【推荐1】甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢含可溶性糖量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更富有生产应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示，P蛋白在玉米株系的表达量如图2所示。回答下列问题：

(1)强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被________识别并结合，驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用________酶组合，将片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。TDNA在该实验中的作用是________。
(2)将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中需加入________进行筛选，筛选出的愈伤组织 ______形成丛芽，最终获得多个玉米株系a₁、a₂、a₃、a₄。通过对a₁、a₂、a₃、a₄四株甜玉米株系的蛋白质表达量进行测定结果如图2，其中a₄株系P蛋白表达量较低的原因可能是________。
(3)为了进一步提高甜玉米中淀粉的含量，科研人员提出通过降低淀粉酶合成有关基因的表达实现生产目标。研究人员研究发现吗啉反义寡核苷酸是一种RNA剪接抑制剂，将其注入植物细胞内会使基因表达受阻，科研人员将吗啉反义寡核苷酸导入玉米的受精卵中起到明显效果。针对它的具体作用，科研人员提出以下假说：
假说1：导致RNA前体上内含子1的对应序列不能被剪。
假说2：导致RNA前体上内含子1和外显子2的对应序列同时被剪切。
为了验证上述假说，分别从受精卵发育后3天的实验组和对照组胚细胞中提取______，逆转录形成______。
(4)在PCR反应体系中，需加入引物、模板基因、缓冲液、Mg^2＋等外，还需加入______等。PCR的反应程序为：94℃ 3min；94℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 50s，30个循环。在循环之前的94℃ 3min处理为预变性；循环中72℃处理的目的是_________________。

【推荐2】人乳铁蛋白(hLF)对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如下图。图中Ase I、Nhe I、Sal I、BamH I代表相关限制酶切点，neo^r为新霉素抗性基因，BLG基因为B乳球蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答下列问题。

(1)过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT－PCR，是因为_______________________。荧光RT﹣PCR技术所用的试剂盒中通常都应该含有________、Taq酶、荧光标记的核酸探针、引物、dNTP、缓冲体系。
(2)在RT—PCR过程中，加入的引物需在________端添加_____________两种限制酶的识别序列，便于hLF基因插入pEB中。利用 RT－PCR 技术获取的目的基因________(填“能”或“不能”)在物种之间交流；该技术还可用于对某些微量 RNA 病毒的检测，可提高检测的灵敏度，原因是_____________________________。若利用PCR技术扩增某基因片段时消耗了126个引物分子，则该过程扩增了________次。
(3)过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是__________________________________；该过程中，两个基因共用的调控元件是BLG基因的__________。
(4)PEBL质粒导入受体细胞的方法是________，依据的主要原理是______________________。
(5)将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中________，以筛选出转染成功的细胞。该过程________(填“能”或“不能”)区分普通质粒或重组质粒，接下来还可采用________技术检验基因是否成功转录。

【推荐3】如图为利用PCR技术检测受检人是否携带HIV(属逆转录病毒)的示意图。请回答：

(1)组成HIV的遗传物质的单体是________。HIV携带者T细胞的核DNA能指导合成HIV的蛋白质，原因是______________________。
(2)设计图中所示的引物时，应满足以下要求：
①引物自身不能存在互补配对序列，原因是避免引物自身通过折叠形成双链区；
②引物之间不能存在________，原因是避免两引物结合成双链；
③______________________________。
(3)在PCR反应体系中，除具备缓冲液、模板DNA分子和引物外，还应有________(填序号)。
①Taq酶　②dNTP(dCTP、dATP、dGTP和dTTP)　③四种碱基　④ATP　⑤氨基酸
(4)利用基因工程方法制备HIV的某蛋白(目的蛋白)时，需使用DNA连接酶来构建基因表达载体。常用DNA连接酶中既能连接黏性末端又能连接平末端的是________DNA连接酶，DNA连接酶催化形成的化学键是________。基因表达载体必须有RNA聚合酶识别和结合的部位，该部位称为________。

【推荐1】I.供体细胞的分化状态和表观遗传修饰模式是影响体细胞核移植胚胎发育的重要因素。为研究供体细胞RNAmA修饰（即RNA某位点的甲基化）水平对猪核移植胚胎发育的影响，研究者进行系列实验。
(1)核移植的受体是____________________细胞，核移植后的重构胚发育至____________________阶段可利用____________________技术转移到代孕母体子宫内以获得子代个体，从早期胚胎中分离获得的具有自我更新和分化潜能的____________________可用于医学研究。
(2)RNAm⁶A修饰可通过提高mRNA结构稳定性来影响早期胚胎发育。猪骨髓间充质干细胞（甲组）属于多能干细胞，猪胎儿成纤维细胞（乙组）则是处于分化终端的体细胞。研究者比较了两细胞内RNAm⁶A修饰水平及其作为核供体时重构胚的发育效率，结果如图1、2。结果表明，核供体细胞的分化程度越高，___________________越低。

