【推荐1】环境中常被检出四环素类抗生素的残留，科学家采用基因工程技术构建出一种能高效降解四环素的基因工程菌，如图所示，将四环素降解酶基因（tetx）经过PCR扩增后，与质粒pET28a经酶切后构建重组质粒，并导入大肠杆菌BL21，筛选后得到工程菌ETD—1，ETD—1可通过发酵工程大量生产四环素降解酶并应用于生产实践，SapⅠ、HindⅢ、BamHⅠ、NdeⅠ是几种不同的限制酶。回答下列问题：

(1)利用PCR技术扩增tetx基因需要设计引物，引物的作用是______。为了将tetx基因准确地整合到质粒的插入位点，则在对tetx基因进行扩增时，需在A、B两端引入限制酶______的识别序列，原因是______。
(2)图中pET28a的启动子和终止子之间还存在核糖体结合位点序列，推测终止子和核糖体结合位点序列的作用分别是______。
(3)将重组质粒导入大肠杆菌之前，需要用______处理大肠杆菌BL21，使细胞易于吸收周围环境中的DNA分子。筛选工程菌ETD—1的培养基需加入的抗生素是______。
(4)将发酵得到的菌体与一定体积的100μg/mL溶菌酶等溶液混合，冰上孵育20～40min，超声处理20～60min，上述操作目的是______，再经脱盐处理，从而获得纯化的四环素降解酶。

【推荐2】正当中国各界激烈争论转基因水稻安全问题之际，在菲律宾首都马尼拉郊外的一片稻田里，一种被称为“金色大米”的转基因水稻已经悄然收获。这种转基因大米可以帮助人们补充每天必需的维生素A。由于含有可以生成维生素A的β一胡萝卜素，它呈现金黄色泽，故称“金色大米”。“金色大米”的培育流程如图所示。请回答下列问题。（已知酶I的识别序列和切点是一G ↓ GATCC一，酶II的识别序列和切点是一↓GATC—）。

（1）图中a、b所示获得目的基因的方法是______________，培育“金色大米”的基因工程操作四步曲中，其核心是______________。
（2）据图分析，在构建c的过程中，目的基因用______________（限制酶I或限制酶II）进行了切割。检验重组载体导入能否成功需要利用______________作为标记基因。
（3）过程e运用了细胞工程中的______________技术，该技术的理论依据是______________；在该技术应用的过程中，关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行______________和______________。
（4）若希望该转基因水稻生产的“金色大米”含维生素A含量更高、效果更好，则需要通过______________工程手段对合成维生素A的相关目的基因进行设计。

【推荐3】I、胰岛素是已知的唯一降低血糖水平的激素，请分析胰岛素的作用机制模式图（如下图所示），并回答有关问题：

(1)图中的刺激X最可能是___________，下丘脑神经细胞接受刺激X后，膜外的电位变化为________ ，最终引起传出神经末梢释放_____ ，与胰岛B细胞上相应受体结合，引起胰岛素分泌增多。
(2)由图可知，胰岛素与______结合后，一方面使_______增加，促进葡萄糖进入细胞；另一方面促进___________，从而降低血糖。
(3)如果给动物注射大剂量胰岛素，动物会因低血糖而休克。通过注射胰高血糖素能促使血糖升高，使休克的动物清醒根据以下实验材料及用品，完成实验方案，证明胰高血糖素能升高血糖。
实验材料及用品：小白鼠、注射器、鼠笼、胰岛素溶液、胰高血糖素溶液、葡萄糖注射液、生理盐水。
实验方案：选择体重相近的健康小白鼠，按照下表进行处理、观察并填写相关内容。

分组	实验处理方法	预期结果	下一步实验处理方法	预期结果
A组（对照组）	① ______	清醒		清醒
B组	注射大剂量的胰岛素溶液	休克	②_____________	未清醒
C组			③_____________	清醒
D组			④_____________	清醒

II、随着水体富营养化日趋严重，淡水湖泊藻类水华频繁发生，人们正在利用基因工程进一步解析“聚磷基因”和“硝化基因”，将这两种基因重组后导入大肠杆菌中，从而使废水中过高的N、P得到有效的去除，降低水体的富营养化。请回答下列有关基因工程和生态工程的相关问题。
(4)人们获取聚磷基因和硝化基因的方法通常有人工合成、____和___ 。
(5)利用聚磷基因和硝化基因构建基因表达载体时，常用的工具酶是__________，它们作用的化学键名称是 __________ 。
(6)重组DNA导入前，通常用______ 溶液对大肠杆菌进行处理。
(7)要从根本上解决水体污染，还需将城市污水进行回收利用，实现废物资源化，这体现了生态工程的______原理。

