“蓝白斑筛选”是一种基于质粒载体的DNA重组技术,它可通过改变质粒载体中的DNA序列,实现对菌落颜色的调控,如图所示。回答下列问题:
(1)将外源DNA片段与质粒连接成重组质粒时,所用的酶催化形成的化学键是____________ 。该重组质粒除具有外源DNA、标记基因外,还具有的结构有复制原点、____________ 、终止子等。
(2)将重组质粒转入大肠杆菌前,需在低温﹑低浓度的_____________ 溶液中处理大肠杆菌,目的是____________ 。在转化过程中,实际转化效率介于50%~85.7%,推测原因可能与____________ (答两点)有关。
(3)在筛选导入重组质粒的大肠杆菌时,培养基中应加入____________ 。培养一段时间的平板上,含有重组质粒的大肠杆菌菌落呈白色的原因是____________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/5/31/532662c9-056d-41f8-8465-f1e27a440a85.png?resizew=601)
(1)将外源DNA片段与质粒连接成重组质粒时,所用的酶催化形成的化学键是
(2)将重组质粒转入大肠杆菌前,需在低温﹑低浓度的
(3)在筛选导入重组质粒的大肠杆菌时,培养基中应加入
更新时间:2023-06-26 20:15:06
|
相似题推荐
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
【推荐1】某单子叶作物甲不具有抗锈病的性状,科学家将某种生物的抗锈病基因分离出来,并将该基因导入作物甲体内,成功培育了抗锈病的新品种。下图中EoRI、BamHI为两种限制酶,箭头所指为限制酶的酶切位点。已知作物甲细胞对四环素敏感,抗锈病基因可以通过EeoRI或BamHI获得。回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/7/7/59e0805a-5b33-47e2-b8c2-b88e039c19ff.png?resizew=254)
(1)应使用___________ 酶和限制酶___________ (填“EcoRI”或“BamHI”)构建重组质粒,不使用另一种限制酶的理由是___________ 。
(2)在获得抗锈病基因后,采用___________ 技术在体外进行大量扩增,该技术的前提是需要有一段已知抗锈病基因的核苷酸序列,以便根据该序列合成___________ 。
(3)将抗锈病基因导入作物甲的细胞中一般不适合采用农杆菌转化法,其原因最可能是___________ 。
(4)为了初步检测作物甲的细胞中是否导入了抗锈病基因,可以在培养基中添加___________ ,若在该培养基上作物甲细胞能增殖或不死亡,则说明作物甲细胞中___________ (填“一定”“可能”或“一定没有”)导入了抗锈病基因。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/7/7/59e0805a-5b33-47e2-b8c2-b88e039c19ff.png?resizew=254)
(1)应使用
(2)在获得抗锈病基因后,采用
(3)将抗锈病基因导入作物甲的细胞中一般不适合采用农杆菌转化法,其原因最可能是
(4)为了初步检测作物甲的细胞中是否导入了抗锈病基因,可以在培养基中添加
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
名校
【推荐2】科研人员拟用同源重组的方法敲除金黄色葡萄球菌的SigB基因。回答下列问题:
(1)同源重组的原理如图1所示。图中剪刀代表的是一种核酸内切酶。当DNA被切开后,细胞中具有修复功能的酶可将这些切开DNA片段进行重新连接,这样SigB基因就能被其它碱基序列替换,实现SigB基因的敲除。结合图1的信息,为实现基因的敲除,供体DNA片段的碱基序列应为____________ 。
①实验中可替换SigB基因的片段是卡那霉素抗性基因,卡那霉素抗性基因的作用是_______ 。
②科研人员需将SigB基因上游、卡那霉素抗性基因、SigB基因下游利用____________ 扩增技术实现供体DNA片段的构建。构建过程如图2所示。____________ 原则形成局部双链结构,然后在____________ 催化作用下形成SigB基因上游和卡那霉素抗性基因融合片段。按照此操作,可将SigB基因上游和卡那霉素抗性基因融合片段与SigB基因下游融合构建出供体DNA片段。
③通过设计引物可以使卡那霉素抗性基因扩增后,两侧应含有与SigB基因上、下游相同的碱基序列。从图3的p1~p4中选取的引物组合是____________ ,该引物组合要如何改造才能使其两侧含有与SigB基因上、下游相同的碱基序列____________ 。_____ (分别答出一点即可)。
(1)同源重组的原理如图1所示。图中剪刀代表的是一种核酸内切酶。当DNA被切开后,细胞中具有修复功能的酶可将这些切开DNA片段进行重新连接,这样SigB基因就能被其它碱基序列替换,实现SigB基因的敲除。结合图1的信息,为实现基因的敲除,供体DNA片段的碱基序列应为
①实验中可替换SigB基因的片段是卡那霉素抗性基因,卡那霉素抗性基因的作用是
②科研人员需将SigB基因上游、卡那霉素抗性基因、SigB基因下游利用
③通过设计引物可以使卡那霉素抗性基因扩增后,两侧应含有与SigB基因上、下游相同的碱基序列。从图3的p1~p4中选取的引物组合是
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