II.兰花人工种子由人工种皮、原球茎和人工胚乳构成。原球茎是由胚性细胞组成、形态类似球茎的结构，可发育成完整植株，人工胚乳可调控原球茎的休眠，并为原球茎的发育提供营养成分和激素。回答下列问题：
(3)从盆兰花获取茎尖，对其进行____________________处理后接种于培养基，茎尖通过_______后生长为原球茎。原球茎在发芽培养基上可很快长出幼叶，然后在生根培养基中形成完整植株。
(4)将原球茎切成小块，转入增殖培养基进行继续培养，可以得到大量原球茎，实现兰花的快速繁殖。在增殖培养基中添加椰子水，原球茎会长得更饱满。不同成熟度椰子的椰子水对原球茎生长的促进效果不同，推测原因是不同成熟度椰子的椰子水中____________________和____________________的含量存在差异。
(5)某实验研究发现，与添加用过滤除菌法处理的椰子水（A组）相比，人工胚乳中添加用湿热灭菌法处理的椰子水（B组）使原球茎的休眠时间变短。研究人员推测B组原球茎休眠时间短的原因是脱落酸被破坏。作出上述推测的依据是：椰子水中有脱落酸；____________________;脱落酸不耐高温。

【推荐2】白细胞介素-3（IL-3）是效应T细胞产生的一种淋巴因子，可用于治疗癌症和骨髓造血机能不全等疾病。用基因工程、动物细胞工程可大量生产IL3，以满足临床上的大量需求。回答下列问题:
(1)利用基因工程生产IL-3，切割运载体时常选用能产生不同黏性末端的限制酶，目的是防止________。构建的基因表达载体必须具有IL-3基因以及__________。
(2)为检测IL-3基因是否转录出了mRNA，可用标记的IL -3基因片段作探针与mRNA杂交该杂交技术称为_____。为检测IL-3基因转承的mRNA是否翻译成蛋白质，常用____技术。
(3)利用动物细胞工程生产IL-3时，在化学试剂_____的作用下，效应T细胞可与骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，体外培养时通常需在培养液中添加_____等一些天然成分。经过多次筛选，获得理想的杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞的特点是_________。

【推荐3】人的血清白蛋白（HSA）在临床上需求量很大，通常从人血中提取。但由于艾滋病病毒（HIV）等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重。图一是以基因工程技术获取HSA的两条途径，其中报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色。图二为HSA基因两侧的核苷酸序列。图三为相关限制酶的识别序列和切割位点。据图回答下列问题：


(1)基因工程的核心步骤是___________，完成过程②所需要技术手段是___________。
(2)采用PCR技术扩增HSA基因，根据其两端序列，则需要设计的引物序列是___________ 。
(3)依据图一、图二和图三分析，成功建构的重组质粒用酶C处理将得到______个DNA片段。
(4)图一过程①中需将植物细胞与___________混合后共同培养，旨在让___________整合到植物细胞染色体DNA上，除尽农杆菌后，还须转接到含___________的培养基上筛选出转化的植物细胞。
(5)过程④前对卵细胞供体母牛进行___________处理。过程通常将受精卵培养至___________阶段。过程⑤鉴定胚胎性别时常取___________细胞做DNA分析。
(6)为检测HSA基因的表达情况，可提取受体细胞的_________，用抗血清白蛋白的抗体进行杂交实验。

【推荐1】现代生物技术在改变着人类的生活，阅读下面材料完成相关问题：
材料一：日前，英国研究人员利用最新的3D打印技术，“打印”出了活体胚胎干细胞。实验证明，这些干细胞仍保持着人体胚胎干细胞的正常分化能力。科学家使用活体卵子及皮肤成纤维细胞，在实验室已成功克隆出了数个人体胚胎，进而可以开发出有研究价值的胚胎干细胞。请回答：
（1）自然状况下的胚胎干细胞是由哺乳动物的___________中分离出来的一类细胞。
（2）上述过程中要应用到的动物细胞工程技术有_______________________。
（3）将胚胎干细胞用于检测有毒物质是否引起了基因突变，在分子水平上需要采用____技术。
（4）胚胎移植是否成功，与供体和受体的生理状况有关。在胚胎移植操作中，应对供体和受体母畜进行_______处理才能使胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致。
材料二：不断恶化的生态环境，正在对人类的生存和发展构成严重的威胁。运用生态工程可对遭到破坏的生态环境进行修复和重建。
（5）生态工程建设的目的是遵循自然界________的规律，充分发挥资源的生产潜力，防止___________，达到生态效益与经济效益的同步发展。生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理中的3项：_______________________________。

