【推荐1】棉铃虫和蚜虫是常见的植物害虫，为减少农药的使用量，我国科学家利用基因工程培育出一些能抵抗虫害的植物新品种。Cry1A基因的表达产物对棉铃虫等鳞翅目昆虫有较强的毒性，GNA基因的表达产物对蚜虫等刺吸式口器的昆虫有较强的毒性。科研人员将Cry1A基因与GNA基因连接在一起，构建了双抗虫基因的重组表达载体，并转入烟草细胞，获得了具有双抗性的转基因烟草，其部分过程如图1所示，请分析并回答以下问题：   

注：图中PstI、KpnI、EcoRI、HindⅢ表示限制酶，不同限制酶切出的黏性末端均不同；Klenow能将黏性末端转变为平末端。
(1)过程③将Cry1A基因与GNA基因相连，可选用_____（填“E．coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
(2)过程④应该选用_____（填图中限制酶）切割植物表达载体，以便与目的基因相连，形成重组表达载体。
(3)让农杆菌侵染烟草叶片前，需要通过实验筛选农杆菌：将培养农杆菌的培养基倒平板后均分为A、B两组，在A组培养基中涂布一定量的链霉素，在B组培养基中涂布等量的卡那霉素和链霉素。往A组培养基中接种适量农杆菌，待长出菌落后，用影印法接种到B组培养基上，实验结果如图2，其中_____（填图中对应的数字）菌落对应的农杆菌可能是符合要求的，即含有_____的农杆菌。
(4)除了（3）使用的方法外，将目的基因导入植物细胞，我国科学家还独创了一种方法是_____。为了确认目的基因在植物细胞中是否成功表达，从分子水平通常使用_____法进行检测。
(5)利用转基因技术可以培育出具有优良性状的生物，生产出人类所需要的产品。但转基因技术的安全性问题也一直备受关注。当面对日常生活中与转基因技术有关的话题时，我们需要理性地表明观点和参与讨论。下列属于理性看待转基因技术的是_____（填序号）。
①转基因食品中肯定含有毒性蛋白或过敏蛋白，会危害人体健康，必须禁止转基因技术的应用
②要在清晰地了解转基因技术的原理和操作规程的基础上来讨论转基因技术的相关问题
③要靠确凿的证据和严谨的逻辑来思考转基因技术的影响
④要看到经济、文化和伦理道德观念等的差异使人们对转基因技术有不同的看法

【推荐2】猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是通过猪细胞膜上的受体CD163 进行感染的。为实时监控受体CD163的表达和转运过程，科研人员将红色荧光蛋白 RFP 基因与CD163 基因拼接在一起，如图1所示，使其表达为一条多肽。 图2 表示用PCR 扩增后的CD163 基因的部分碱基序列。回答下列问题：

   

(1)为了完整的扩增CD163 基因序列，科研人员设计了一对碱基序列相等的引物，其中一个引物序列为 另一个引物序列为________。在PCR 扩增过程中引物与两条单链DNA结合时的温度一般要控制在________℃左右。
(2)为了扩增后的 CD163 基因能够与 RFP 基因拼接在一起，科研人员从图3的三种限制酶中选择了两种，然后对CD163 基因进行切割，切割结果如图3 所示。科研人员选择的限制酶是________，判断的依据是_______。

   

(3)根据图1分析，为了使拼接后的重组基因能够表达成一条多肽，需要除去 CD163 基因中编码________（填“起始密码子”或“终止密码子”）的序列。
(4)将图1所示表达载体导入猪的细胞，该表达载体转录时以________（填“a”或“b”）链为模板；翻译时，RFP蛋白与CD163蛋白合成的顺序是________。

【推荐1】菊天牛是菊花的主要害虫之一，为达到防治目的，科研人员通过转基因技术培育出了抗虫菊花。请回答下列问题：
（1）可用_____处理土壤农杆菌，使其处于_____以便吸收重组质粒。
（2）将重组质粒导入土壤农杆菌的目的是利用农杆菌能够_____的特点，使目的基因进入受体细胞中，并插入到菊花细胞的_____上，最终形成转基因植株。
（3）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的的基因时，需根据_____的脱氧核苷酸序列设计特异引物，以_____为模板进行第一轮扩增。
（4）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如下表所示：