【推荐3】牛雄性胚胎中存在特异性H-Y抗原,可在牛早期胚胎培养液中添加H-Y单克隆抗体,筛选胚胎进行移植,以利用乳腺生物反应器进行生物制药。请回答下列问题:
(1)为了大量制备H-Y抗体,可以将H-Y抗原基因导入到大肠杆菌或酵母菌进行表达。与大肠杆菌相比,选择酵母菌获取H-Y的优势是____________ 。
(2)下图的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制酶的识别序列与切割位点。经BamH I酶切后得到的目的基因可以与载体(不含BamH I识别序列)被________ 酶切后的产物连接,理由是_________________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2019/12/17/2356948097146880/2356981971206144/STEM/d3d262d277ad4a8aa7ccaca536cdf2d5.png?resizew=341)
(3)可选择_____ 期的胚胎,切下少量______ 细胞进行性别鉴定。待检验的细胞通常需要扩大化培养,当培养液中细胞数量不再增加时,若要使细胞继续增殖,可采用的方法是进行________ 。
(4)利用H-Y抗体检测性别的原理是__________________ 。还可用SRY-PCR的方法鉴定性别,在PCR过程中若1个DNA分子扩增了4次,则消耗引物_____ 个。
(1)为了大量制备H-Y抗体,可以将H-Y抗原基因导入到大肠杆菌或酵母菌进行表达。与大肠杆菌相比,选择酵母菌获取H-Y的优势是
(2)下图的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制酶的识别序列与切割位点。经BamH I酶切后得到的目的基因可以与载体(不含BamH I识别序列)被
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2019/12/17/2356948097146880/2356981971206144/STEM/d3d262d277ad4a8aa7ccaca536cdf2d5.png?resizew=341)
(3)可选择
(4)利用H-Y抗体检测性别的原理是
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
名校
【推荐1】金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在于动植物中具有金属结合能力的蛋白质,决定该蛋白质合成的基因结构如图1所示,其中B链为转录的模板链。科研人员利用图2所示质粒构建枣树的MT基因重组DNA分子并导入大肠杆菌细胞,获得对重金属镉(Cd)具有吸附能力和耐受能力的MT工程菌。回答下列问题:
(注:XhoI、KpnI、PstI为不同限制酶的识别位点:LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以催化无色物质X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色:amp基因为氨苄青霉素抗性基因。)
(1)为了使PCR扩增后的产物按照正确的方向与已被酶切的载体连接,克隆MT基因时应选择的引物组合是______ ,并在其5′末端分别添加限制酶______ 的识别序列。
(2)构建重组DNA分子启动子是______ 识别并结合的部位。
(3)导入、筛选和鉴定MT工程菌。
①将得到的混合物导入到用______ 处理的大肠杆菌完成转化实验
②将菌液稀释并涂布在含X-gal和氨苄青霉素的培养基上进行培养后,随机挑取______ 的单菌落可获得MT工程菌。
③欲进一步对MT工程菌进行鉴定,可将挑取出的MT工程菌与普通大肠杆菌分别接种至含______ 的LB液体培养基中,置于恒温培养箱中培养,适宜时间后检测菌种数量。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/11/13/ff1768bf-aca5-4de1-853c-58e64e404a7c.png?resizew=477)
(注:XhoI、KpnI、PstI为不同限制酶的识别位点:LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以催化无色物质X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色:amp基因为氨苄青霉素抗性基因。)
(1)为了使PCR扩增后的产物按照正确的方向与已被酶切的载体连接,克隆MT基因时应选择的引物组合是
(2)构建重组DNA分子启动子是
(3)导入、筛选和鉴定MT工程菌。
①将得到的混合物导入到用
②将菌液稀释并涂布在含X-gal和氨苄青霉素的培养基上进行培养后,随机挑取
③欲进一步对MT工程菌进行鉴定,可将挑取出的MT工程菌与普通大肠杆菌分别接种至含
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
【推荐2】下图是转基因小鼠的培育过程示意图,Gfp是绿色荧光蛋白基因,请分析回答:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/1/7/2631096793284608/2645773965680640/STEM/d9cc0d4f56234a40860234c18ee0b2a8.png?resizew=576)
(1)过程①需要用到________ 酶。过程②将目的基因导入胚胎干细胞常用的方法是________ ;培养胚胎干细胞的培养液中除加入各种营养物质外,通常还需加入________ 。
