现是_____。

【推荐3】某质粒上有SalI、HindIII、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题：

(1)若抗盐基因序列已知，根据序列信息设计引物进行PCR扩增，PCR每个循环第一步是进行____处理，该处理的效果类似于生物体内____的作用效果。PCR产物琼脂糖凝胶电泳时，DNA分子因为含____而带负电荷，凝胶点样孔端应靠近电泳槽____接口；当2个PCR产物分子量接近时，若延长电泳时间，凝胶中这2个条带之间的距离会____。
(2)将目的基因导入植物细胞，采用最多的方法是____，这种方法进行植物转基因过程中，通常要使用抗生素，其目的一是抑制____生长，二是筛选转化细胞。其中用到的质粒上含有一段特殊的DNA片段，可带目的基因进入植物细胞，该片段称为____。
(3)在构建重组质粒时，选用上图中的____两种酶酶切效果更好，而不是只用SalI酶，原因是_____。质粒和抗盐基因同时用双酶切处理后利用____连接，可得到重组DNA分子。
(4)含有目的基因的农杆菌可根据标记基因进行筛选。若农杆菌在含有四环素和氨苄青霉素的培养基上都可以生长繁殖，农杆菌中是否已含有目的基因？______（填“是”或“否”）。为什么？____。
(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用____技术，愈伤组织经____进而形成完整植株。此过程除营养物质外还必须向培养基中添加适宜浓度和比例的______。植物转基因受体细胞全能性表达程度的高低主要与受体的基因型、培养环境、继代次数和____长短等有关。
(6)除了用转基因技术获得抗盐烟草植株外，也可利用原生质体融合技术获得或通过____后再筛选获得。若利用原生质体融合技术获得抗盐烟草植株，则首先需要制备原生质体。为了获取不抗盐烟草叶片和抗盐植株叶片无菌的原生质体，先将叶片经表面消毒并去除下表皮，再将其置于经____处理的较高渗透压的混合酶液中。酶解后，经多次离心获得原生质体。然后测定该原生质体的活性，可采用的方法有____ （答出2点即可）。原生质体在培养过程中，只有重新形成____后，才可进行有丝分裂，多次分裂形成的小细胞团可通过____或器官发生的途径再生稙株。

【推荐1】与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖含量高，汁多质脆，富含多种维生素，更富有生产应用价值。科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白的转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示，P蛋白在玉米株系的表达量如图2所示。回答下列问题：

   

(1)在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示。图1中强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被_______________酶识别并结合，驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用图1所示的_________________酶组合，将含P基因的DNA片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。
(2)将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中应加入____________以筛选出成功导入T-DNA的玉米愈伤组织。筛选出的愈伤组织经过______________过程可形成丛芽，最终获得多个玉米株系。现对a₁、a₂、a₃、a₄四个甜玉米株系的蛋白质表达量进行测定，结果如图2。其中a₄株系P蛋白表达量较低的原因可能是_________。
(3)研究人员发现了一种RNA剪接抑制剂，该抑制剂会使玉米相关基因的表达受阻。针对该抑制剂的具体作用，科研人员提出以下假说：
假说1：该抑制剂导致RNA前体上内含子1的对应序列不能被剪。
假说2：该抑制剂导致RNA前体上内含子1和外显子2的对应序列同时被剪切。

   

为了验证上述假说，需分别从实验组和对照组胚细胞中提取RNA，经过_____________过程形成cDNA，然后对cDNA进行PCR后，再分析电泳后的条带。若要证明假说2成立，需要选择图3中所示的引物________________（填数字）进行PCR。

【推荐2】如图所示为获得转基因鼠和单克隆抗体的制备过程，据图回答下列问题：

（1）过程Ⅰ将目的基因导入受体细胞的方法是____________。在分子水平上检测该过程是否成功的方法是_____________。
（2）过程Ⅱ表示受精卵经过体外培养，形成___________，再移植到受体母鼠体内。培养过程中，培养液中添加一定量的_________，以防培养过程中杂菌的污染。此外，还应定期_________________以便清除代谢产物，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
（3）过程Ⅳ需要用特定的________培养基进行筛选，得到既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体的杂交瘤细胞。为了获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，还需进行________培养和_______检测。
（4）过程Ⅴ获得的单克隆抗体主要的用途有__________________________________。（至少答两点）

