【推荐1】B基因存在于水稻基因组中，其在体细胞和精子中正常表达，在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计并完成了如下实验来获取能够在卵细胞中表达B基因的转基因植株。请回答下列问题：

注：Luc基因表达的荧光素酶能催化荧光素产生荧光
(1)图中所示的基因表达载体需含有启动子，它是___________识别并结合的位点。
(2)可利用___________细胞中的RNA和PCR技术获取大量的B基因，该过程需要用到___________酶；获得B基因中编码蛋白的序列后，将该序列与Luc基因连接成融合基因（表达的蛋白质能保留两种蛋白质各自的功能），然后构建基因表达载体。
(3)用Ca²⁺处理农杆菌，使细胞处于一种___________的生理状态，然后将重组的基因表达载体导入其中。
(4)外植体经___________形成的水稻愈伤组织放入农杆菌液浸泡后进行植物组织培养，培养基中需加入___________进行筛选。
(5)个体水平可以通过___________筛选出能表达B基因的转基因植株。

【推荐2】H1NI为单链RNA病毒，感染人类会引发甲型流感。对H1N1进行基因组测序，发现HA基因是该病毒的一种特征基因。可通过检测HA基因来检测待测标本中H1N1的含量，过程如下图所示。回答下列问题。

（1）对H1N1进行基因组测序是测定RNA的__________序列。
（2）在过程①和②中，需分别向反应体系加入_________酶和____________酶。
（3）过程②中对HA基因对应的cDNA序列进行扩增，需设计_____种引物。反应体系中加入dATP、dTTP、dCTP和dGTP的作用是____________________。
（4）反应体系中含有荧光物质，每扩增形成一条DNA链，就会出现一定强度的荧光信号。现欲检测两个标本中H1N1的含量，可在荧光强度达到某一设定值时，观察比较两个反应体系扩增循环的次数，若某个标木的循环次数较少，则其H1N1含量较____________。
（5）检测HA基因还可以采用分子杂交技术。制备用放射性同位素标记的、与A的基因互补的核酸序列作为_____与待测标本中提取的总RNA杂交，若观察到_____，则表明标本中存在HA基因。

【推荐3】为加强校园食堂管理工作，切实保障师生的饮食安全和身体健康，学校食堂实行“6T”管理制度，以提高食堂饮食卫生状况。食品卫生检验检疫人员对某学校食堂自来水进行随机抽样检测细菌总数和大肠杆菌是否超标。已知大肠杆菌的代谢产物能与伊红—美蓝指示剂结合，使菌落呈深紫色并有金属光泽。我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的细菌标准的具体规定如下：
细菌总数：1mL水中不超过100个；大肠杆菌数：1L水中不超过3个。
下表是检测人员用于培养细菌的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题：

成分	蛋白胨	乳糖	蔗糖	K2HPO4	伊红—美蓝	琼脂
含量（g）	10.0	5.0	5.0	2.0	0.2	12.0
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL

(1)根据培养基用途划分，该培养基属于___________________（填“选择”或“鉴别”）培养基。在微生物培养的过程中，为防止杂菌污染，需要用___________________法对培养基进行灭菌。
(2)检疫人员检测大肠杆菌时培养得到的结果如图甲所示，其对应的接种方法应是___________________；假设取0.1mL水样进行检测统计细菌总数，实验所用3个平板的平均菌落数结果如图乙所示，根据结果判断该校自来水细菌总数是否超标并说出判断理由？______________________________________。
   
(3)饮用水的消毒方法常见的主要有：次氯酸钠、紫外线、臭氧消毒等方法。经氯剂消毒的自来水中大肠杆菌数量极少，采用常规滤膜培养法检测会出现阴性结果，而PCR法灵敏度高，可以检测出水样中极少量的大肠杆菌。有研究表明，PCR法比较适用于氯剂消毒或臭氧消毒的饮用水大肠杆菌的检测。在PCR扩增过程中，需要将温度加热至___________________℃以上，其目的是使大肠杆菌DNA受热变性后解为单链；当温度加热至72℃左右时，互补链可在___________________酶的作用下，以单链DNA为模板，利用4种脱氧核苷酸为原料从引物的___________________端开始进行延伸DNA链。

【推荐1】随着科学技术的发展，人们可以根据人类的需求来改造生物的性状。如图是利用奶牛乳汁生产血清白蛋白的图解，据图回答下列问题：

(1)图解中涉及的细胞工程手段有：______________________。
(2)获取②的途径有：基因文库获取、____________和________________；构建血清白蛋白基因表达载体时，目的基因的首端是____________（结构）。
(3)细胞培养所需气体主要有O₂和__________，前者是______________所必需的，后者的主要作用是______________________。
(4)提供细胞质的卵母细胞要在体外培养至________期，并通常采用______________操作去除卵母细胞的核。
(5)⑦是⑥的后代，那么⑦的遗传性状和______________（填“荷斯坦奶牛”或“普通奶牛”）最相似，原因是_____________________________________________________________。