(2)表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、________ 、________ 、终止子和复制原点等。
(3)自然状况下胚胎干细胞是由动物的早期胚胎或________ 中分离出来的一类细胞。胚胎干细胞在形态上表现为体积小,细胞核大,细胞核仁明显;在功能上具有________ 性。
(4)图中载体上的Neo基因是B抗生素抗性基因,图中步骤③所用的G418是B抗生素(对细胞有毒害作用),培养液添加G418的目的是________ 。
(5)步骤⑤将细胞注射入囊胚的____ 位置;步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理,目的是_______ 。
(6)检测目的基因是否翻译成蛋白质,可从小鼠c体内提取蛋白质,用________ 杂交的方法加以检测。
(7)单克隆抗体的优点是_____________________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/1/7/2631096793284608/2645773965680640/STEM/d9cc0d4f56234a40860234c18ee0b2a8.png?resizew=576)
(1)过程①需要用到
(2)表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、
(3)自然状况下胚胎干细胞是由动物的早期胚胎或
(4)图中载体上的Neo基因是B抗生素抗性基因,图中步骤③所用的G418是B抗生素(对细胞有毒害作用),培养液添加G418的目的是
(5)步骤⑤将细胞注射入囊胚的
(6)检测目的基因是否翻译成蛋白质,可从小鼠c体内提取蛋白质,用
(7)单克隆抗体的优点是
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
【推荐3】植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质,如半纤维聚多聚糖,果胶质(富含有半乳糖醛酸的多聚糖)等。研究人员通过基因工程,胚胎工程等技术培育出转多聚糖酶基因(manA),主要流程如下图(neo为新霉素抗性基因),回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2023/4/14/3216363028709376/3218629141921792/STEM/158948b1414e47419a7a312f55adf3d3.png?resizew=665)
(1)运用PCR技术扩增DNA分子时,需经过变性→_______ →延伸→重复过程,经过4轮循环后,得到的子代DNA分子中,不同时含有两种引物DNA分子占________ 。
(2)通过①过程获得的重组质粒含有4.9kb个碱基对,其中manA基因含有1.8kb个碱基对。现将该重组质粒成功导入受体细胞后,经培养,发现约有50%的细胞能正常表达目的基因产物,原因是_____________ 。若用BamH1和EcoRI联合酶切割其中一种重组质粒,只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段,若用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒,则可获得_________ kb长度两种的DNA片段。
(3)在④过程的早期胚胎培养时,通常需要定期更换培养液,目的是________________ 。
(4)⑤过程前,通常需对受体母猪注射_____________ ,使其生理状态相同。与普通猪相比,该转基因猪的优势是________________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2023/4/14/3216363028709376/3218629141921792/STEM/158948b1414e47419a7a312f55adf3d3.png?resizew=665)
(1)运用PCR技术扩增DNA分子时,需经过变性→
(2)通过①过程获得的重组质粒含有4.9kb个碱基对,其中manA基因含有1.8kb个碱基对。现将该重组质粒成功导入受体细胞后,经培养,发现约有50%的细胞能正常表达目的基因产物,原因是
(3)在④过程的早期胚胎培养时,通常需要定期更换培养液,目的是
(4)⑤过程前,通常需对受体母猪注射
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
【推荐1】人乳铁蛋白是乳汁中一种重要的非血红素铁结合糖蛋白,主要由乳腺上皮细胞表达和分泌。它不仅参与铁的转运,且具有广谱抗菌、抗氧化、抗癌、调节免疫系统等强大生物功能,被认为是一种新型抗菌、抗癌药物和极具开发潜力的食品和饲料添加剂。下图表示用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程,请据图回答:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/5/25/2728432626647040/2728448931774464/STEM/917c04f1-3ec3-4356-a677-a62717b7bf89.png)
(1)在构建重组质粒时,为防止目的基因和载体自身环化,应先选用______ (填具体类型)限制性核酸内切酶处理人乳铁蛋白基因和载体,然后用DNA连接酶处理得到重组质粒。
(2)在进行①操作过程中,为了获得更多的卵子,应对良种母奶牛进行______ 处理,从公牛中获得的精子需要经过______ 才能与卵细胞结合。
