【推荐1】BMP15蛋白是由卵母细胞分泌的一种转化生长因子，在卵巢发育过程中起着重要的调节作用。为研究兔BMP15基因在兔繁殖机能的调控机制，科学家进行了相关实验，如图1所示。克隆出新西兰白兔BMP15基因，与Myc基因形成融合基因，构建该基因的真核表达载体，并对产生的BMP15蛋白进行分析，以期为深入研究BMP15基因对卵巢发育的调控机制奠定基础。回答下列问题：

(1)获取目的基因：选取幼龄健康的新西兰白免雌兔，对BMP15基因在各组织中的表达情况进行分析，如图2所示:

由结果可知，应采集新西兰白兔_______组织的RNA，经RT-PCR过程获得大量的BMP15基因。图1中①②③过程用到的酶有__________。
(2)PCR步骤为变性—复性—延伸，需要引物参与，引物的作用是_______。
(3)重组载体的组成除了图上所示，还应该有_______。
(4)在导入大肠杆菌之前，需要先用_______处理，使其处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。导入后应将受体菌在16℃环境中过夜处理，以完成转化。转化指的是_________________。
(5)④步骤应将转化好的菌涂在含有______________的培养基上，获取菌落。可通过抗原—抗体杂交实验，加入Myc蛋白抗体来检测BMP15基因是否表达的机理为______________。

【推荐2】马铃薯是重要的块茎类粮食作物。二倍体马铃薯普遍存在自交不亲和的现象，可以形成正常雌、雄配子，但缺乏自花授粉结实能力，导致无法使用种子种植马铃薯。二倍体马铃薯的自交不亲和是由核糖核酸酶基因（S-RNase）控制的，我国科研人员通过基因编辑技术敲除了马铃薯的S-RNase基因，获得自交亲和的二倍体马铃薯，为马铃薯杂交育种提供了全新的技术体系。下图是科研人员用CRISPR/Cas9（主要由Cas9和向导RNA组成）基因编辑技术定点敲除S-RNase基因的示意图，回答下列问题：

(1)用于编辑不同基因的CRISPR/Cas9复合物中向导RNA碱基序列不同，因此首先要确定马铃薯S-RNase基因中的待编辑序列，可以通过PCR技术扩增S-RNase基因，作为编码特定向导RNA的模板。扩增时需要根据__________设计引物，引物的作用是___________。
(2)CRISPR/Cas9系统能精准识别相关基因，若马铃薯S-RNase基因序列为5'-AGGA……ACCT-3'，则设计的向导RNA中相应的序列应为____________；Cas9蛋白可催化______（填化学键名称）水解，剪切特定DNA片段。
(3)欲检测经上述基因编辑技术得到的植株是否已具有自交亲和性状，最简便的方法是_______。
(4)实验发现，CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在脱靶效应，即基因编辑时，不仅对目标基因进行了修改，还对其他无关基因进行了不必要的编辑，造成非目标基因突变。造成“脱靶”最可能的原因是_________。

【推荐2】大量的科学研究已经证明，VP40蛋白基因的基因突变或者VP40蛋白的缺失会终止埃博拉病毒的侵染行为，因此制备针对VP40蛋白的抗体可能是战胜埃博拉病毒的新途径。请据图回答：

（1）过程①中选用两种限制酶切割，使目的基因的两端获得不同的黏性末端，这样处理的目的是_______。
（2）图中过程②需要用_________处理大肠杆菌。在基因表达载体中，VP40蛋白基因的首端必须含有______，其作用是能够被__________识别和结合，从而保证③顺利完成。
（3）为检测VP40基因是否成功表达，可以采用________技术。VP40蛋白抗体能够战胜埃博拉病毒的原因是____________________。

【推荐3】近年来牛乳过敏症体质者日渐增多，因此研发改造不含致敏原的食用乳品至关重要。羊乳的成分更接近于人乳，可作为牛乳过敏体质者最理想的替代乳品。研究表明山羊乳中β-乳球蛋白是引起人体过敏反应的主要致敏原，人乳铁蛋白是最初在人乳汁中发现的一种铁结合蛋白，具有抑菌和杀菌、抗病毒、调节免疫、促进铁元素吸收等多种生物学功能，是十分理想的乳品添加剂。因此，利用CRISPR/Cas9系统敲除山羊乳中β-乳球蛋白基因，再导入人乳铁蛋白基因，是提高羊乳品质的一个重要研究方向。
(1)CRISPR/Cas9系统主要包含向导RNA和Cas9蛋白两个部分，向导RNA能识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白结合到相应位置并剪切DNA，最终实现对靶基因序列的编辑（如图所示）。
   