【推荐2】为制备目的基因Y（图1）与质粒X（图2）的重组DNA，将质粒X与含Y的DNA片段加入含有限制性核酸内切酶BgⅠⅡ与BamHⅠ的反应混合物中，酶切后的片段再加入含有连接酶的反应体系中．其中，质粒X含有leu2基因，可用于合成亮氨酸，目的基因Y含有卡那霉素抗性基因KanR。

（1）根据图3分别写出BgⅠⅡ与BamHⅠ酶切后形成的末端序列：_____、_____。
（2）BgⅠⅡ酶切后的质粒与BamHⅠ酶切后的目的基因Y能够连接的原因是_____。
将连接后的产物转化入一种Z细菌，Z细菌对卡那霉素敏感，且不能在缺乏亮氨酸的培养基中培养。
（3）使用BgⅠⅡ处理重组质粒，可以得到_____。
A．长度为3300bp的环状DNA
B．长度为3300bp的线形DNA
C．长度为2800bp和500bp的线形DNA
D．长度为2800bp的环状DNA
（4）要筛选含有重组质粒的Z细胞，应选择_____。
A．卡那霉素和亮氨酸均含的培养基
B．卡那霉素和亮氨酸均不含的培养基
C．含卡那霉素但不含亮氨酸的培养基
D．含亮氨酸但不含卡那霉素的培养基

【推荐3】接种疫苗是控制新冠肺炎的重要措施之一，新冠病毒疫苗有多种，我国科学家团队研发的腺病毒载体重组新冠病毒疫苗（重组疫苗）是一种基因工程疫苗。右图是构建含新冠病毒S蛋白（抗原）基因的重组腺病毒表达载体的过程，箭头表示Nco I、Sph I、Nhel、BamHI的酶切位点（四种酶的识别序列详见下表）。请回答下列问题：

限制酶	Nco I	Sph I	Nhe I	BamHI
识别序列和切制位点	C↓CATGG	CCATG↓C	G↓GATCC	G↓CTAGC

(1)为使重组质粒构建过程顺利进行，需先使用限制酶_____和_____切割质粒，选用两种限制酶对新冠病毒的S蛋白基因和质粒进行切割的目的是_______（答出1点即可）。
(2)扩增含S蛋白基因的重组腺病毒：腺病毒为DNA病毒，对人体无害，需要利用技术手段将上面得到的重组质粒整合到腺病毒DNA（基因组）中，然后培养一种称之为293的细胞，让这种重组病毒侵染这些细胞，同时使用_______方法检测有无S蛋白的产生，若有，则证明S蛋白基因成功表达，重组腺病毒可以用作疫苗。
(3)人体接种腺病毒重组疫苗后，S蛋白基因表达出S蛋白抗原，诱导机体通过________免疫产生抗体。重组疫苗只需注射一针即可完成接种。数周后接种者体内仍然能检测到重组腺病毒DNA。请由此推测只需注射一针即可起到免疫保护作用的原因是________。
(4)综合上述信息，重组腺病毒载体疫苗是安全的，判断的依据是_________。

【推荐1】稻米胚乳直链淀粉含量高会导致食用品质差。研究发现，水稻蜡质基因（Wx）编码直链淀粉合成酶。Wx基因模板链第226位碱基为G，此时胚乳中直链淀粉含量最高，记为品种G；若该位点突变成T，胚乳中直链淀粉的合成水平会降低，记为品种T。请回答下列问题：
(1)Wx基因控制稻米胚乳直链淀粉含量这一性状的途径是：通过控制______________，进而控制该性状。
(2)为检测某水稻Wx基因的第226位碱基是G还是T，研究人员以待测水稻叶片总DNA为材料进行PCR扩增，除加入模板和四种脱氧核苷酸外，反应体系中还需加入__________，并且需在含________（填离子）的缓冲液中进行。如图为品种G和品种T中Wx基因的部分碱基序列，已知引物1为5＇-GCTTCACTTCTCTGCTTGTG-3＇，则引物2为_________。AccⅠ酶的识别位点为   两引物之间无另外的AccⅠ酶的识别位点。产物经AccⅠ酶切后电泳，若电泳结果观察到长度为_______bp的DNA条带，则表明该水稻品种为T。

   

(3)若要利用基因工程的方法改造水稻，通过抑制Wx基因表达来培育低直链淀粉含量水稻品种，请你提出改造思路：_________。将目的基因导入水稻细胞，可采用__________法（答出2种）。

【推荐2】肿瘤细胞可以表达CD47蛋白，并与吞噬细胞表面的信号调节蛋白a（SIRPa）结合，向吞噬细胞发出“别吃我”的信号，以逃脱机体免疫系统的攻击。因此阻断CD47/SIRPa信号，有望恢复吞噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。请回答有关问题：
(1)利用外源DNA、质粒制备含CD47基因的重组质粒。如图为含CD47基因的外源DNA、质粒的有关信息，EcoRⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、XhoⅠ均为限制酶，Kan'、Tc'分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。