【推荐2】如图为人体内的造血干细胞增殖分化形成过程，其中microRNA （miRNA）是一类崭新的调控性非编码小分子RNA。

（1）图中造血干细胞属于_____干细胞，它最初来源于_____。
（2）图中所示的miRNA（X）和miRNA（1﹣4）的作用分别是_____和_____。
（3）据研究造血干细胞的增殖和分化除受到图中显示的因子调控以外，还受到其他基因的调控．其中某调控基因从未成熟的造血干细胞中获取并在体外扩增出来，该技术称为_____（中文）。
（4）如图所示，人体内的造血干细胞可不断分裂分化成红细胞、血小板、碱性粒细胞、单核粒细胞等，下列有关叙述不正确的是_____。
A．粒细胞已完全失去继续分化的能力
B．血小板、粒细胞的基因选择性表达产物完全不同
C．细胞分化导致细胞内的遗传物质发生变化
D．分化的细胞不再进行细胞的分裂和生长
（5）正常人体内的造血干细胞能分化产生各种血细胞．在体外某些因素的诱导下，却可以分化为神经细胞和肝细胞．其根本原因是这些造血干细胞_____。
A．旺盛的分裂能力             B．能合成神经细胞或肝细胞需要的蛋白质
C．已经进行了分化             D．具有与受精卵相同的全套遗传基因
（6）从上述造血干细胞增殖分化过程可见，细胞核的功能可概括为_____。

【推荐3】生物工程在人类遗传病的研究和治疗有较大的突破。阅读下列资料，回答相应问题。
资料一 通过转入特定基因可将体细胞诱导形成多能干细胞（iPS细胞），可以产生各种类型的体细胞。下图是应用iPS细胞技术治疗镰刀型细胞贫血症的技术流程，请回答：

（1）过程①是体外培养由患者身体分离的体细胞，需要在配制的______培养基中，加入一定量的血清、血浆等天然成分。除对上述培养液进行无菌处理，通常还要加入一定量的抗生素，其目的是_________________________。
（2）过程②中，科研人员首先要利用PCR技术，把所需的c-Myc（c-Myc属于Myc家族的原癌基因）等四种目的基因扩增，然后将目的基因与逆转录病毒结合，以构建________，然后导入人体的体细胞，诱导形成iPS细胞，并在_______培养箱中依次进行_________培养、_________培养，获得iPS细胞系。
（3）科研人员在iPS细胞中，用健康的基因取代了镰刀型细胞贫血症的致病基因，并在加入______________的培养液中培养，使其定向分化成造血干细胞，移植入患者体内，使患者能够产生正常的红细胞。
资料二 人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。

（4）子代大鼠如果________和_________，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。
（5）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是______、早期胚胎培养和胚胎移植。

【推荐1】下面是以小鼠为对象进行的各项研究工作，请分析回答问题。
(1)在小鼠细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面______时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的______。此时，瓶壁上形成细胞层数是______。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是______。
(2)如果体外受精后，在精核与卵核融合之前，用微型吸管除雄核，再用细胞松弛素B处理（作用类似于用秋水仙素处理植物细胞），处理后的受精卵可发育成小鼠。这种方法在动物新品种选育中的显著优点是____。
(3)为使外源基因在后代中长期保持，可将转基因小鼠体细胞的______转入______细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体，该技术称为______。
(4)在细胞培养过程中，通常在______条件下保存细胞，因为在这种条件下，细胞中______的活性降低，细胞的代谢速率降低。

【推荐3】近年来，现代生物科技在生产、生活、医学领域有广泛应用。回答相关问题。
（1）我国科学家发明了转基因抗虫棉。科学家所构建的Ti质粒上具有________，它能把抗虫基因整合到受体细胞________上。我国科学家还独创了________法将抗虫基因导入受体细胞。
（2）我国科学家先后通过猴胚胎细胞和体细胞获得克隆猴。克隆猴与供体猴的遗传物质________（填“完全相同”或“基本相同”或“完全不同”）。体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是：________。
（3）畜牧业胚胎工程已产业化。胚胎分割所需要的主要仪器设备为________显微镜和显微操作仪。胚胎移植程序中要对供、受体母畜进行同期发情处理，目的是：________。