①CRISPR/Cas9系统能精准识别相关基因的原理是单链向导RNA与目标DNA发生_____。
②Cas9蛋白的功能与_____的功能类似。
(2)可通过PCR快速扩增人乳铁蛋白基因，扩增时引物的作用是_____。为便于人乳铁蛋白与载体连接，需要在引物的_____端加上限制酶切割位点。
(3)下图表示构建人乳铁蛋白基因表达载体的过程。（图中表示四环素抗性基因，表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示）。   

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BelⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
识别序列及切割位点

①要将人乳铁蛋白基因插入到载体中，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是_____。
②应将人乳铁蛋白基因与_____等调控组件重组在一起，成功导入重组载体的细胞应该放在含有_____的培养基中进行选择，再通过进一步鉴定后，可将含有重组表达载体的受精卵发育成转基因动物。

【推荐1】下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病的过程图解。请据图回答：

(1)②所示的生物技术名称是_____________，该项技术的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，这是因为_______________________________________________。重组细胞A培养过程中所用培养液除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等成分以及________等物质，并且用一定的方法激活其完成细胞分裂和发育进程。该过程通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的原因除了它体积大、易操作、营养物质丰富外，还因为它含有___________的物质。
(2)图中③所示的结构名称是_______________。其在形态上，表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上具有________________。若实现重组细胞B定向诱导分化，需要在培养基中加入_____________。
(3)若想得到大量健康的胰岛B细胞基因，可利用__________技术，该技术利用的工具酶是_____。
(4)图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是_________________。该种基因治疗所属类型为_______________________。

【推荐2】β-葡萄糖苷酸酶（GUS）基因来自大肠杆菌。转GUS基因的植物组织浸泡在含有某底物的缓冲液中，GUS能与底物发生反应，使植物组织呈现蓝色。研究人员利用转GUS基因的葡萄植株，以探究干旱条件对葡萄P启动子的功能是否有诱导作用。请回答：
(1)葡萄P启动子是_________识别并结合的位点。欲获得葡萄P启动子，可根据___________设计引物，利用该引物和从葡萄细胞获取的______为模板进行PCR扩增。
(2)将葡萄P启动子与GUS基因等元件构建基因表达载体，利用__________方法将该基因表达载体导入葡萄愈伤组织，葡萄愈伤组织在培养基中经_________后，进而发育形成转基因葡萄植株。
(3)取上述转基因葡萄植株分为A、B两组，A组置于正常条件（无干旱处理）下培养，B组置于干旱条件下培养。一段时间后分别取A、B组葡萄植株幼根，浸泡在含有底物的缓冲液中，观察幼根颜色变化情况。请预测实验现象及相关结论。

【推荐3】基因疫苗指的是DNA疫苗，是将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导人人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答．回答下列问题：
(1)要获得编码HIV抗原的基因，首先要提取出病原体的核酸，并______，要大量获得表达特异抗原的基因，可采用______方法。
(2)将抗原基因插入质粒的过程，即构建基因表达载体的过程，通常一个基因表达载体的组成，除了抗原基因（目的基因）外，还有______。
(3)一般将重组质粒利用______的方法送入受体细胞，进入细胞核并表达抗原蛋白。
(4)有人将下图质粒载体用BamH I酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，需使用含有______的固体培养基。

(5)基因疫苗是在基因治疗技术的基础上发展而来的．基因治疗是把______导入病人体内，使该基因表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的。

【推荐1】心脏移植是挽救终末期心脏病患者生命唯一有效的手段，然而心脏移植过程中会发生缺血再灌注损伤（IRI），可能导致心脏坏死。研究发现，IRI通过促进Caspase8等一系列凋亡基因的表达，导致细胞凋亡坏死最终引起器官损伤。根据Caspase8基因合成的小干扰RNA（siRNA）可以使Caspase8基因沉默，有效抑制IRI所致的器官损伤。图是利用猪的心肌细胞开展siRNA作用研究的示意图。回答下列问题：