【推荐3】据《青岛新闻网》报道，2016年10月14日，袁隆平院士领衔的青岛海水稻研究发展中心在李沧区签约落户，袁隆平院士表示，将在3年之内研发出亩产300公斤的海水稻。转基因技术是培育耐盐海水稻的一种思路。回答下列相关问题：

（1）获取抗盐基因的方法有_______________和人工合成等，为了获取足够多的抗盐基因，可利用_______技术来扩增抗盐基因，该技术用到的酶是______________________。
（2）外源DNA和质粒上的限制酶的识别位点如图所示，构建基因表达载体时，所用的限制酶最好是______，理由是_______________________。
（3）水稻为单子叶植株，____________法是该类植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。
（4）抗盐基因的检测与鉴定是基因工程的最后一步。检测目的基因时，所用的探针实际上是_____________。
（5）将含抗盐基因的水稻细胞培育成完整植株的技术为_______________。

【推荐1】下图是利用工程菌（大肠杆菌）生产人生长激素的实验流程。所用的pBR322质粒含有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的切点各一个，且三种酶切割形成的末端各不相同，而AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，TetR表示四环素抗性基因。请回答以下相关问题：

(1)在目的基因的筛选与获取过程中，如图过程③的目的是_____________。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对图中质粒进行切割，形成的DNA片段种类最多有_____________种。
(2)基因表达载体是载体的一种，除目的基因、启动子外，它还必须有_____________（答2点）等。启动子的作用是_____________。
(3)如果只用限制酶PstⅠ切割目的基因和质粒，完成过程④、⑤后（受体大肠杆菌不含Amp^R、Tet^R），⑤过程常用_____________处理大肠杆菌。将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上，形成菌落后用无菌牙签挑取甲培养基上的单个菌落，分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图乙、丙所示。接种到甲培养基上的目的是筛选_____________的大肠杆菌；含有目的基因的大肠杆菌在培养基乙和丙上的生存情况是_____________。

【推荐2】转座子是指能从基因组的一个位置移动到另一个位置的 DNA 片段。Ac 片段能编码转座酶， DS 片段需在转座酶作用下，才可以从原来的位置上切离下来，然后随机插入到所在染色体的其他位置或其他染色体上。
(1)用__________酶将 DS 片段构建在 Ti 质粒的 T-DNA 片段上，再用含有该重组质粒的农杆菌转化水稻，自交筛选获得 DS-T-DNA 纯合体（甲）。以同样方法获得 Ac-T-DNA 纯合体水稻（乙）。
(2)甲、乙杂交获得 Ac/Ds 双因子转座系统水稻，在其后代中筛选到一些淡绿叶突变体。利用淡绿叶突变体与野生型水稻进行系列杂交实验，__________代获得野生型和淡绿叶水稻植株分别为442株和 130 株，分离比符合 3：1，初步推测淡绿叶突变是单基因的__________性突变。将 442 株野生型植株单株收获和播种，后代发生性状分离的植株占__________，则进一步确认上述推测。
(3)为进一步确定突变性状与 Ds 切离转座的相关性，设计 6 种引物（如图 1），对上述 572 株 子代的 T-DNA 进行 Ds 转座的 PCR 检测。
①检测原理：Ds 未发生切离的 DNA 位点，通过引物__________可得到 400 bp 的扩增产物；Ds 已发生切离的 DNA 位点通过引物 c 和 d 可得到 870 bp 的扩增产物。

②扩增产物的电泳结果如图 2，据此判断__________类型为淡绿叶突变体。若A类型：B类型：C类型=__________，则突变性状产生与 Ds 片段的切离转座有关。