苯酚是工业生产排放的有毒污染物质,自然界中存在着降解苯酚的微生物,某工厂产生的废水中含有苯酚,为了降解废水中的苯酚,研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株,筛选的主要步骤如下图所示,图中①为土壤样品。请回答下列问题:
(1)微生物培养前,需对培养基和培养皿进行消毒处理。培养皿常用的两种灭菌方法是________ 、___________ ;为了减少灭菌后器皿被污染,灭菌前应该____________ 。
(2)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________________ 作为碳源,如果要测定②中活细菌数量,常采用_________________ 法。用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组?________ 。为什么?______________________ 。
(3)若分别取0.1mL已稀释103倍的样液分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养,培养基记录到的菌落数分别为162、154、157、171,则每毫升原样液中只能降解利用苯酚的细菌数为______________ 。测定的活菌数比实际活菌数低,原因是_________________ 。
(1)微生物培养前,需对培养基和培养皿进行消毒处理。培养皿常用的两种灭菌方法是
(2)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入
(3)若分别取0.1mL已稀释103倍的样液分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养,培养基记录到的菌落数分别为162、154、157、171,则每毫升原样液中只能降解利用苯酚的细菌数为
更新时间:2023-04-13 18:09:14
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解题方法
【推荐1】生活在土壤中的硝化细菌能将土壤中的氨(NH3)一步步氧化为硝酸,硝化细菌能利用这个过程中化学反应释放出的化学能将二氧化碳和水合成为糖类。下图为从土壤中分离硝化细菌的过程示意图。请回答下列问题:(1)生态系统中的碳循环在生物群落内部以_________ 的形式进行传递,能加速碳循环的生态系统成分是_________ ,氨(NH3)氧化为硝酸的过程中释放出的化学能被硝化细菌固定在它所制造的有机物中,这部分能量可用于硝化细菌的_________ 和_________ 。
(2)实验室对培养基灭菌常用的方法是_________ ,倒平板操作中,待平板冷凝后通常需要_________ ,以免造成平板污染。
(3)固体培养基和液体培养基的主要区别是液体培养基中添加了_________ ;调节pH应在_________ (填“灭菌前”或“灭菌后”)进行。
(4)图1所示的微生物培养方法为_________ ,应选择的工具是图2中的_________ 。接种过程中使用的接种工具应采用_________ 灭菌;该种计数方法结果往往小于实际细菌数的原因是_________ 。
(5)理想情况下,取最终土壤稀释液0.1ml进行涂布培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3个培养皿,菌落数分别为65、63、64,则可以推测每毫升土样中所含硝化细菌数为_________ 。
(2)实验室对培养基灭菌常用的方法是
(3)固体培养基和液体培养基的主要区别是液体培养基中添加了
(4)图1所示的微生物培养方法为
(5)理想情况下,取最终土壤稀释液0.1ml进行涂布培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。若用该方法培养设置了3个培养皿,菌落数分别为65、63、64,则可以推测每毫升土样中所含硝化细菌数为
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【推荐2】将红色荧光基因(Cherry)转入大肠杆菌中,经过制备培养基、培养、筛选、纯化等过程,获得红色荧光大肠杆菌,在水质监测、环境保护等方面有重要用途。转化成功的大肠杆菌在含有氨苄青霉素的LB培养基中能存活,LB培养基的组成成分如下表(1L),回答下列问题:
(1)上表中为大肠杆菌提供氮源的物质是__________ ,NaCl在其中的作用是__________ ,LB培养基在接种之前采用的灭菌方法是__________ 。
(2)在制备LB培养基过程中,需要添加氨苄青霉素,制成__________ 培养基。用__________ 方法将菌种接种到该培养基表面,使菌液分布均匀。
(3)在37℃条件下培养一段时间,挑取__________ (填“黑色”或“红色”)菌落,然后采用__________ 方法接种到培养基上进行纯化,整个操作过程需要在酒精灯火焰旁进行,目的是__________ 。
酵母提取物 | 胰化卵白胨 | NaCl | 琼脂粉 | pH |
5g | 10g | 10g | 15g | 7.0 |
(1)上表中为大肠杆菌提供氮源的物质是
(2)在制备LB培养基过程中,需要添加氨苄青霉素,制成
(3)在37℃条件下培养一段时间,挑取
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【推荐3】在土壤中存在多种自生固氮菌,它们对增加土壤中的氮素有重要意义。某实验小组试图从土壤中分离自生固氮菌,并制成菌肥施入土壤中增加土壤肥力。实验流程大致如下图所示。