(1)图中步骤②构建重组质粒需要使用___________等工具酶。与直接将siRNA导入猪的心肌细胞相比，通过重组质粒将siRNA对应的DNA序列导入心肌细胞，其优点是____________（答出一点）。
(2)siRNA对应DNA序列在心肌细胞中表达产生的siRNA，与RISC组装形成基因沉默复合物，通过抑制基因表达的___________过程，使Caspase8基因沉默，从而降低IRI引起的细胞凋亡。
(3)研究人员根据Caspase8基因的碱基序列，设计了三种序列分别导入猪的心肌细胞，通过测定靶基因Caspase8的mRNA含量来确定最优序列。测定mRNA含量时，需提取心肌细胞的总RNA，经过________过程得到cDNA，再进行PCR扩增，测定PCR产物量，结果如图所示。据此判断最优序列是___________。

(4)选用猪的心肌细胞做受体细胞是因为猪在基因、解剖结构、生理生化和免疫反应等方面与人类极为相似。为了解决心脏移植供体短缺问题，许多科学家正在研究用猪心脏代替人的心脏。你认为将猪心脏移植到人体面临的最大挑战是免疫排斥反应，这是因为免疫系统会把外来器官当作抗原（“非己”）成分进行攻击。请说出一种解决这一问题的思路：___________（利用基因工程的方法）。

【推荐2】草甘膦是一种非选择性除草剂，杀死杂草的同时也杀死农作物。它与植物体内的PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）结构相似，可与PEP竞争结合EPSP合酶，阻止PEP转化，影响植物细胞正常代谢。我国科学家从施用草甘膦的土壤中的微生物体内获取草甘膦抗性基因GR79，并将其导入玉米体细胞中获得抗草甘膦转基因玉米。回答下列问题：
(1)启动子位于基因的_____，终止子的功能是_____。欲用含基因GR79的土壤微生物构建cDNA文库，需要提取该微生物细胞的全部_____。
(2)若用PCR技术扩增基因GR79，扩增的起点和终点由_____决定，PCR过程包括变性、退火和_____，其中退火指_____。
(3)通过培养转入基因GR79的玉米细胞的原生质体，可以获得抗草甘膦转基因玉米。获得原生质体时需要在_____溶液环境下进行，目的是_____，然后用_____酶处理玉米细胞。
(4)待抗草甘膦的转基因植株长出新叶后喷洒适量含_____的水溶液，选取存活植株移栽到温室，以获得具有除草剂抗性的植株。若科研人员发现部分获得基因GR79的玉米幼苗不具有抗草甘膦的能力，原因可能是_____。

【推荐3】Rh2是人参细胞中一种重要的皂苷类物质，具有抗肿瘤和提高免疫力等功能。可利用植物细胞培养和转基因工程菌培养等不同方法生产Rh2。回答下列问题：
(1)利用植物细胞培养技术生产Rh2时，选用人参的幼根作为外植体，先对其进行____处理，再培养诱导出愈伤组织，然后在____培养基中振荡培养，使其分散成单细胞。将得到的单细胞进行多次____培养后获得大量的细胞培养物，采用____的方法破碎细胞后经分离纯化可获得大量的Rh2。将愈伤组织制成单细胞后再培养的优点是____。
(2)为了克服植物细胞培养过程复杂、产物难分离等缺点，科研人员以酵母菌L菌株为受体，导入P基因和N基因，以期获得Rh2高产的R菌株。
①P基因和N基因的扩增：为了便于P基因和N基因定向连接，需在引物的____端（填“5”或“3”）加上限制性内切核酸酶识别序列。进行PCR扩增时通常在反应缓冲液中添加Mg^2＋，目的是____。
②重组表达载体构建和转化：将含有P基因和N基因的重组DNA与____分别进行双酶切处理，再用DNA连接酶处理，得到重组表达载体，然后导入到L菌株，可通过____判断重组DNA片段是否整合到L菌染色体上，筛选获得转化的酵母菌R菌株。
③生产力的检测与改进：将R菌株与L菌株置于相同条件下培养，发酵一段时间后分别检测Rh2和前体物质A的含量，结果如下图。

注：甲为前体物质A和Rh2混合物检测结果，作为标准参考。
据图可知，导入P基因和N基因起到了____的作用。为进一步提升R菌株Rh2的生产能力，可通过转基因技术、____等技术提高其____的能力来达成。