【推荐1】人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值。科研人员通过生物工程技术获得转HSA基因母牛，以便通过乳腺生物反应器生产HSA，其主要技术流程如图所示：
回答下列问题：

(1)如图所示，获得转基因母牛过程中涉及多个现代生物技术，包括核移植技术，核移植指______________；供核的牛胎儿成纤维细胞通常选用传代10代以内的细胞，其原因是______________。
(2)SRY－PCR法性别鉴定的基本程序是：提取牛胎儿成纤维细胞的DNA，经PCR反应体系扩增SRY基因(Y染色体上特有的性别决定基因)片段，然后对扩增产物进行检测。上述流程中，选取的牛胎儿成纤维细胞SRY－PCR性别鉴定应为________(“阴性”或“阳性”)，原因是______________________________。
(3)PCR反应体系中添加的引物应选用图中的________(填图中字母)。若将1个含目标片段的DNA分子经PCR反应循环n次后，共需要消耗引物的数量为_____。

(4)早期胚胎分离得到的胚胎干细胞在形态上表现为______________________。

【推荐2】科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因（能控制合成MPT64蛋白）成功导入胡萝卜细胞，最终表达出肺结核疫苗。回答下列问题：
（1）为获取MPT64基因，可从结核杆菌的细胞中提取对应mRNA，在_______的作用下合成双链cDNA片段，该cDNA片段__________(填“可以”、“部分可以”或“不可以”）实现物种间的基因交流。
（2）通常采用PCR技术扩增MPT64基因，前提是要有一段已知MPT64基因的核苷酸序列，原因是____，在操作步骤中需要加热至90～95℃的目的是__________。
（3）根据农杆菌的特点，如果将MPT64基因插入_______上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入胡萝卜细胞，并将其插入植物细胞中的_____上。要确认MPT64基因是否在胡萝卜植株中表达，应检测胡萝卜植株中是否含有__________。
（4）科学家探知，若能把MPT64蛋白第20位和第24位的氨基酸都改变为半胱氨酸，可以更好保证所生产的肺结核疫苗分子的稳定性。根据蛋白质工程的原理，可对_______进行修饰或改造，以达到生产目的。

【推荐3】镰孢菌引起的小麦赤霉病被称为小麦“游症”，是威胁粮食安全的重大国际性难题。我国科学家从小麦近缘属植物长穗偃麦草中首次克隆出主效抗赤霉病基因Fhb7（编码一种谷胱甘肽S-转移酶），为解决小麦赤霉病的世界性难题提供了“金钥匙”。研究发现，用光诱导型启动子（PrbcS）能够使Fhb7基因表达，其结合T基因后能使Fhb7基因更高水平表达。
(1)PrbcS是一段有特殊结构的DNA片段，能被______________识别并结合，驱动基因的持续___________________过程。
(2)通过PCR技术扩增Fhb7基因片段，反应过程一般由95℃热变性、55～60℃引物和模板配对、72℃延伸三个步骤，经过多次循环完成。延伸阶段选用72℃而非95℃综合考虑了两个因素，这两个因素是__________________和__________________。
(3)下图中甲、乙均为Fhb7基因表达载体构建过程中的中间载体，请分析重组载体丙的部分构建过程。区别含有中间载体甲与含有重组载体丙的微生物的方法是_______________。经酶切后凝胶电泳，测得含2B基因片段长度为0.3kb，经图示信息分析，含光诱导型启动子-T基因的片段长度约为_____________。据图分析，形成重组载体丙，需要使用限制酶_____________________________切割中间载体甲和乙，图中重组载体丙问号处有________种限制酶的酶切位点。

（注：图中单词代表限制酶酶切位点）

【推荐1】大多数奶酪的生产需要使用凝乳酶来凝聚固化奶中的蛋白质。传统的制备凝乳酶的方法是通过杀死未断奶的小牛，然后将它的第四胃的黏膜取出来进行提取，此法已不再使用。现在科学家将编码牛凝乳酶的基因（长度1.5 kb）导入大肠杆菌获得工程菌，再通过工业发酵批量生产凝乳酶。图为所用载体示意图，表为限制酶的识别序列及切割位点。请回答下列问题：

限制酶	HindII	Pvit2	KpnI	EcoR I	Pst I	BamHI
识别序列	A↓AGCTT	CAG↓CTG	G↓GTACC	G↓AATTC	CTGC↓AG	G↓GATCC

