生物科技广泛应用于农业生产,以改善农作物品质、提高产量。植物成熟果实细胞中会表达大量的半乳糖醛酸酶(PG),导致成熟果实易于损伤。科学家利用番茄的PC基因构建反义PG基因表达载体,导入番茄细胞,培育出转基因延熟番茄。图甲是反义PG基因的作用机理,图乙是质粒结构图及相应的酶切位点。回答下列问题。
(1)从番茄细胞中提取PG基因转录的mRNA,经过___________ 产生cDNA,再用___________ 技术体外扩增。该技术需先设计合成___________ ,并使用___________ 酶来催化。
(2)构建反义PG基因表达载体时需在启动子和终止子之间反向插入PG基因。为使目的基因与质粒正确连接,并提高两者重组的成功率,需在扩增的目的基因两端分别引入____________ (填“EcoRⅠ和EcoRI”“BamHⅠ和BamHI”或“BamHⅠ和EcoRI”)限制酶的识别序列。质粒上有标记基因,利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞,方法是___________ 。
(3)用含反义PG基因的农杆菌侵染番茄细胞,再通过___________ 技术培育出转基因番茄。在转基因番茄中,反义PG基因能抑制PG合成的原因是阻断了____________ 。
(1)从番茄细胞中提取PG基因转录的mRNA,经过
(2)构建反义PG基因表达载体时需在启动子和终止子之间反向插入PG基因。为使目的基因与质粒正确连接,并提高两者重组的成功率,需在扩增的目的基因两端分别引入
(3)用含反义PG基因的农杆菌侵染番茄细胞,再通过
更新时间:2023-03-12 08:43:40
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【推荐1】血红蛋白基因突变后血红蛋白分子中珠蛋白的结构发生改变,产生异常的血红蛋白从而出现血红蛋白病,如镰状细胞贫血。下表是正常血红蛋白HbA与异常血红蛋白Hb S、Hb Siriraj、Hb Luhe、Hb Contant Spring的β珠蛋白上氨基酸序列和密码子序列,表中省略的序列相同。
回答下列问题:
(1)血红蛋白基因表达β珠蛋白时,经历了____________ 两个过程,不同氨基酸在核糖体上经过____________ 反应形成β链。
(2)正常β珠蛋白的第6位氨基酸发生____________ 的变化时,β珠蛋白的空间结构发生改变,产生异常的Hb S,出现镰状细胞贫血,该病说明基因控制表达产物与性状的关系为____________________________________ 。该患者β珠蛋白基因模板链上的碱基的突变情况是____________ 。Hb S、Hb Siriraj与Hb Luhe基因的突变的方式都是发生了____________ 。
(3)人群中出现不同种类的血红蛋白,说明基因突变具有____________ 性。Hb Contant Spring的β珠蛋白的相对分子质量比正常β珠蛋白的____________ ,请解释其根本原因____________________________________ 。
β珠蛋白氨基酸顺序 | … | 5 | 6 | 7 | 8 | … | 141 | 142 | 143 |
正常氨基酸 | … | 脯氨酸 | 谷氨酸 | 谷氨酸 | 赖氨酸 | … | 精氨酸 | (终止) | |
正常密码子 | … | CCU | GAA | GAA | AAA | … | CGU | UAA | GCU |
Hb A | … | 脯氨酸 | 谷氨酸 | 谷氨酸 | 赖氨酸 | … | 精氨酸 | ||
Hb S | … | 脯氨酸 | 缬氨酸 GUA | 谷氨酸 | 赖氨酸 | … | 精氨酸 | ||
Hb Siriraj | … | 脯氨酸 | 谷氨酸 | 赖氨酸 AAA | 赖氨酸 | … | 精氨酸 | ||
Hb Luhe | … | 脯氨酸 | 谷氨酸 | 谷氨酸 | 谷氨酰胺 CAA | … | 精氨酸 | ||
Hb Contant Spring | … | 脯氨酸 | 谷氨酸 | 谷氨酸 | 赖氨酸 | … | 精氨酸 | 谷氨酰胺 CAA | 丙氨酸 |
回答下列问题:
(1)血红蛋白基因表达β珠蛋白时,经历了
(2)正常β珠蛋白的第6位氨基酸发生
(3)人群中出现不同种类的血红蛋白,说明基因突变具有
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【推荐2】血浆胆固醇含量过高在血管壁上形成沉积是引起心脑血管病变的重要原因。人体血浆中的胆固醇大部分与磷脂、载脂蛋白等物质结合形成低密度脂蛋白(LDL)等复合物进行运输,人体肝脏等组织细胞能摄取低密度脂蛋白(LDL)从而降低血浆中的胆固醇含量。下图为肝细胞摄取低密度脂蛋白(LDL)的相关过程,据图回答下列问题:
