【推荐1】2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面作出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白(GFP)能在蓝光或紫外光下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程：

请根据上述材料回答下列问题：
(1)图中过程②常用的方法是___________；过程③利用的生物技术是________；在进行过程④前，利用_________技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。
(2)用于培育绿色荧光小鼠的基因表达载体的组成必须有启动子、_______、_______、___等部分。
(3)cDNA属于_______基因文库，其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的mRNA通过______产生cDNA片段，与__________连接后储存在一个受体菌群中。
(4)PCR是一项利用DNA复制的原理在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。其基本过程是：加热至90～95℃使_________→冷却至55～60℃使________结合到互补DNA链→加热至70～75℃使________从引物起始进行互补链的合成，如此反复进行。

【推荐2】1981年Evans和Kaufman首次成功分离出小鼠胚胎干细胞(ES细胞)，医学界对其的研究虽颇有争议但也如火如荼。2008年1月17日《干细胞》杂志报道，美国加州的科学家使用了进行试管受精的年轻女性捐献的卵子去核，以及2名志愿者的皮肤成纤维细胞的细胞核，成功克隆出了5个人体胚胎，进而可以开发出有研究价值的干细胞。请回答下列问题。
(1)胚胎干细胞是从动物胚胎发育至囊胚期的________或胎儿的________中分离得到的一类细胞。
(2)上述过程中主要应用的动物细胞工程技术有____________、________。
(3)胚胎干细胞可诱导分化为皮肤干细胞，进而分化成皮肤细胞的根本原因是_____________________。
(4)某患者不能产生正常的白细胞，通过骨髓移植可以达到治疗的目的，骨髓移植治疗的实质是将________移植到患者体内。
(5)在培养胚胎干细胞时，培养基中通常需要加入______等天然成分，培养过程中所需气体主要有________。
(6)胚胎干细胞也可作为基因工程的受体细胞，将目的基因导入胚胎干细胞最常用的方法是________，将获得的目的基因转入胚胎干细胞前需构建基因表达载体，其目的是______________________。

【推荐3】下图是基因工程的基本操作流程图，回答相关的问题。

(1)图中①是用_______切割，②是_______，④是________，⑤是_________。与④相比，cDNA文库的基因中_________ (填“有”或“无”）启动子（具有启动作用的DNA片段），基因的数量_________ (填“多”、“少”或“不变”）。
(2) PCR的原理是_________，需要用的酶是_________。PCR —般要经历三十多次循环，每次循环分为_________三步。利用PCR技术进行扩增目的基因的前提是_________。使用PCR技术，若已知对某双链DNA扩增过程中消耗引物分子62个，则DNA扩增了 _________次。
(3)在“农杆菌转化法”中，运载体是质粒,但最终的受体细胞却不是大肠杆菌和酵母菌，而是不含质粒的双子叶植物和裸子植物的细胞，请问使用农杆菌的原因是_________。

【推荐1】新型冠状病毒是一种RNA病毒，其表面的棘突蛋白（简称S蛋白）是主要的病毒抗原，在康复患者血清中有抗S蛋白的特异性抗体。我国科学家研发的针对新型冠状病毒的重组蛋白疫苗操作流程如下图。

回答下列问题：
(1)步骤①中以RNA为材料可以获得cDNA，其原理是_______________。
(2)为了便于扩增的S蛋白基因与表达载体连接，需在引物的______________端加上限制酶的酶切位点，并且常在两条引物上设计加入不同的限制酶的酶切位点，目的是______________。
(3)要使S蛋白基因在大肠杆菌中表达，需要通过步骤②构建重组表达载体，而不能直接将S蛋白基因导入为肠杆菌，原因是______________。该步骤需要用DNA连接酶将______________连接起来形成重组表达载体。
(4)进行步骤③时，常用______________处理大肠杆菌，一般不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是___________________________。
(5)为检测步骤④获得的S蛋白是否能引起与新型冠状病毒S蛋白相同的免疫反应，简便可行的方法是____________________________。

【推荐3】单宁酶可水解单宁酸为没食子酸，降低茶汤中单宁酸含量，解决茶饮料“冷后浑”问题和果汁类饮料除涩问题。我国科学家在土壤中筛选出分泌单宁酶的黑曲霉Lys117，利用基因工程对其进行改造，提取单宁酶基因与强表达组件（强表达启动子和信号肽）结合，最终实现单宁酶的高产。回答下列问题：
(1)黑曲霉Lys117的分离筛选：将土样稀释适量倍数后，采用_________法接种于含有溴酚蓝（溴酚蓝在单宁酸环境中为蓝紫色，在没食子酸环境中为黄色）的选择培养基上。该选择培养基按物理性质分属于________培养基。根据选择培养基的_________（填现象）作为挑取单宁酶产生菌的标志。
(2)单宁酶基因扩增及组装如图所示：P1左侧有RNA聚合酶识别和结合的位点，为实现单宁酶基因与强表达组件定向连接，PCR扩增设计引物时需对引物添加相应的限制酶识别序列。则PCR应选择的引物对为_________，在各引物前添加的识别序列对应的限制酶分别是________.
   