1.图4中的培养基成分如下表:
此培养基的特点是______________,原因是____________________________
________________________________________________________________。
2.从功能上看,此培养基属于__________培养基。从形态上看,此培养基属于固体培养基,有利于__________________________________。
3.因为琼脂中常含有氮,因此使用前需要用自来水流水冲洗几天,再用________________浸泡,洗涤几次,以除去其中的氮。
4.实验步骤3在超净台上,将接种环在____________上灭菌冷却后,才能蘸取少许稀释液用点接法接种在培养基表面,也可采用_______法接种。接种后必须将培养皿_______________培养,以免冷凝水滴落。
5.实验的培养时间不宜过长,否则____________________________________
____________________________。
6.小组成员用放射线处理分离得到的固氮菌获得两个突变株A和B,然后对A和B进行实验,结果如下表。
(1)突变株A不能在一般培养基上生长的直接原因是_____________________。
(2)将突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中却能正常生长,那么最可
能原因是
。
1.图4中的培养基成分如下表:
C6H12O6 | KH2PO4 | MgSO4 | NaCl | CaSO4 | 蒸馏水 | 琼脂 | pH |
10g | 0.2g | 0.2g | 0.2g | 5g | 1000mL | 10g | 7.0 |
此培养基的特点是______________,原因是____________________________
________________________________________________________________。
2.从功能上看,此培养基属于__________培养基。从形态上看,此培养基属于固体培养基,有利于__________________________________。
3.因为琼脂中常含有氮,因此使用前需要用自来水流水冲洗几天,再用________________浸泡,洗涤几次,以除去其中的氮。
4.实验步骤3在超净台上,将接种环在____________上灭菌冷却后,才能蘸取少许稀释液用点接法接种在培养基表面,也可采用_______法接种。接种后必须将培养皿_______________培养,以免冷凝水滴落。
5.实验的培养时间不宜过长,否则____________________________________
____________________________。
6.小组成员用放射线处理分离得到的固氮菌获得两个突变株A和B,然后对A和B进行实验,结果如下表。
接种的菌种 | 一般培养基 | 实验处理及结果 |
A | 不生长 | 添加营养物甲,能生长 |
B | 不生长 | 添加营养物乙,能生长 |
A+B | 能生长 | 不添加营养物甲、乙就能生长 |
(1)突变株A不能在一般培养基上生长的直接原因是_____________________。
(2)将突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中却能正常生长,那么最可
能原因是
。
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【推荐1】315老坛酸菜的曝光再次引发人们对食品安全的关注。菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志,也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对送检样品进行卫生学评估提供证据。如图是某样品培养简化流程图,请分析回答下列问题:
(1)培养基配制,基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶化、调节pH、____ 法灭菌等。
(2)玻璃涂布器一般是在酒精中浸泡,然后在酒精灯火焰上引燃灭菌,不用灼烧灭菌的原因是________________ 。
(3)本实验用菌落计数的原理是基于_________ ,运 用这种方法统计的结果往往较实际值偏小,原因是_________________________ 。
(4)通常对获得的纯菌种可以依据菌落的_________ 等菌落特征对微生物进行初步鉴定(或分类)。
(5)用菌落计数的具体培养结果如下表。选取菌落数30~300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当只有一个稀释梯度的平均菌落数符合此范围,以该培养皿菌落数X稀释倍数报告。当有两个梯度菌落值在30~300之间,报告结果由二者菌落数比值决定,若比值不大于2,则取平均数;若比值大于2,则报告稀释度较低(稀释次数越多,稀释度越高)的培养皿菌落数。例次2、3中“?”处的菌落总数分别为__________________ 。
(1)培养基配制,基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶化、调节pH、
(2)玻璃涂布器一般是在酒精中浸泡,然后在酒精灯火焰上引燃灭菌,不用灼烧灭菌的原因是
(3)本实验用菌落计数的原理是基于
(4)通常对获得的纯菌种可以依据菌落的