(3)过程③常用______ 方法将重组质粒导入到受精卵中。图中采用的生物工程技术④和⑥分别是______ 和胚胎移植,前者______ (填需要或不需要)添加胚胎成纤维细胞。
(4)对代孕母牛要进行______ 处理,使之与供体的生理状况保持相同,转基因奶牛成功的标志是______ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/5/25/2728432626647040/2728448931774464/STEM/917c04f1-3ec3-4356-a677-a62717b7bf89.png)
(1)在构建重组质粒时,为防止目的基因和载体自身环化,应先选用
(2)在进行①操作过程中,为了获得更多的卵子,应对良种母奶牛进行
(3)过程③常用
(4)对代孕母牛要进行
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
【推荐2】科学家发现了一种能够专一分化为心脏组织细胞的干细胞EiP,有望能够修复受损的心脏组织。请分析回答下列问题:
(1)这种干细胞EiP很可能_____ (填“是”或“不是”)胚胎干细胞。利用干细胞EiP_____ (填“能”或者“不能”)修复心脏病患者受损部位的过程。科学家设想还可以对干细胞EiP进行基因改造,将外源基因导入干细胞EiP常用的方法是_____ 法。
(2)体外培养干细胞EiP能否获得心脏器官?_____ (填“能”或者“不能”)。原因是_____ 将干细胞EiP在含有特定的_____ 因子的培养液中培养一段时间后,在注入受损的心脏组织中,可以促进干细胞EiP的分化。
(3)使用培养基进行干细胞EiP培养时,通常要加入_____ 等天然成分,除了保证被培养细胞处于无菌、无毒及充足氧气的环境中,还需要保证细胞生活所需的_____ 。
(1)这种干细胞EiP很可能
(2)体外培养干细胞EiP能否获得心脏器官?
(3)使用培养基进行干细胞EiP培养时,通常要加入
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题组
|
适中
(0.65)
【推荐3】(一)某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解,会对环境造成污染,只有某些细菌能降解S.研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株,且细菌降解S后会在菌落外周形成透明圈。实验过程中需要甲、乙两种培养基,甲的组分为无机盐、水和S,乙的组分为无机盐、水、S和Y。
(1)实验时培养基通常采用_________ 的方法进行灭菌.乙培养基中的Y物质是_________ 。甲、乙培养基均属于_________ 培养基。_________ 倍.培养过程中定期取样并用_________ 的方法进行菌落计数,评估菌株增殖状况.用平板培养细菌时一般需要将平板_________ (填“倒置”或“正置”).
(3)最后从平板中挑选_________ 的菌落,其降解S的能力较强。
(二)胰岛素的生产由提取动物胰岛素,发展到了利用基因工程生产重组人胰岛素。_________ 酶处理目的基因和载体。
(5)构建的基因表达载体除目的基因、标记基因外,还必须有_________ 、_________ 、_________ 等。
(6)利用奶牛设计乳腺生物反应器生产人胰岛素,为使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异表达,构建基因表达载体时应将目的基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,并选用_________ 为受体细胞。
(1)实验时培养基通常采用
(3)最后从平板中挑选
(二)胰岛素的生产由提取动物胰岛素,发展到了利用基因工程生产重组人胰岛素。
(5)构建的基因表达载体除目的基因、标记基因外,还必须有
(6)利用奶牛设计乳腺生物反应器生产人胰岛素,为使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异表达,构建基因表达载体时应将目的基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,并选用
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
【推荐1】真核生物基因中通常含有内含子,而原核生物基因中没有,原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。下图表示从基因文库提取胰岛素基因的过程。回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2020/3/15/2420292508303360/2420714084745217/STEM/d2f41ac581d440549fc35334ffc7ea9a.png?resizew=379)
(1)从基因结构分析,与基因组文库中的基因相比,cDNA文库中获得的目的基因少了________ 等结构(至少写两个)。基因文库中cDNA文库与基因组文库相比,前者较小,原因是______ 。
(2)将获得的胰岛素基因导入受体菌内,并在受体菌内维持稳定和表达的过程,在基因工程中称为______ 。
(3)过程⑤需将纤维素膜上的细菌裂解,释放出__________ ,再用32P标记的__________ 作为探针进行杂交。依据杂交结果,应选取培养基上____ (填字母)菌落继续培养,才能获得含有胰岛素基因的受体菌。