(1)胆固醇是细胞中重要的化合物,可以自膳食获取也可以由细胞合成,其合成场所是_______ (细胞器),其作用是______ 。
(2)LDL受体的化学本质是______ LDL与肝细胞表面的LDL受体结合、胞吞形成囊泡进入肝细胞、囊泡出芽重新释放LDL受体回到细胞膜(见图中A)。溶酶体内含有的大量________ 酶促使LDL降解。
(3)PCSK9是由PCSK9基因编码的一种蛋白质,主要由肝脏细胞产生(见图中B)。PCSK9与肝细胞表面的LDL受体结合,使LDL受体内吞后被溶酶体降解(见图中C)。请据此推测:PCSK9基因过度表达的患者血浆LDL水平______ (用“升高/降低/不变”作答)。根据上述资料结合自己的推理,写出1条针对此类患者的治疗思路:______ 。(写出1条思路或想法即可)
(1)胆固醇是细胞中重要的化合物,可以自膳食获取也可以由细胞合成,其合成场所是
(2)LDL受体的化学本质是
(3)PCSK9是由PCSK9基因编码的一种蛋白质,主要由肝脏细胞产生(见图中B)。PCSK9与肝细胞表面的LDL受体结合,使LDL受体内吞后被溶酶体降解(见图中C)。请据此推测:PCSK9基因过度表达的患者血浆LDL水平
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【推荐3】铁蛋白是细胞内储存多余Fe3+的蛋白,铁蛋白合成的调节与游离的Fe3+、铁调节蛋白、铁应答元件等有关。铁应答元件是位于铁蛋白mRNA起始密码子上游的特异性序列,能与铁调节蛋白发生特异性结合,阻遏铁蛋白的合成。当Fe3+浓度高时,铁调节蛋白由于结合Fe3+而丧失与铁应答元件的结合能力,核糖体能与铁蛋白mRNA一端结合,沿mRNA移动,遇到起始密码子后开始翻译(如下图所示)。请回答下列问题:
(1)图中甘氨酸的密码子是__________________ ,铁蛋白基因中决定“”的模板链碱基序列为________________________________________________________ 。
(2)Fe3+浓度低时,铁调节蛋白与铁应答元件结合干扰了______________________________ ,从而抑制了翻译的起始;Fe3+浓度高时,铁调节蛋白由于结合Fe3+而丧失与铁应答元件的结合能力,铁蛋白mRNA能够翻译。这种调节机制既可以避免________________ 对细胞的毒性影响,又可以减少__________________________________________________________ 。
(3)若铁蛋白由n个氨基酸组成,指导其合成的mRNA的碱基数远大于3n,主要原因是__________________________________________________________________________ 。
(1)图中甘氨酸的密码子是
(2)Fe3+浓度低时,铁调节蛋白与铁应答元件结合干扰了
(3)若铁蛋白由n个氨基酸组成,指导其合成的mRNA的碱基数远大于3n,主要原因是
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【推荐1】如图1表示利用生物技术制备抗X的单克隆抗体的过程;图2表示番茄和马铃薯植物细胞融合和再生植株的过程,请据图回答下面的问题。
I.请根据图1回答下列问题:
(1)在图中注射到小鼠体内的物质是________ 。融合后的细胞经过多次筛选才能获得理想的细胞,此类细胞的特点是________ 。
(2)制备单克隆抗体过程中要用到________ 和________ 技术。
II.请根据图2回答下列问题:
(3)图2中①②过程使用了________ 酶,以使植物原生质体相互分离,此处使用的溶液浓度较大,以保证植物细胞会发生________ ,以保护原生质体不被破坏。
(4)过程________ 属于脱分化,过程________ 属于再分化,细胞发生分化的根本原因是________ 。
(5)过程⑤⑥⑦的细胞工程技术是________ ,其培养时选用的材料通常是分生组织,原因是________ 。
(6)植物体细胞杂交的研究在________ 方面,取得了巨大突破。
I.请根据图1回答下列问题:
(1)在图中注射到小鼠体内的物质是
(2)制备单克隆抗体过程中要用到
II.请根据图2回答下列问题:
(3)图2中①②过程使用了
(4)过程
(5)过程⑤⑥⑦的细胞工程技术是