【推荐1】将几丁质酶基因导入棉花细胞中,可获得抗真菌的转基因棉,其过程如下图所示(注:农杆菌中Ti质粒上只有T-DNA片段能转移到植物细胞中)。

(1) 图中基因工程的基本过程可以概括为“四步曲”，其中的核心步骤是__________________。
(2)构建重组Ti质粒用到的工具酶是___________________。 
(3) 该几丁质酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码几丁质酶的基因进行了改造，使其表达的几丁质酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了其耐热性。资料中的技术属于__________________工程范畴，其基本途径是从预期蛋白质的功能出发，通过__________________和人工合成的方法获得该基因，再经表达、纯化获得蛋白质。
(4)检验转基因棉的抗菌性状，常用方法是___________________________。
(5)除了图中所示的将目的基因导入受体细胞的方法，还可用_______________或____________方法。
(6)棉花细胞经③④⑤得到试管苗，依据的理论基础是______________________。

【推荐2】筛选出能与SARS病毒的S蛋白特异性结合的受体蛋白，研究人员在S蛋白末端添加TAP标签（能特异性地与人和哺乳动物体内IgG类抗体结合），再利用该标签在病毒敏感细胞（如非洲绿猴肾细胞）中快速纯化出S蛋白及其相互作用的蛋白质，具体过程如下图。其中XhoI、SmaI、EcoRI、BamHI表示限制酶，PCMV、T7表示启动子，Kozak序列是翻译起始因子结合位点的编码序列，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，ori表示复制原点。请回答问题：

(1)为成功构建重组质粒pcDNA3.1-S-TAP，在利用PCR扩增S基因时，应在S基因的5'端引入______序列，3'端删除______的编码序列。
(2)将S基因和TAP序列的扩增产物进行_______鉴定，结果显示两个片段均得到扩增且与预期值大小相一致。再经测序证实正确后，将这两个片段经限制酶切割并通过_______酶连接定向克隆入质粒pcDNA3.1.
(3)重组质粒pcDNA3.1-S-TAP转染细胞前，需将vero细胞置于37℃、______（填气体条件）下培养18~24h进行传代。将传代的细胞与重组质粒pcDNA3.1-S-TAP以适宜比例混合，在转染试剂的作用下转染细胞（实验组），为保证实验的科学性，还需设置对照实验，具体做法为_______。将转染24h的细胞置于载玻片，洗涤、固定后滴加正常人血清稀释液和荧光素标记的羊抗人IgG抗体稀释液，荧光显微镜下观察，若_______，则说明S-TAP融合蛋白在vero细胞中得以表达。
(4)通过上述检测发现，S-TAP融合蛋白表达量较低，其原因可能有________（填序号）。
①重组质粒pcDNA3.1-S-TAP在vero细胞中大量复制
②S-TAP融合基因在vero细胞中转录出的mRNA量较少
③S基因与病毒宿主细胞的基因有不同的密码子偏爱性，翻译相应mRNA的tRNA数量不足

【推荐3】图甲中含有所需的目的基因，常用PCR技术进行扩增，其中A、B、C、D表示四种单链DNA片段；图乙表示将目的基因导入质粒获得重组DNA分子。回答下列问题：
   
(1)用PCR技术扩增图甲中的目的基因时，需要提供的2种引物是_______________（填字母）。若计划用1个目的基因为模板获得m（m大于2）个目的基因，则消耗的引物总量是____________个。PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行，一般要添加的原因是______________________________。
(2)为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶______________________________的识别序列，PCR引物应该添加在识别序列的___________（填或）端。质粒也用这两种限制酶处理，产生与目的基因相同的切口，再利用酶将目的基因片段拼接到载体的切口处，形成重组质粒。
(3)若要将重组质粒导入大肠杆菌时，一般先要用处理大肠杆菌，目的是使大肠杆菌处于一种___________的生理状态。欲筛选出含该重组质粒的大肠杆菌菌落，要用含___________的培养基进行筛选。
(4)将含有乙的重组DNA分子导入植物细胞获得转基因植物，目的基因导入受体细胞后需通过分子水平检测目的基因是否表达出相应的蛋白质，具体方法是________________。