①为了形成合适的重组质粒，应该选用BamHⅠ、XhoⅠ限制酶切割外源DNA和质粒DNA，原因是：a、______；b、____________。
②重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需经筛选才能获得导入成功的受体细胞。结合图所获得的重组质粒分析，所选受体细胞应具备______条件。
(2)如图是利用上述基因工程获得的CD47蛋白制备相应单克隆抗体及相关治疗效果检测实验过程。

①图中获得细胞A的器官通常是______。
②图中过程b可以采用的方法有______。（答出一点）
③图中“筛选”一般需要进行两次，目的依次是：第一次______，第二次______。
④如图中共同培养吞噬细胞和肿瘤细胞，在实验组加入不同浓度的CD47抗体，测定吞噬细胞的吞噬指数（吞噬指数与吞噬细胞所吞噬的肿瘤细胞数量成正相关），实验结果如图所示。该实验结果对临床治疗肿瘤有何指导意义？_____。

【推荐3】干扰素（IFN）是机体免疫细胞产生的一类细胞因子，其可增强各种免疫细胞的活力，同时还能通过诱导细胞合成抗病毒蛋白实现对病毒的抑制，进而增强人体的抗病毒能力。用白细胞生产干扰素，每个细胞最多产生100—1000个干扰素分子，而用基因工程技术改造的大肠杆菌生产干扰素，在1—2天内，每个菌体能产生20万个干扰素分子。图1、图2为质粒和IFN基因的结构。回答下列问题：

(1)基因工程的一般步骤包括：______、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定四个步骤，基因表达载体中有启动子，它与起始密码子的区别是______。
(2)从基因组文库中获取的IFN基因直接导入大肠杆菌______（填“能”或“不能”）表达IFN，原因是______。
(3)欲利用上述材料构建基因表达载体，不选用EcoRI的原因是______。最好选用限制酶______，所构建表达载体的标记基因是______。
(4)将构建好的表达载体导入大肠杆菌细胞时需先用Ca²⁺进行处理，原因是______。

【推荐1】下图是通过生物工程技术生产抗体的两种途径，据图回答下列问题：

（1）生产抗体1和抗体2所用的工程技术名称分别是_________和_________。
（2）①过程类似于植物组织培养技术中的_______过程。与纤维母细胞的全能性相比，诱导干细胞的全能性比较______________。
（3）②过程产生的细胞在结构和功能上产生差异的根本原因是____________。
（4）③过程通常使用灭活的病毒诱导融合的原理是_____________________________。
（5）通过⑦过程获取的目的基因与基因组文库中的基因相比，该基因在结构上的特点是_____________。获取目的基因后可以利用PCR技术进行扩增，利用该技术扩增目的基因的前提是______________，以便合成引物，且利用热变性原理，通过控制_____________来控制双链的解聚与结合。
（6）④和⑩过程均需要筛选，其目的分别为_________和_________。
（7）采用蛋白质工程技术对该抗体进行改造，直接操作的对象是_____。正确顺序是(用数字表示)：_______
①推测新抗体的氨基酸序列和基因的核苷酸序列；
②新抗体的功能分析和结构设计；
③新抗体基因的修饰(合成)：
④表达出新抗体。

【推荐2】lacZ基因位于大肠杆菌质粒上，其编码产物β-半乳糖苷酶在X-gal和IPTC两种物质都存在时，可使大肠杆菌菌落呈蓝色，否则菌落呈白色。下图为相关的转基因操作示意图其中①、②、③表示有关过程。请据图回答下列问题：

（1）与诱变育种相比，基因工程具有的明显优势是能够_____________改造生物，以满足人们的需要。转基因技术常以大肠杆菌为操作对象，大肠杆菌作为受体细胞的特点是_____________。
（2）①过程前后，目的基因末端发生的变化是_____________。
（3）②过程是构建_____________，该过程需要添加_____________酶。
（4）在基因工程中，转化是指_____________。
（5）通过③过程筛选含有目的基因的大肠杆菌，需要在培养基中添加的物质是_____________，菌落A~C中呈蓝色的是_____________。

【推荐3】苯丙酮尿症是一种单基因遗传病，由于PKU某因突变导致患者尿液中含有大量苯丙酮酸。基因定点整合可替换特定基因用于该病治疗，即将正常PKU基因定点整合到PKU基因突变的小鼠胚胎干细胞的染色体DNA上，替换突变基因。简要过程如下图所示。请回答下列问题：


   
(1)构建重组载体时，需要根据______的碱基序列分别合成 HB1'和 HB2',在二者之间除了插入正常的PKU基因和 neo"基因以外，还必须含有______。此过程常用的工具酶有限制酶、______酶，neo"基因的作用是______。
(2)可用_____技术将重组载体导入小鼠胚胎干细胞，诱导相应区域互换，完成胚胎干细胞的基因改造。胚胎干细胞的特点有______(答出两点即可)。
(3)现用完成基因改造后的胚胎干细胞进行个体生物学水平鉴定，写出鉴定思路、结果及结论：______。