(6)植物体细胞杂交的研究在
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【推荐2】大米中铁含量极低,科研人员通过基因工程、细胞工程等现代生物技术,培育出了铁含量比普通水稻高60%的转基因水稻,改良了大米的营养品质。下图为培育转基因水稻过程示意图,其中①-⑥为过程,Eco RI、HindⅢ、Bam HI为限制酶。
(1)基因工程的核心是_________ ;获取目的基因的方法有___________ 。完成图中①过程需选用__________ 限制酶处理Ti质粒和含目的基因的DNA,原因是______________ 。完成图中①过程还需要DNA连接酶,DNA连接酶有_______ 两种类型。
(2)图中将铁合蛋白基因导入水稻体内采用的方法是________ 。在农杆菌的Ti质粒上存在______________ 片段,它具有可以整合到受体细胞染色体DNA上的特点,使目的基因进入植物细胞并稳定存在和表达。
(3)图中过程⑤属于_____________ ,④⑤⑥依据的理论基础是____________ 。
(1)基因工程的核心是
(2)图中将铁合蛋白基因导入水稻体内采用的方法是
(3)图中过程⑤属于
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解题方法
【推荐3】研究人员利用一种从某生物体内分离出的抗盐碱基因,通过基因工程、植物细胞工程等现代生物技术,培育出了抗盐碱大豆,使大豆能在盐碱地中正常生长,提高了大豆的产量。下图为培育流程,其中①~⑥为不同过程,其中AmpR为氨苄青霉素抗性基因,AluⅠ、SmaⅠ、HindⅢ和PstⅠ为限制酶。根据所学知识,回答下列问题:(1)不用限制酶AluⅠ切割抗盐碱基因的原因是_____ 。用限制酶切割抗盐碱基因和质粒时,选择SmaⅠ和PstⅠ比只选择PstⅠ的优点是_____ (答出两点)。
(2)研究人员用AluⅠ切割原质粒得到7.7kb的DNA片段,切割重组质粒得到3.0kb、4.8kb的DNA片段;SmaⅠ和PstⅠ切割原质粒得到2.3kb、5.4kb的DNA片段(注意:DNA片段大小与图中所画比例一致),则抗盐碱基因的长度为_____ 。
(3)利用PCR技术可获取大量目的基因,PCR反应体系中有两种引物,在复性时引物会结合到互补DNA链上,对两种引物的设计要求之一是_____ ;除引物外,PCR反应体系中还需要加入_____ (答出两点)。
(4)将目的基因导入植物细胞时,常采用农杆菌转化法,将目的基因插入Ti质粒中。利用Ti质粒,通过农杆菌转化法可将抗盐碱基因导入大豆愈伤组织细胞的理论依据是_____ 。
(5)为了筛选出成功导入重组质粒的农杆菌,1号培养基中需要加入的物质是_____ 。诱导组织细胞脱分化的是_____ 号培养基。图中④⑤⑥过程,所利用的生物技术的理论基础是_____ 。
(2)研究人员用AluⅠ切割原质粒得到7.7kb的DNA片段,切割重组质粒得到3.0kb、4.8kb的DNA片段;SmaⅠ和PstⅠ切割原质粒得到2.3kb、5.4kb的DNA片段(注意:DNA片段大小与图中所画比例一致),则抗盐碱基因的长度为
(3)利用PCR技术可获取大量目的基因,PCR反应体系中有两种引物,在复性时引物会结合到互补DNA链上,对两种引物的设计要求之一是
(4)将目的基因导入植物细胞时,常采用农杆菌转化法,将目的基因插入Ti质粒中。利用Ti质粒,通过农杆菌转化法可将抗盐碱基因导入大豆愈伤组织细胞的理论依据是
(5)为了筛选出成功导入重组质粒的农杆菌,1号培养基中需要加入的物质是
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【推荐1】植物新品种是经过人工培育或野生植物改良的新品种,具有新颖性、特异性、一致性和稳定性。科研人员对新品种的选育过程在不断进行,为获得高产、稳产等农作物优良性状不断付出努力。回答下列问题:
[实验一]
为研究遮阴对棉花植株光合作用特性和叶绿素含量的影响,研究人员设置了如下实验:CK、CK'选用中棉19号,1、1'和2、2'分别选用“春矮早”和“9418”棉花品种,在自然光照、遮阴(50%自然光强)条件分别进行实验,实验结果如下表。
(1)与对照组相比,自然光照下,实验组棉叶中的叶绿素含量_____ (填“较高”或“较低”)。
(2)三个品种的棉花植株中,光合速率最大的是_____ 。除光合速率指标外,其他指标也支持上述结论,表现为_____ 。
(3)相同条件下,三个棉花品种的光合特性不同,本质上是由_____ 决定的。干旱条件下,喷洒适宜浓度的ABA有利于棉花植株抗旱,原理是_____ 。
