组卷网 > 高中生物综合库 > 生物技术与工程 > 基因工程 > 基因工程的基本操作程序 > 基因表达载体的构建
题型:非选择题-解答题 难度:0.4 引用次数:322 题号:16636668
疫苗接种是当前新冠肺炎疫情防控工作的一项重要举措,我国科学家研发了多种新冠疫苗,其中重组腺病毒疫苗研发策略是:将新冠病毒的S蛋白基因整合到腺病毒DNA中,形成表达S蛋白的重组腺病毒,注射到健康人体内,腺病毒可侵染人体细胞,达到预防新冠病毒感染的效果。
(1)获得S蛋白用作蛋白疫苗,可以通过基因工程技术获得大量蛋白S,基因工程的基本操作流程是:_____。与直接将S蛋白注射到体内作为疫苗相比,重组腺病毒疫苗的优点是可以引起人体产生_____免疫,更有效清除病毒。
(2)为了构建重组腺病毒DNA,需要将S蛋白基因插入腺病毒DNA中,由于腺病毒DNA分子较大,传统的限制性核酸内切酶和DNA连接酶处理效率较低,所以采取如图1所示方法获得重组腺病毒DNA。

将质粒1和质粒2共同导入受体细胞中,据图推测,最终重组线性DNA分子上,X所示的原件应该为_____,其功能是_____。以病毒做为基因工程的载体,其优点之一是可以利用病毒_____的特点,将目的基因导入受体细胞。
(3)生产疫苗的过程是将上述重组线性DNA分子(不编码病毒复制必需的E1蛋白)导入到293细胞系(该细胞系可表达人体细胞没有的E1蛋白),最终包装成完整的腺病毒。这种方式生产的疫苗由于重组腺病毒_____,从而提高了疫苗的安全性。
(4)为了检测疫苗的效果,科学家用不同方式给雪貂接种重组腺病毒疫苗后,感染新冠病毒,一段时间后检测新冠病毒含量,结果如图2,说明重组腺病毒疫苗_____

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非选择题-解答题 | 较难 (0.4)
【推荐1】抗菌肽具有热稳定性以及广谱抗细菌等特点。将若干编码抗菌肽(ABP)序列按照首尾相连的方式插在质粒PLG339的布康唑抗性基因内部,形成长度为4800bp (1bp为一个碱基对)的重组质粒PLG339-nABP,相关过程如图所示。已知重组质粒中,每个编码ABP序列中都含有限制酶AccⅢ的一个切点,基因trpA的表达产物可使细胞利用无机氮源合成色氨酸(色氨酸是微生物生长必须的氨基酸)。

(1)质粒PLG339的基本单位是___________________
(2)若PLG339—n ABP经限制酶AccⅢ处理后,产生66bp和4140bp两种长度的DNA片段,单个抗菌体(ABP)最多由______________个氨基酸构成(不考虑终止密码)。
(3)现有大肠杆菌和酵母菌两种菌群,可作为导入PLG339-nABP的受体细胞是_________________,理由是____________________________________
(4)若选定的受体细胞为trpA基因缺陷型,则需采用两步法筛选含重组质粒的细胞。第一步筛选的固体培养基在营养成分上的要求是:含______________,不含色氨酸;第二步将第一步所得菌落接种到新的培养基上进行培养,该培养基中应添加_____________。通过对照,最终选出______________(能/不能)在第一步培养基上生长,而______________(能/不能)在第二步培养基上生长的菌落即为符合要求的成功导入重组质粒的细胞。
(5)在测试转基因表达产物ABP对金黄色葡萄球菌的杀菌效果时获得了如图所示的结果,据此可得出结论:ABP抑制效果与________________________有关。
2020-08-22更新 | 275次组卷
【推荐2】毕赤酵母(能以甲醇为唯一碳源)可作为生产抗原蛋白的工程菌。研究人员以pPIC9K质粒为载体,构建含乙型肝炎病毒表面抗原蛋白基因HBsAg的重组质粒,酶切后导入毕赤酵母,经同源重组整合到其染色体DNA上并实现复制与表达,部分过程如下图。其中5'AOX1为AOX1基因启动子(一种甲醇诱导型启动子),3'AOX1(TT)为AOX1基因终止子,3'AOX1为AOX1基因的部分序列(同源重组的重要位点之一),BglⅡ、SacI、SnaBI和AyrⅡ为限制酶酶切位点,HBsAg基因中“→”表示基因转录方向。回答下列问题。

(1)过程①需要的原料是___________,催化该过程的酶需要___________(物质)激活。
(2)过程①应在HBsAg基因两侧的A和B位置添加的碱基序列分别是_____________________,以实现目的基因定向插入质粒。
(3)过程③需用一定浓度的__________处理大肠杆菌使其成为感受态细胞,将重组质粒导入大肠杆菌的目的是____________
(4)若用限制酶SnaBI、BglⅡ联合酶切pPIC9K质粒,获得的DNA片段的长度分别是38kb、27kb、67kb;用限制酶BglⅡ、AvrⅡ联合酶切pPIC9K质粒,得到的DNA片段的长度分别是38kb、40kb、54kb;已知HBsAg基因长度是55kb。则过程⑤应选用的限制酶是___________,获得的重组DNA的长度为___________
(5)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后,需要向其中加入甲醇,其目的是__________
2024-01-22更新 | 412次组卷
非选择题-解答题 | 较难 (0.4)
名校
【推荐3】生活在寒温带的“美洲叔蝶”冷水鱼,能产生大量的抗冻蛋白。科研人员利用其抗冻基因,培育出抗冻番茄植株,幼苗在哈尔滨的致死温度下降2度。其研发技术路线如下图(其中amp'为氨苄青霉素抗性基因)。

(1)按受体细胞分,此案例属于___基因工程。
小柴查阅相关资料,决定采用SmaⅠ和PstⅠ两种限制酶切割获得抗冻基因和切开质粒,以期在步骤①高效获得重组质粒。
(2)小柴查阅到的资料是:___________________;此种获得目的基因的方法称为____________
小柴用上题方法获得含抗冻基因的重组质粒后,进行如下实验切割原质粒和重组质粒,获得片段大小如下表(1kb=1000bp) (注意∶ DNA 片段大小与图中所画比例一致)
限制酶AluISmaI和Pst I
原质粒7.7kb2. 3kb、 5.4kb
重组质粒3.0kb、4. 8kb
(3)分析数据,计算可得鱼抗冻基因的长度为___,若不考虑终止密码子,抗冻蛋白由____个 氨基酸组成。
(4)步骤②为______________,导入前番茄细胞应具有的特点是______
A.无amp',有抗冻基因                            B.有amp',有抗冻基因
C.有amp',无抗冻基因                                D.无amp',无抗冻基因
(5)步骤③表示植物组织培养的___________过程。
(6)若抗冻基因整合进二倍体番茄细胞的某一条染色体上(基因型记为Aa)则以下对抗冻番茄进行处理后获得的后代一定保留有抗冻基因的是     
A.营养繁殖B.植物组织培养C.自交D.与普通番茄(aa)杂交
2021-12-21更新 | 564次组卷
共计 平均难度:一般