组别		死亡率（%）
实验组	转基因植株1	60.00
	转基因植株2	53.33
对照组		13.33

①对照组应饲喂等量的_____菊花嫩茎及叶片与人工饲料混合物。
②据表分析，实验组与对照组_____差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。

【推荐2】 M 基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源DNA片段F插入M 基因的特定位置，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得M 基因失活的转基因克隆动物A，流程如图所示。回答下列问题：
   
(1)在构建含有片段F的重组质粒过程中，切割质粒DNA的工具酶是_________；常用_________方法将重组质粒导入成纤维细胞。
(2)在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是_________，在培养过程中细胞往往会贴壁生长这种现象称为_________。
(3)胚胎移植时的早期胚胎一般选_________期的胚胎；移植后一般不会发生免疫排斥反应，原因是_________。
(4)以免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，诱导融合的方法是_______（答出一点即可）。 筛选融合杂种细胞，制备M蛋白的单克隆抗体。简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M 基因是否失活的实验思路_________。

【推荐3】下图表示从苏云金芽孢杆菌获取抗虫基因（简称Bt基因）培育转基因抗虫棉的图解：请回答：

（1）从苏云金芽孢杆菌中切割抗虫基因所用的工具是________，它主要是从_________中分离纯化出来的。
（2）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是________________。
（3）写出b过程完整表达式：_____________________________________________。
（4）我国在“863”计划资助下开展Bt抗虫棉育种等研究，这将对________________和农业可持续发展产生巨大影响。
（5）基因工程是否成功可以在不同水平层次上进行检测。在性状水平上鉴定的方法是__________；在DNA水平上鉴定的方法是________________；在蛋白质水平进行检测的方法是从转基因植株提取蛋白质，进行________________，判断是否产生杂交带。

【推荐2】已知新冠病毒的S抗原基因编码的S蛋白在感染人体细胞的过程中起到关键作用，S蛋白与人细胞膜上ACE2受体结合后入侵人体细胞。陈薇院士团队成功开发了一种以人复制缺陷腺病毒为载体的重组新型冠状病毒基因疫苗，目前已获批上市。回答下列问题：
(1)制备腺病毒载体新冠病毒疫苗时，首先需在______的作用下，以新冠病毒的遗传物质RNA为模板经过逆转录得到S抗原基因。接着常利用______技术扩增S抗原基因，为了便于S抗原基因与腺病毒载体的连接，需要在引物的5'端加上_____位点。
(2)S抗原基因整合进腺病毒基因组时，需将S抗原基因插在腺病毒载体的启动子和终止子之间，使S抗原基因能______，从而激发人体产生抵抗新冠病毒的抗体和记忆细胞；腺病毒中负责复制的关键基因片段也需被剪切掉，目的是_________ ， 从而避免危害人体细胞。
(3)研究人员还可将S蛋白注入动物体内，一段时间后从脾脏中获取浆细胞，与骨髓瘤细胞融合，并利用选择培养基筛选出______。接着 经过多次筛选并在体外培养，获得针对S蛋白的_______。利用该方法制备的产物来治疗新冠肺炎的原理是____________。

【推荐3】为增加油葵种子中的含油量，科学家尝试将花生中的酶A基因导入油葵细胞，获得转基因油葵新品种。
（1）为获取目的基因，可从花生细胞中提取_________，经逆转录形成cDNA。以此cDNA为模板通过PCR技术扩增目的基因。
（2）构建重组DNA分子（如图所示）最好选用_________限制酶，目的是可避免_________。

（3）普通大肠杆菌细胞中没有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因，将构建的重组DNA分子导入农杆菌中,将获得的农杆菌接种在含_________的固体平板上培养得到含重组质粒的单菌落，再利用培养基振荡培养，可以得到用于转化的浸染液。
（4）剪取油葵的叶片放入浸染液中一段时间后，经过筛选获得转基因油菜细胞。最后经过__________________
培育成转基因油葵植株。此种技术的原理是_________。
（5）研究发现，如果将该酶A的20位和24位氨基酸变为半胱氨酸，其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程对酶A进行改造，所需步骤有_________。               
a．蛋白质的结构设计                            b．蛋白质的结构和功能分析
c．蛋白质结构的定向改造                      d．酶A基因的定向改造
e．将改造后的酶A基因导入受体细胞            f．将定向改造的酶A导入受体细胞
（6）经过种植转基因油葵发现，虽然转基因油葵种子中含油量上升，但是抗灰霉菌的能力丢失，其原因是_________。