(1)获取牛凝乳酶基因：提取小牛胃黏膜组织中的________，经逆转录得到________，将其作为PCR反应的模板，并依据_______________，设计一对特异性引物来扩增目的基因。
(2)构建基因表达载体：为使目的基因与载体正确连接，在扩增目的基因时，应在其一对引物的5’端分别引入______________两种不同限制酶的识别序列。在目的基因和载体连接时，可选用____________________（填“E.coli DNA连接酶”或“T₄ DNA连接酶”）。
(3)转化：先用________溶液处理大肠杆菌细胞，使其处于______的生理状态，以提高转化效率。
(4)筛选与鉴定：将转化后的大肠杆菌接种在含__________的培养基上进行培养，随机挑取菌落（分别编号为1、2、3、4）培养并提取质粒，用（2）中选用的两种限制酶进行酶切，酶切产物经电泳分离，结果如图，________号菌落的质粒很可能是含目的基因的重组质粒。

注：M为指示分子大小的标准参照物；小于0.2 kb的DNA分子条带未出现在图中。

【推荐2】Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：

(1)步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的_______。
(2)步骤②中，重组胚胎培养到______期时， 可从其内细胞团分离出ES细胞。
(3)步骤③中，需要构建含有Rag₂基因的表达载体。可以根据Rag₂基因的__________设计引物，利用PCR技术扩增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag₂基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有________酶的酶切位点。
(4)为检测Rag₂基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的______，用抗Rag₂蛋白的抗体进行杂交实验。

【推荐3】蓝白斑筛选是基因工程中筛选重组目的基因常用的一种方法，表现为培养基上出现蓝白颜色的菌落，可以通过颜色为依据直接筛选重组菌。用于筛选的菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌株，这种宿主菌中编码β-半乳糖苷酶的部分缺失，不具有生物活性。用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌β-半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，在这段序列中还含有多个限制性酶切位点，便于插入目的基因。β-半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物X-gal，使其变成蓝色物质。回答下列问题：
（1）玻璃和金属材质的实验器材利用__________方法灭菌。
（2）培养基灭菌后，需要冷却到____℃左右时，才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒扣，原因是________________。
（3）为防止杂菌污染，培养基中要添加______。蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中添加了_________。
（4）最终培养基出现的白色的菌落是( )

A.目的基因和载体结合               B.只含目的基因                 C.只含载体

（5）需要长期保存该菌种，可采用的方法是_______。

【推荐1】某科研团队利用农杆菌转化法将抗除草剂基因导入甘蓝，过程如图所示，①~④为操作步骤，限制酶BamH I、Bgl II、EcoR I酶切位点唯一，BamH I和EcoR I之间的距离为20kb，BamH I和Bgl II之间距离为25kb，识别序列和切割位点如表所示。请回答：

限制酶	识别序列和切割位点
BamH I	—G↓GATCC—
Bgl II	—A↓GATCT—
EcoR I	—G↓AATTC—

(1)基因表达载体包括了启动子、终止子及抗生素抗性基因等，其中终止子的作用______。步骤②和③的目的是______，步骤④的培养基中添加______以便筛选出含目的基因的甘蓝植株。
(2)目的基因用BamH I和Bgl II剪切，质粒用BamH I剪切，剪切后的目的基因和质粒能连接在一起，原因是______。酶切后的目的基因存在正向与反向两种连接方式，可用______酶对两种重组质粒进行剪切，通过凝胶电泳分析产物大小进行区分，如图所示，图中______（填“样品1”或“样品2”）为所需基因表达载体。
(3)若要检测甘蓝是否具有抗除草剂的性状，还需要进行个体水平的检测。请以甘蓝的生长状况为检测指标，设计实验方案，简要写出实验思路：______。

【推荐2】甘蓝型油菜中，抑制PEP基因的表达可提高油菜籽的含油量。通过基因工程将PEP基因反向连接在启动子后，构建转反义PEP基因油菜是提高油菜籽含油量的常用技术路径。请回答下列问题：

(1)为将PEP基因反向连接在启动子后，构建反义PEP基因，需要将限制酶酶切位点设计在引物上，PEP基因的上游引物和下游引物中应分别引入______酶切位点。
(2)该实验选用Ti质粒作为载体，除了它具有启动子等基因表达载体必备结构外，还因为______。用激光照射油菜愈伤组织时，可在细胞膜上打出一个穿孔，带有转反义PEP基因的Ti质粒由此小孔进入油菜细胞，几秒钟后小孔封闭，该过程体现了细胞膜具有______。筛选时，在激光照射下，Ti质粒导入成功的细胞一般会发出______。
(3)为检测反义PEP基因是否进入细胞，研究者通常检测细胞中是否存在ntp基因，而不检测PEP基因，其原因是______。已知PEP基因的转录模板链为A链，则反义PEP基因的转录模板为______。转反义PEP基因油菜中PEP基因的表达受阻，原因是______。