[实验二]
通过转基因技术将蓝豌豆的花青素葡糖基转移酶基因(M基因)与风铃草类黄酮羟化酶基因(N基因)一起转到菊花中,菊花可开蓝花。
(4)将M基因和N基因构建融合基因(MN)。已知MN基因的单链核苷酸序列(虚线处省略了部分序列)为5'-GGTCAACAA……TGAAGTTTA-3',利用PCR扩增MN基因时,所需的引物序列(DNA引物,9个核苷酸)为_____ 。若扩增n次,理论上需要_____ 个引物。
(5)将MN基因插入Ti质粒构建重组载体时,所需要的两种酶是_____ 。借助农杆菌转化法能将MN基因成功导入菊花细胞的原因是_____ 。
(6)检测MN基因是否成功表达出融合蛋白的方法是_____ 。转基因菊花细胞经过脱分化形成愈伤组织,再分化形成芽和根,此进程受培养基中细胞分裂素和生长素的_____ 的影响。
[实验一]
为研究遮阴对棉花植株光合作用特性和叶绿素含量的影响,研究人员设置了如下实验:CK、CK'选用中棉19号,1、1'和2、2'分别选用“春矮早”和“9418”棉花品种,在自然光照、遮阴(50%自然光强)条件分别进行实验,实验结果如下表。
处理 | 光合速率(μmol/m2·s) | 胞间CO2浓度(μmol/mol) | 气孔阻力相对值 | 叶绿素含量(mg/dm2) | |
正常 | CK | 16.95 | 284.4 | 0.33 | 4.4 |
1 | 28.20 | 280.9 | 0.27 | 4.1 | |
2 | 16.37 | 280.6 | 0.46 | 4.5 | |
遮阴 | CK' | 17.13 | 273.6 | 0.54 | 3.0 |
1' | 20.38 | 273.5 | 0.39 | 3.4 | |
2' | 16.95 | 273.3 | 0.51 | 3.5 |
(2)三个品种的棉花植株中,光合速率最大的是
(3)相同条件下,三个棉花品种的光合特性不同,本质上是由
[实验二]
通过转基因技术将蓝豌豆的花青素葡糖基转移酶基因(M基因)与风铃草类黄酮羟化酶基因(N基因)一起转到菊花中,菊花可开蓝花。
(4)将M基因和N基因构建融合基因(MN)。已知MN基因的单链核苷酸序列(虚线处省略了部分序列)为5'-GGTCAACAA……TGAAGTTTA-3',利用PCR扩增MN基因时,所需的引物序列(DNA引物,9个核苷酸)为
(5)将MN基因插入Ti质粒构建重组载体时,所需要的两种酶是
(6)检测MN基因是否成功表达出融合蛋白的方法是
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【推荐2】面对新冠疫情,我国一直坚持严格防控措施,“零容忍”彰显人民立场制度优势。通过新冠病毒的检测,以阻断传播途径是阻止新冠病毒传播的有效途径。新冠病毒的检测方法有核酸检测和免疫学检测等。回答下面的问题:
(1)核酸检测是新冠病毒感染的确诊依据。目前采用RT-PCR技术(逆转录荧光PCR技术),其原理是:在PCR反应体系中加入引物的同时,加入与某条模板链互补的荧光探针,当Taq酶催化子链延伸至探针处会水解探针,使荧光监测系统接受到荧光信号,即每扩增一次,就有一个荧光分子生成(如下图)。PCR每个循环包括_______ 3个阶段。从理论上推测,PCR扩增目的基因至第四轮循环产物中含有引物1的DNA片段所占的比例为___________ 。
中国疾控中心公布了针对新冠病毒核酸不同序列设计的引物,其中针对S蛋白基因的一段引物1为GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT,能否依据此序列设计出另一段引物2的序列?__________ 。如果待测样本中没有检测出荧光,初步推测样本中__________ 新冠病毒。
(2)免疫学检测包括抗体检测和抗原检测。2022年3月11日,《新冠病毒抗原检测应用方案(试行)》发布,2022年3月18日,山东康华生物&青岛汉唐生物研制的新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原检测试剂盒(胶体金法)获得国家药监局批准正式上市。其原理如下图所示:待测液体加到样本垫的A端,B处含有游离(不与垫子结合)的过量的与胶体金(聚集后呈红色)结合的抗体1,C处垫子上固定有抗体2,抗体1和抗体2可与病毒表面同一抗原的不同位点发生特异性结合,D处垫子上固定有抗体1的抗体。若,
若_________________________ ,则为阳性;若待测样本中不含新冠病毒,显色结果出现______ ,结果为阴性。若检测结果为阳性,试剂盒上共发生了_____ 次“抗原-抗体”的特异性结合。
