【推荐1】世界上除同卵双生的个体外，几乎没有指纹一模一样的两个人，所以指纹可以用来鉴别身份。 据研究，DNA也可以像指纹一样用来识别身份，这种方法就是DNA指纹技术。某地发生了一起刑事案件，刑侦人员抓获了三个犯罪嫌疑人，并对他们进行DNA取样。 然后用合适的酶将这三个人的待检测的样品DNA切成片段，再用特定的方法将这些片段按大小分开，经过一系列步骤，最后形成下面的DNA指纹图谱，回答下列问题：

(1)在进行 DNA 指纹鉴定前可通过_____获得大量的相同 DNA，再用_____酶将待测的样品DNA切成片段， 然后用_____的方法将这些片段按大小分开。
(2)利用PCR技术扩增DNA前要根据一段目的基因的核苷酸序列合成引物，PCR过程中需要引物的原因是_____
(3)上图中的怀疑对象_____号个体最可能是罪犯。判断依据是_____
(4)DNA指纹技术的应用还有哪些？_____（至少写出两点）
(5)提取动物细胞的 DNA 的实验中，在沸水浴的条件下， DNA 遇_____会变成蓝色。

【推荐2】1965年中国科学家人工合成了具有生物活性的结晶牛胰岛素，摘取了人工合成蛋白质的桂冠。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：AB法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种 DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；BCA法是利用胰岛B细胞中的mRNA得到胰岛素基因，导入工程菌获得胰岛素。这两种方法使用同一种质粒作为载体。回答下列问题。

(1)AB法中人工合成的两种 DNA片段均有多种可能的序列的原因是______。
________（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
(2)图中是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶______的识别序列。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，已知胰岛素基因左端①处的碱基序列为-CCTTTCAGCTCA-，则其中一种引物设计的序列是5′-______-3′。
(3)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。据此简述筛选工程菌的过程______。
(4)科学家利用蛋白质工程技术，研制出了赖脯胰岛素，与天然胰岛素相比，其皮下注射后易吸收、起效快。写出获取赖脯胰岛素基因的流程：______。

【推荐3】I请回答下列问题：

(1)利用PCR技术扩增目的基因时，需经过变性、复性、延伸等阶段。设计PCR过程所需引物的主要依据是_____。复性时，引物与模板链发生_____，其温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但_____的引物需要设定更高的复性温度。若PCR反应得不到任何扩增产物，原因可能有_____（填序号）。

①变性温度过低②复性温度过低③缓冲液中Mg²⁺浓度过低

(2)据图1分析，BamHⅠ切割形成的黏性末端是_____。

II下图甲为获取的含有目的基因的DNA片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；图乙是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图。回答下列问题：

(3)为了使目的基因与质粒定向连接，切割图甲所示DNA片段的最佳方案是选用_____酶。
(4)PCR技术的原理是_____，基因工程的基本原理是_____，在PCR反应体系中，除了加入目的基因和引物外，还需要添加的物质有_____（至少答出两种）。
(5)与只使用一种限制酶处理质粒和目的基因相比较，使用两种限制酶同时处理质粒和目的基因的优点在于可以防止_____。
(6)基因工程中载体DNA必须满足的条件是_____（至少写出两项）。

【推荐1】已知新冠病毒为RNA病毒，该病毒表面蛋白A为主要抗原，由病毒的A基因控制合成。现利用单克隆抗体的制备技术来生产预防和诊断新冠病毒的疫苗和抗体。回答下列问题：
（1）新冠病毒合成蛋白A的场所是____。基因工程技术构建的A基因表达载体中启动子能被受体细胞中的____所识别，进而催化A基因的转录。
（2）将制备的A蛋白重复注射到小鼠皮下细胞，目的是获得更多的____细胞。然后将该种细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞按一定比例加入试管中，再加入 ___诱导细胞融合。细胞融合后，融合体系中除了含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，还可能含有___。
（3）经细胞融合获得的杂种细胞，还需进行____，才能得到所需的杂交瘤细胞。在将杂交瘤细胞进行扩大培养之前，还需要进行 ___。
（4）在杂交瘤细胞体外培养过程中，通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气与5%二氧化碳的混合气体培养箱中进行培养，从氧气和二氧化碳的作用角度分析，这样做的目的是___。

【推荐2】家禽的饲料中富含谷物，纤维素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纤维素的酶，阻碍了家禽对饲料的吸收与利用。研究人员利用转基因技术改造乳酸杆菌，将其添加到饲料中，以提高家禽养殖效率。枯草芽孢杆菌能分泌一种可降解纤维素的酶，这种酶由w基因编码。为在乳酸杆菌中表达W基因，需使用图1中质粒作为载体，图2为含W基因的DNA片段。回答下列问题：

(1)在将重组质粒导入乳酸杆菌之前，需要用_______处理乳酸杆菌，使之处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。乳酸杆菌作为基因工程的受体细胞的优点有_______（答出3点）。
(2)用PCR技术扩增W基因利用了________的原理，用到的引物的作用是_______，用到的DNA聚合酶与普通的酶相比，具有的特点是_______。
(3)W基因以乙链为转录模板链，转录时mRNA自身延伸的方向为5'→3'。下表是几种限制酶的识别序列及切割位点，图1、图2标注了相关限制酶的酶切位点。为获得能正确表达W基因的重组质粒，应分别使用哪些限制酶对质粒和含W基因的DNA片段进行切割_____？