(3)与强表达组件结合后的基因与Ti质粒重组；该过程为基因工程的核心步骤，即________。利用农杆菌的Ti质粒作为载体的原理是农杆菌的Ti质粒上的__________，可转移至受体细胞，并________上，与目的基因导入植物细胞类似。已知信号肽负责把蛋白质引导到不同的具膜细胞器内，本实验中信号肽存在的意义为_______
(4)重组Ti质粒导入目的菌并检测：将重组Ti质粒用特定方法导入黑霉菌Lys117，记为Lys117⁺，可依据________，最终鉴定出高产单宁酶的黑霉菌。

【推荐1】如图是应用生物工程技术获得人们所需要的生物新品种或新产品的示意图。据图回答下列问题。

（1）在培育转人生长激素基因牛过程中，①过程需要的工具酶是___________________，②过程常用的方法是_____。③过程先通过早期胚胎培养技术培养到_____或囊胚阶段，可以采用_______________________________技术， 培育出多头相同的转基因犊牛。
（2）prG 能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，II 是_____细胞，II 代表的细胞具有_____的特点。
（3）在抗虫棉的培育过程中，④过程中的受体细胞一般采用愈伤组织细胞，与采用叶肉细胞相比较，其优点是_____ ，⑤过程采用的技术是_____若从个体水平检测抗虫棉是否培育成功，请写出具体的鉴定 方法_________。

【推荐2】血管紧张素转化酶Ⅱ（ACE2）与高血压发生密切相关，该基因的开放阅读框cDNA序列大小为2418bp（图1）。甲、乙两位同学通过分子生物学方法克隆该基因到pMD18-T质粒载体中（图2），各自的部分测序结果如图4，通过双酶切获得ACE2基因编码序列与pEGFP-N1（图2）表达载体重组（MCS多酶切位点序列如图3所示），然后将重组质粒转染到受体细胞中，进行目的基因ACE2与绿色荧光蛋白（EGFP）的融合表达，最后实验结果显示甲、乙两同学培养的细胞均没有检测到绿色荧光蛋白。试分析并回答下列问题：
         
   
(1)若用PCR技术获取目的基因，则与之对应的引物结合部位应该是基因的_______端，该技术过程中会将温度调整到72℃左右的目的是________；该DNA分子在PCR仪中经过5次循环，需消耗的引物数量共_____个。
(2)根据图2可知，两种载体都具有的基本结构有_______、________和限制酶切位点。
(3)载体中Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，其在基因工程中的主要作用有_______。
(4)乙同学利用目的基因ACE2与绿色荧光蛋白（EGFP）融合表达的培养细胞没有检测到绿色荧光的原因是________。

【推荐3】我国有近一亿公顷的盐碱地，大部分植物无法在此生存，而耐盐植物藜麦却能生长。通过研究藜麦叶片结构后发现，其表皮有许多盐泡细胞，该细胞体积是普通表皮细胞的100倍以上，里面没有叶绿体，Na⁺和Cl^-在盐泡细胞的转运如下图所示。请回答问题。

(1)盐碱地上大多数植物很难生长，主要原因是_________________________，植物无法从土壤中获取充足的水分甚至萎蔫。耐盐碱水稻具有耐盐碱性状的根本原因是___________________。
(2)下表为藜麦盐泡细胞和其他几种普通植物的叶肉细胞膜中部分蛋白的相对表达量。其中_____（填下列选项字母）更可能是藜麦，理由是__________。

	A	B	C	D
Na+载体蛋白	8	12	5	11
Cl-载体蛋白	2	6	4	6
葡萄糖转运蛋白	38	28	66	68

(3)藜麦根系从土壤中吸收盐分是主动运输还是被动运输？有同学设计实验进行了探究。
①实验步骤：
a．取甲、乙两组生长发育基本相同的藜麦幼苗植株，放入适宜浓度的含有Na⁺、Cl^-的溶液中。
b．甲组给予正常的细胞呼吸条件，乙组加入______________。
c．一段时间后测定两组植株根系对Na⁺、Cl^-的吸收速率。
②实验结果及结论：

结果	结论
两组植株对Na+、Cl-的吸收速率相同	a______
b______	c_______

(4)研究人员尝试将藜麦中的耐盐基因转移到其他植物体内，从而培育新型耐盐植物。若要从分子水平上检测耐盐基因是否成功转入受体细胞，请写出两种常用的检测方法_________、___________。