(3)以S蛋白作为抗原制备单克隆抗体的具体步骤为:将减毒新冠病毒多次注射到小鼠体内,取其脾脏的___________ 细胞,与骨髓瘤细胞加入___________ (天然成分)共同培养,再加入___________ 使其融合,最后经过筛选和克隆化培养得到单克隆抗体。
(1)核酸检测是新冠病毒感染的确诊依据。目前采用RT-PCR技术(逆转录荧光PCR技术),其原理是:在PCR反应体系中加入引物的同时,加入与某条模板链互补的荧光探针,当Taq酶催化子链延伸至探针处会水解探针,使荧光监测系统接受到荧光信号,即每扩增一次,就有一个荧光分子生成(如下图)。PCR每个循环包括
中国疾控中心公布了针对新冠病毒核酸不同序列设计的引物,其中针对S蛋白基因的一段引物1为GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT,能否依据此序列设计出另一段引物2的序列?
(2)免疫学检测包括抗体检测和抗原检测。2022年3月11日,《新冠病毒抗原检测应用方案(试行)》发布,2022年3月18日,山东康华生物&青岛汉唐生物研制的新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原检测试剂盒(胶体金法)获得国家药监局批准正式上市。其原理如下图所示:待测液体加到样本垫的A端,B处含有游离(不与垫子结合)的过量的与胶体金(聚集后呈红色)结合的抗体1,C处垫子上固定有抗体2,抗体1和抗体2可与病毒表面同一抗原的不同位点发生特异性结合,D处垫子上固定有抗体1的抗体。若,
若
(3)以S蛋白作为抗原制备单克隆抗体的具体步骤为:将减毒新冠病毒多次注射到小鼠体内,取其脾脏的
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【推荐3】PCR(多聚酶链式反应)技术是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术,下图表示PCR的反应过程,请据图分析回答下列问题:
(1)A过程高温使DNA变性解旋,对该过程的原理叙述正确的是( )
a.该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键 b.该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键
c.该过程高温使双链DNA解旋变为单链 d.该过程与人体细胞的过程完全相同
(2)C过程要用到的酶是耐高温的。这种酶在高温下仍保持活性,因此在PCR扩增时可以________ 加入(填一次性或多次)。PCR反应除提供耐高温的_______ 酶外,还需要满足的基本条件有:在一定的缓冲溶液中进行、以DNA______ 条链做模板、与模板链相结合的两种_______ 、四种_______ 为原料,通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
(3)如果把模板DNA的两条链用15N标记,游离的脱氧核苷酸不做标记,控制“95℃-55℃-72℃”温度循环3次,则在形成的子代DNA中含有15N标记的DNA占_________ 。
(1)A过程高温使DNA变性解旋,对该过程的原理叙述正确的是
a.该过程用到耐高温的解旋酶破坏氢键 b.该过程用到限制酶破坏磷酸二酯键
c.该过程高温使双链DNA解旋变为单链 d.该过程与人体细胞的过程完全相同
(2)C过程要用到的酶是耐高温的。这种酶在高温下仍保持活性,因此在PCR扩增时可以
(3)如果把模板DNA的两条链用15N标记,游离的脱氧核苷酸不做标记,控制“95℃-55℃-72℃”温度循环3次,则在形成的子代DNA中含有15N标记的DNA占
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【推荐1】利用基因工程技术培育马铃薯新品种,目前已经取得丰硕成果。请根据教材所学知识回答下列问题:
(1)马铃薯是双子叶植物,常用_____________ (方法)将目的基因导入马铃薯受体细胞中。构建好的基因表达载体基本结构包括目的基因、标记基因、_________ 、_________ 、__________ 等五部分。
(2)科学家还培育出抗除草剂的转基因马铃薯,其设计方法:修饰除草剂作用的靶蛋白,使其对除草剂_________ (填“敏感”或“不敏感”),或使靶蛋白过量表达,植物吸收除草剂后仍能____________ 。
(3)马铃薯易患多种疾病,导致其产量不高。通过导入抗病基因并使其表达可以提高马钤薯产量,基因工程中使用最多的抗病基因是____________ 和病毒的复制酶基因。