限制酶	EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	MfeⅠ	HindⅢ
识别位点	↓5'-GAATTC-3' 3'-CTTAAG-5'↑	↓5'-GGATCC-3' 3'-CCTAGG-5'↑	↓5'-GGTACC-3' 3'-CCATGG-5'↑	↓5'-CAATTG-3' 3'-GTTAAC-5'↑	↓5'-AAGCTT-3' 3'-TTCGAA-5'↑

【推荐3】在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。请据图回答：

（1）A过程需要的酶有：_______________________________________。
（2）将目的基因导入植物体细胞除了上述农杆菌转化法之外，还可用___________________法（任填一种）；可用_________________________技术检测转基抗虫棉是否成功表达出Bt毒蛋白；除抗虫基因外，基因表达载体中还必须包含的部分是_________________________________（至少写出两点）。
（3）B选择培养过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入_____________。
（4）由外植体培养为转基因植株的D、E过程分别为_______________，该过程的理论基础是___________________________。

【推荐1】铁皮石斛作为一种重要中药材，在市场上的需求较大，具有极强的经济价值、营养价值和药用价值，但在人们长期掠夺式采挖与生存条件的破坏下，野生资源濒临灭绝，药材价格不断攀升，而且采摘后在常温下容易腐烂。某科研小组利用农杆菌介导的转化法培养转基因脱毒苗，可增加铁皮石斛的有益成分表达水平，还能增强其抗病菌能力减少腐烂。回答下列问题：
(1)农杆菌的活化培养：
挑取农杆菌于______（填“液体”或“固体”）培养基中活化并______培养，培养基中含有0.5%氯化钠，其作用是________________________。
(2)侵染石斛茎尖：
外植体宜选用茎尖而不选用叶片的原因是________________________，接种前对外植体用酒精消毒后，需要用______清洗10min。对其进行适当的切割处理后浸入农杆菌侵染液，切割处理的目的是________________________。
(3)共培养：
侵染结束后，用滤纸吸干茎尖上多余侵染液，然后迅速将茎尖转移至共培养基培养，培养基中的蔗糖的作用是______。将其培养后的茎尖冲洗后，再用适宜浓度的头孢类抗生素溶液清洗1-2min，该过程中使用头孢类抗生素的作用是______。
(4)植株再生：
将茎尖用滤纸吸干水分，迅速接种于发芽培养基中培养获得丛状苗后，再转入______培养基中培养至组培苗，然后要进行______后移栽定植。植物组织培养常用到发芽培养基和生根培养基，在设计这两种培养基时最主要的区别是______。
(5)致腐菌的快速检验：
在生产实践中，可通过PCR反应快速检测铁皮石斛中的致腐菌。在检测过程中，要根据致腐菌特殊基因两端的碱基序列设计引物，下图为致腐菌特殊基因的结构示意图，与之对应的引物结合的部位是______（用图中字母作答）。
   
若已知该基因的引物I，能否依据其碱基序列设计出另一种引物Ⅱ？______。理由是________________________。

【推荐2】天然玫瑰因缺少控制合成蓝色色素的基因B而不能开蓝色花。科学家从开蓝色花的矮牵牛中了基因B后，利用生物工程技术培育出了开蓝色花的玫瑰。下图为该育种过程的操作流程。

注：Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。外源DNA插入到Amp^r或Tet^r中会导致相应的基因失活。限制酶EcoRⅠ、HindⅢ和BamHⅠ的识别序列及切割位点均不相同。
请回答下列问题：
（1）图中将基因B导入玫瑰细胞的方法称为_____________。选择Ti质粒作为运载体的原因是Ti质粒上的__________可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。
（2）在构建重组Ti质粒时，应选用图中的_________(限制酶）。有人用该种限制酶分别切割Ti质粒和基因B后混合，加入DNA连接酶进行反应，用得到的混合物直接转化细菌甲。结果得到了四种细菌甲：未被转化的、含基因B的、含Ti质粒的和含重组Ti质粒的。筛选目的细菌甲时，先用含_________的固体培养基培养，不能生长的是_________的细菌甲；然后再将能生长的细菌甲接种到含_________的固体培养基中，目的细菌甲在此培养基中___________(填“能”或“不能”）生长。
（3）由玫瑰韧皮部细胞形成组织乙的过程，实质是___________的过程。

【推荐3】下图所示为诱导黑鼠体细胞脱分化获得诱导性多功能干细胞（iPS），继而利用iPS细胞培育出与黑鼠遗传特性相同的克隆鼠的流程。回答以下问题：

(1)动物细胞工程的基础是_______________________。在制备细胞悬液过程中，首先要将组织块剪碎，其作用是______________________________________________________。
(2)原代培养的细胞会出现_________________________________________________现象。
(3)对从灰鼠的输卵管部位获取的2-细胞胚胎，进行体外培养至囊胚后，将其制成重组囊胚。重组囊胚移植到白鼠体内后，其__________部分会发育形成胚胎的附属结构或胚外结构，而________分化出成体动物的所有组织和器官。
(4)制备iPS细胞的方法是把四种转录因子的基因导入小鼠成纤维细胞，可诱导其发生转化，从而产生iPS细胞。在基因导入过程中，除了质粒外，还可以选用_____________作为运载体。若将某目的基因导入的受体细胞为大肠杆菌时____________（填“能”或“不能）选用噬菌体为运载体。