(5)用菌落计数的具体培养结果如下表。选取菌落数30~300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当只有一个稀释梯度的平均菌落数符合此范围,以该培养皿菌落数X稀释倍数报告。当有两个梯度菌落值在30~300之间,报告结果由二者菌落数比值决定,若比值不大于2,则取平均数;若比值大于2,则报告稀释度较低(稀释次数越多,稀释度越高)的培养皿菌落数。例次2、3中“?”处的菌落总数分别为
例次 | 不同稀释度平均菌落数 | 两稀释度菌 落数之比 | 菌落总数 /[CFU/mL(g)] | ||
10-1 | 10-2 | 10-3 | |||
1 | 1365 | 164 | 20 | - | 16400 |
2 | 2760 | 293 | 46 | 1.6 | ? |
3 | 2890 | 269 | 60 | 2.2 | ? |
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【推荐2】水污染是全球性的环境问题,微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物,PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA,PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物,当PVA被分解时蓝绿色复合物消失,形成白色透明斑,请回答下列问题:
(1)上表是筛选出能高效分解PVA的细菌的培养基配方,从物理性质来看,该培养基为__________ 培养基,表中X物质最可能为_______________ 。实验中还应设置完全培养液对照组,将菌液稀释相同的倍数,选择培养基上生长的菌落数目应明显__________ (填“多于”或“少于”)对照组培养基上的数目,从而说明选择培养基具有筛选作用。
(2)要测定土壤稀释液中微生物的数目,可在显微镜下用___________ 计数板直接计数。若将100mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释105倍后,取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面,测得菌落数的平均值为160个,空白对照组平板上未出现菌落,则100mL原菌液中有PVA分解菌_______ 个,该方法的测量值与实际值相比一般会_______ (填“偏大”、“偏小”或“相等”),原因是____________ 。
(3)要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌,培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入_________________ 用于鉴别PVA分解菌。
成分 | MgSO4 | 蛋白质 | X物质 | 水 | 琼脂 |
用量 | 5g | 10g | 1000mL | 7g | 20g |
(1)上表是筛选出能高效分解PVA的细菌的培养基配方,从物理性质来看,该培养基为
(2)要测定土壤稀释液中微生物的数目,可在显微镜下用
(3)要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌,培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入
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【推荐3】研究发现,黄粉虫可以塑料(主要成分为聚苯乙烯,简称PS)为食,研究人员从其肠道内分离出了能够降解PS的细菌,为解决全球白色污染提供了解决方案。某研究小组尝试在实验室分离纯化能高效降解PS的细菌(目的菌),并提取检测相关降解酶的活力,其过程如图所示。回答下列问题:
Ⅰ号培养基:水、无机盐、氮源、物质X
Ⅱ号培养基;水、无机盐、氮源、物质X、物质Y
(1)物质X和物质Y分别是______ 和______ 。
(2)除了图中所示方法外,还可以通过______ 法在Ⅱ号培养基上纯化降解PS塑料的微生物菌群,可根据菌落的______ (填出两点)特征挑选出特定的再进行发酵培养。
(3)为测定PS降解酶降解塑料的能力,需要先将该酶分离出来,常用凝胶色谱法,凝胶色谱法分离PS降解酶的基本过程:样品加入后进行洗脱,而后收集PS降解酶。最后收集到的蛋白质样品与刚洗脱时收集到的蛋白质相比,分子质量较______ (填大或小),原因是_______ 。
(4)研究人员还进一步探究了PS降解酶固定化后的热稳定性变化。将固定化酶和游离酶置于60℃水浴中,每20min测定其活力一次。结果如图所示。
据图分析,PS降解酶固定后热稳定性提高,依据是________ 。
Ⅰ号培养基:水、无机盐、氮源、物质X
Ⅱ号培养基;水、无机盐、氮源、物质X、物质Y
(1)物质X和物质Y分别是
(2)除了图中所示方法外,还可以通过
(3)为测定PS降解酶降解塑料的能力,需要先将该酶分离出来,常用凝胶色谱法,凝胶色谱法分离PS降解酶的基本过程:样品加入后进行洗脱,而后收集PS降解酶。最后收集到的蛋白质样品与刚洗脱时收集到的蛋白质相比,分子质量较
(4)研究人员还进一步探究了PS降解酶固定化后的热稳定性变化。将固定化酶和游离酶置于60℃水浴中,每20min测定其活力一次。结果如图所示。
据图分析,PS降解酶固定后热稳定性提高,依据是
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