(4)将目的基因导入受体细胞后,还需对转基因植物进行_________________ 。
(1)马铃薯是双子叶植物,常用
(2)科学家还培育出抗除草剂的转基因马铃薯,其设计方法:修饰除草剂作用的靶蛋白,使其对除草剂
(3)马铃薯易患多种疾病,导致其产量不高。通过导入抗病基因并使其表达可以提高马钤薯产量,基因工程中使用最多的抗病基因是
(4)将目的基因导入受体细胞后,还需对转基因植物进行
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【推荐2】请回答下列有关胚胎工程和基因工程等方面的问题:
(1)利用基因工程可以获得转基因羊。若要使获得的转基因羊分泌的乳汁中含有人抗凝血酶III蛋白,构建基因表达载体时必须把目的基因与_________________ 基因的______________ 结合,使用该启动子的原因是_____________________________ 。
(2)应用PCR扩增目的基因时,需要在基因组数据库中查询目的基因的________________ 序列,以便合成引物。PCR过程第一轮循环的模板是________________ 。
(3)目前常用的措施是将该基因表达载体导入羊的________________ 细胞,导入方法是_____________________ 。
(1)利用基因工程可以获得转基因羊。若要使获得的转基因羊分泌的乳汁中含有人抗凝血酶III蛋白,构建基因表达载体时必须把目的基因与
(2)应用PCR扩增目的基因时,需要在基因组数据库中查询目的基因的
(3)目前常用的措施是将该基因表达载体导入羊的
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【推荐3】人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓,是心梗和脑血栓的急救药。通过基因工程技术可以大量制备基因工程药物t-PA。
(1)研究人员采用PCR技术可以获得大量t-PA基因,PCR的原理是______ 。此外,大量获得t-PA基因的方法还有______ (答出两种)。
(2)高质量的DNA模板是成功扩增目的基因的前提条件之一,在制备DNA模板时,可以用高温处理的方法去除蛋白质,原因是____________ 。
(3)研究表明,为心梗患者注射大量t-PA会诱发颅内出血,其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高,若将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸,能显著降低出血副作用。(注:如图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒,新霉素为抗生素。)请回答下列问题:
①改造t-PA蛋白你认为应该直接对蛋白质进行改造,还是对天然的t-PA基因进行序列改造,原因是?______________________________ 。
②如图所示,需选用限制酶XmaⅠ和______ 切开质粒pCLY11,才能与t-PA改良基因高效连接。在基因工程的基本操作过程中,最核心的步骤是基因表达载体的构建,其目的是______ 。
③应该选择不含______ 的大肠杆菌作为受体细胞,以便在加入新霉素的选择培养基中筛选出导入质粒的大肠杆菌。筛选出的大肠杆菌菌落并非都是目的菌株,这时选择______ 色的菌落,进一步培养、检测和鉴定,以选育出能生产改良t-PA蛋白的工程菌株。
(1)研究人员采用PCR技术可以获得大量t-PA基因,PCR的原理是
(2)高质量的DNA模板是成功扩增目的基因的前提条件之一,在制备DNA模板时,可以用高温处理的方法去除蛋白质,原因是
(3)研究表明,为心梗患者注射大量t-PA会诱发颅内出血,其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高,若将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸,能显著降低出血副作用。(注:如图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒,新霉素为抗生素。)请回答下列问题:
①改造t-PA蛋白你认为应该直接对蛋白质进行改造,还是对天然的t-PA基因进行序列改造,原因是?
②如图所示,需选用限制酶XmaⅠ和
③应该选择不含
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