【推荐3】苯丙酮尿症、白化病和尿黑酸症均为人类遗传病，其中苯丙酮尿症是由于苯丙氨酸代谢异常造成苯丙氨酸在血液中大量积累，使患者尿液中苯丙酮酸含量远高于正常人。尿黑酸症是由于尿黑酸在人体中积累使人的尿液中含有尿黑酸，这种尿液暴露于氧气会变成黑色。
(1)下图是苯丙氨酸代谢途径示意图，根据该图有人认为缺乏酶 ① 会同时患苯丙酮尿症、白化病和黑尿症，你认为正确吗？请说明理由。_____
          
(2)若要快速检测正常人群中的个体是否携带该致病基因，可利用特定的分子探针进行检测，这一方法采用_____技术，依据的原理是_____
(3)上图是苯丙氨酸代谢途径示意图，某患儿缺乏酶_____ 患上苯丙酮尿症，此病诊断的方法是_____ 。目前有效的治疗方法是通过控制饮食中的_____含量，使苯丙酮酸含量处于正常水平，治疗后体内酶①含量_____（正常、过多、缺乏）
(4)由图不能得出的结论是(      )。
①基因可以通过控制蛋白质的结构来控制生物的性状
②基因可以通过控制酶的合成来控制生物的性状
③一个基因只能控制一种性状
④一个性状可以由多个基因控制

【推荐1】我国研究人员在世界上率先利用去甲基化酶（Kd4d）的mRNA，经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物——食蟹猴，流程如图所示，①～⑥表示过程，该动物可作为研究癌症等人类疾病的动物模型。请据图分析回答：
   
(1)动物细胞核移植过程中，通常采用卵（母）细胞作为受体细胞，原因可能是其细胞质中______________。用于核移植的供体细胞一般选用传代至10代内的细胞，原因是传至10代内的细胞______________。
(2)进行过程①时，细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有______________，且在进行细胞原代培养时会出现______________现象。
(3)动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是_______________。图中过程⑤用到______________技术，其实质是早期胚胎在_______________条件下空间位置的转移。除图中所示外，胚胎的来源还有______________（答出两点）。
(4)研究人员在确定去甲基化酶（Kd4d）的mRNA的作用时，做了两组实验，其中A组用正常培养液培养融合细胞，B组用正常培养液培养注入了Kd4d的mRNA的融合细胞，实验结果如下图所示。分析实验数据可知，Kd4d的mRNA的作用是______________。
(5)有人提出：将经特定抗原刺激的B淋巴细胞核移植到去核骨髓瘤细胞中来产生单克隆抗体，此方法_______________（填“能”或“不能”）获得既能分泌抗体、又能无限增殖的细胞。

【推荐2】用化学方法激活小鼠成熟的卵母细胞得到phESC（孤雌单倍体干细胞），然后通过基因编辑技术使phESC中的3个基因沉默，phESC的细胞核状态便可接近精子细胞核的状态，如下图1所示。用化学方法激活小鼠的精子得到ahESC（孤雄单倍体干细胞） ，然后对ahESC中的8个基因进行编辑，ahESC的细胞核便具有卵细胞核的特点，如下图2所示。根据以上资料回答下列问题：
   
(1)体内受精过程中，防止多精入卵的两道屏障是：________、_________；精子入卵后被激活的卵子完成____________，排出__________后，形成___________。
(2)用___________对雌性小鼠进行处理可得到大量卵母细胞，将这些卵母细胞转化为phESC的过程相当于植物组织培养中的_________过程。
(3)ahESC与精子和去核卵细胞融合后，得到的融合细胞的性染色体组成可能是________。
(4)据图1和图2分析可知，只依赖雌性小鼠就可以得到孤雌小鼠，而只依赖雄性小鼠是不能得到孤雄小鼠的，理由是____________________。

【推荐3】请回答下列与生物技术实践相关的问题：
(1)酵母菌是一种真菌。可用于制作果酒．酵母菌新陈代谢的类型是____________，果汁发酵后是否产生酒精，可以用_____________检测，呈现的颜色为_______ 。
(2)花药离体培养时，选择合适发育时期的花粉能提高诱导成功率，确定花粉发育时期最常用的染色方法是_______。花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中____________________。
(3)胡萝卜的组织培养中要求无菌操作的目的是_______________，在愈伤组织形成过程中常用的培养基是MS培养基，并且需要添加____________。培养基灭菌的常用方法为_________。愈伤组织分化成根和芽，再由芽发育成叶和茎，这一过程称为___________。