(4)经过目的基因的检测和表达,从大肠杆菌中获得的“胰岛素”未能达到期待的生物活性,导致这种差异的原因可能是__________ 。
(5)与从基因组文库获取目的基因相比,图示方法获得的目的基因在受体菌中更容易表达,原因是_____ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2020/3/15/2420292508303360/2420714084745217/STEM/d2f41ac581d440549fc35334ffc7ea9a.png?resizew=379)
(1)从基因结构分析,与基因组文库中的基因相比,cDNA文库中获得的目的基因少了
(2)将获得的胰岛素基因导入受体菌内,并在受体菌内维持稳定和表达的过程,在基因工程中称为
(3)过程⑤需将纤维素膜上的细菌裂解,释放出
(4)经过目的基因的检测和表达,从大肠杆菌中获得的“胰岛素”未能达到期待的生物活性,导致这种差异的原因可能是
(5)与从基因组文库获取目的基因相比,图示方法获得的目的基因在受体菌中更容易表达,原因是
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
名校
【推荐2】ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄细胞合成乙烯的两个关键酶。利用反义DNA技术(原理见图1)可以抑制这两个基因的表达,从而使番茄具有耐储存、宜运输的优点,下图2为融合ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因的反义表达载体的结构示意图。请回答:
(1)从番茄成熟果实中提取RNA为模板,在______ 酶的作用下合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因。在检测番茄细胞中是否存在反义融合基因时,____ (填“能”或“不能”)用标记的ACC氧化酶基因片段做探针进行检测。
(2)合成出的ACC氧化酶基因两端分别含限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的酶切位点,ACC合成酶基因两端含SacⅠ和XbaⅠ的酶切位点,用限制酶______ 对上述两个基因进行酶切,使_______ 键断开,再利用____ 将其串联成融合基因,相应的Ti质粒应用限制酶_______ 进行切割,确保融合基因能够插入载体中。
(3)为了实现图1中反义基因的效果,应将融合基因反向插入在启动子2A11的下游,即可构成反义融合基因。将表达载体与农杆菌菌液混合后,接种在含有______ 的培养基中,可筛选出含有反义融合基因的农杆菌,经克隆化培养后,再利用______ 法获得转基因番茄。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/7/19/d343e864-4992-42e4-a7ff-087240fdee47.png?resizew=414)
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/7/19/7c1dfb50-da75-423d-8b92-44344cf5d1ab.png?resizew=213)
(1)从番茄成熟果实中提取RNA为模板,在
(2)合成出的ACC氧化酶基因两端分别含限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的酶切位点,ACC合成酶基因两端含SacⅠ和XbaⅠ的酶切位点,用限制酶
(3)为了实现图1中反义基因的效果,应将融合基因反向插入在启动子2A11的下游,即可构成反义融合基因。将表达载体与农杆菌菌液混合后,接种在含有
您最近一年使用:0次
非选择题-解答题
|
适中
(0.65)
【推荐3】下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图。请回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2018/3/8/1897590334676992/1898563857555456/STEM/5f6d13861b9644f7b8fa2df01d7cd3f1.png?resizew=607)
(1)图中②获取目的基因的方法是______________ 。
(2)A中共有a个碱基对,其中鸟嘌呤有b个,若③④⑤过程连续进行4次,第4次至少需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸____________ 个。
(3)⑧过程可用___________ 处理D,使它成为感受态细胞。
(4)能否利用人的皮肤细胞来完成①过程?___________ 。请说明理由:______________ 。
(5)图中B应至少有一个标记基因,其作用是_________________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2018/3/8/1897590334676992/1898563857555456/STEM/5f6d13861b9644f7b8fa2df01d7cd3f1.png?resizew=607)
(1)图中②获取目的基因的方法是
(2)A中共有a个碱基对,其中鸟嘌呤有b个,若③④⑤过程连续进行4次,第4次至少需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸
(3)⑧过程可用
(4)能否利用人的皮肤细胞来完成①过程?
(5)图中B应至少有一个标记基因,其作用是
您最近一年使用:0次