【推荐1】【生物——选修3：现代生物科技专题】 研究人员欲对拟芥兰叶片中某种蛋白质进行改造，使其能结合空气中微量的黄色炸药挥发分子，导致叶片产生特定颜色变化，从而有助于检测公共场所是否存在爆炸物。请回答：
(1)科研人员从上述预期蛋白质的功能出发，设计________结构，然后推测相应目的基因的________序列，最终人工合成出目的基因。
(2)将目的基因导入拟芥兰细胞通常采用______的方法。首先将目的基因插入到Ti质粒的       ______上，并最终整合到拟芥兰细胞染色体的DNA上。
(3)在___________和人工控制的条件下，将上述拟芥兰细胞培养在人工配制的培养基上，诱导其产生___________，最终形成转基因植株。该过程的原理是____________。
(4)在转基因植株附近放置___________，从个体生物学水平鉴定出目的基因成功表达的转基因植株。

【推荐2】转基因生物现已成为人们争论的焦点之一，转基因奶牛和转基因抗虫水稻就是其中的典型例子。其获得过程如下，请回答相关问题：

（1）A→B→C为转基因奶牛的培育过程，其中A表示__________。②过程常用的方法是__________。其中④用到的主要胚胎工程技术有__________。
（2）A→B→D为转基因水稻的培育过程，在构建重组质粒B过程中，目的基因的两端还必须有________和终止子；用含重组质粒的土壤农杆菌感染水稻细胞后，采用__________技术检测转基因水稻的染色体的DNA上是否插入了目的基因；若要确定BT毒蛋白基因导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，写出在个体水平上的鉴定过程：_____________________________。
（3）⑤过程所用的现代生物技术称为____________________，水稻受体细胞通过⑤过程，能形成水稻植株的根本原因是此细胞具有______________________。

【推荐3】如图是获得转基因抗虫棉的技术流程示意图。请回答下列问题：
   
(1)A→B利用的技术称为_________，其中②过程需要_________酶才能完成。
(2)离体棉花细胞F→转基因抗虫棉植株G利用的技术称为_________，应用的原理是_________。
(3)图中将目的基因导入棉花细胞需要经过③过程，该过程为构建_________。
(4)上述流程示意图中，将目的基因导入棉花细胞所采用的方法是__________法。
(5)欲确定抗虫基因是否整合到G的染色体DNA上，可以用_________技术来检测。

【推荐1】在对番茄的研究中发现，害虫损伤番茄叶片后，叶片细胞的细胞壁能释放出一种类激素因子，这种物质通过细胞组织扩散到茎和其他叶片上，启动蛋白酶抑制剂的基因后，开始高效合成蛋白酶抑制剂，并在茎叶中迅速积累，以对付害虫的再次侵袭。蛋白酶抑制剂对害虫的消化酶有抑制作用，害虫取食后，因无法消化食物而被杀死。人们尝试将番茄的蛋白酶抑制剂基因导入玉米，让玉米获得与番茄相似的抗虫性状，以对付异常猖獗的玉米螟（一种玉米害虫）。
根据材料回答下列问题：
（1）番茄的蛋白酶抑制剂很可能是在茎、叶细胞的_________处合成的。
（2）将番茄的蛋白酶抑制剂基因导入玉米内，使玉米形成新的性状，应用的原理是_________。
（3）能抗玉米螟的玉米的生态效益显著，有人认为该抗虫玉米就是无虫玉米，不必防治害虫。你是否赞成这种说法？____________。说明理由：_____________________。

【推荐3】下图为转基因抗病毒马铃薯培育过程图，请据图回答有关问题：

（1）PCR技术利用的基本原理是_________。利用该技术扩增目的基因（子链的延伸方向从→），应选择图中的引物_________（填字母）与模板DNA结合。
（2）在构建基因表达载体时，需要的工具是__________________。
（3）重组细胞经过G_________、H_________过程成功地培育出了转基因抗病毒马铃薯植株。
（4）制造抗病毒植株的人工种子可利用植物组织培养技术得到的_________等材料经过人工薄膜包装得到。
（5）研究表明，转基因植物可以通过花粉将外源基因扩散到其他植物，从而对生态环境造成潜在的危害。请你提出一种解决此问题的合理生物学方法：__________________。