【推荐2】2012年诺贝尔医学和生理学奖授予英国科学家约翰·戈登和日本科学家山中伸弥。约翰·戈登在20世纪60年代做过一个划时代的实验：把美洲爪蟾的小肠上皮细胞核注入去核的卵细胞，结果发现一部分卵依然可以发育成蝌蚪，其中的一部分蝌蚪可以继续发育成为成熟的爪蟾。山中伸弥等科学家将四个关键基因转入小鼠的成纤维细胞，使其变成多功能干细胞（iPS），这些干细胞可再转化成老鼠体内任何种类的细胞。回答下列问题：
(1)约翰·戈登之后，科学界利用该技术进行更多细胞核转移实验，复制出多种哺乳类动物。在哺乳动物的核转移实验中，一般通过_____________（物理方法）将受体细胞激活，使其进行细胞分裂和发育，当胚胎发育到_____________阶段时，将胚胎移入受体（代孕）动物体内。
(2)从卵巢中吸取的卵母细胞，一般要培养到_______________阶段才能用于实验。
(3)利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植的原因是_____________。
(4)在山中伸弥的实验中，利用了逆转录病毒，该病毒的作用是___________________。
(5)一般情况下，体外扩增目的基因常用的方法是___________________。在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的____________。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用_________处理。

【推荐3】有些人体内由于乳糖酶分泌少，不能完全消化牛奶中的乳糖，饮用牛奶后易出现腹泻等不适症状，这称为乳糖不耐受。为了解决这一问题，科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵，使获得的转基因奶牛分泌的乳汁中，乳糖的含量大大降低，而其他营养成分不受影响。根据如下操作流程回答相关问题：

(1)为了获得更多的卵母细胞，在进行①过程前，需要用___处理奶牛A，通过图中②过程采集的B奶牛精子不能直接使成熟的卵细胞受精，常要用化学诱导法对奶牛的精子进行___处理，③过程表示的胚胎工程技术为___。
(2)基因工程中常使用的载体是质粒，其作为载体必须具备的条件是___（至少答出两点）。除质粒外，基因工程中使用的载体还有___。
(3)④过程表示基因表达载体的建构过程，概述其操作流程___。
(4)外源基因插入奶牛受精卵中的DNA上后，有的受精卵发育成转基因奶牛，有的会死亡。分析外源基因插入受精卵中的DNA上后，导致受精卵死亡的最可能原因是___。若现已确定目的基因插入到了奶牛的DNA上，并发育成转基因奶牛，⑦过程的检测结果却为乳汁中乳糖含量未降低，为进一步确定原因，可采用___法进行检测。

【推荐1】请根据下图回答有关问题：
（1）在如图所示的蛋白质工程流程中，A、B分别是___________、___________。
（2）对获得的目的基因可采用___________技术扩增其数量，依据的原理是___________。在该过程中所用酶的最大理化特点是________________________。
（3）⑤过程中将构建的基因表达载体导入受精卵常用的方法是______________________。

【推荐2】马鞍山南山铁矿的凹山采矿场是华东第一大露天矿坑。2017年底闭坑，停止开采。这个功勋矿区将华丽转身成为生态乐园，生态修复的总体方案正在规划设计中。请回答下列问题：　
（1）实施生态工程时，需要考虑到矿工安置、市政建设、产业转型等问题，遵循生态工程的__________原理。在应用植物修复技术治理重金属污染的土壤时，需选择符合要求的植物，遵循了生态工程的__________ 原理。
（2）废矿区的锌、铜等金属离子含量较高，一般植物无法正常生长。为降低锌的含量，科研人员将酵母菌的锌转运子（ZAT）基因导入到拟南芥中，增强了拟南芥对锌的耐受性和吸收能力，这说明基因工程实现了_____________________________________________。拟南芥为双子叶植物，将重组质粒导入其细胞中常用的方法是__________________________。   
（3）生态乐园的建设需要引入一些景观植物，其中重瓣榆叶梅是一种观赏价值较高的园林树种，但由于其雌蕊退化，一般很难用种子繁殖。科研人员用微型繁殖技术可在短时间内获得大量苗木。微型繁殖技术的原理是________________________，接种前需要对外植体消毒、对培养基灭菌的原因是______________________________________________（答出两点即可）。外植体通过____________过程形成胚状体或丛芽，诱导出试管苗，然后将试管苗移栽到大田，再培养成正常植株。

【推荐3】为研究A蛋白表达对烟草生长的影响，实验人员将A基因与Ti质粒相连，构建成重组质粒后导入烟草中以获得转基因植株。图1为Ti质粒，图2为A基因，Ti质粒上和A基因两侧相关限制酶识别位点序列及切割位点见下表。请回答下列相关问题。

限制酶	BamHI	EcoRI	BglII
识别序列及切割位点

(1)构建重组质粒时需要用到的酶是_______。将A基因与Ti质粒相连，选择限制酶酶切位点时宜选用BamHI和EcoRI，而不选择BamHI和BglⅡ，原因是_______。
(2)将构建的重组质粒转入土壤农杆菌之前，需要将土壤农杆菌制成_______细胞。
(3)用含有重组质粒的土壤农杆菌侵染烟草叶片后，将该叶片离体培养成_____，改变_____的比例，从而再分化形成完整的转基因植株。

【推荐1】培育乳汁中含有人凝血因子IX医用蛋白的二倍体转基因绵羊的简易流程如图所示。请回答下列有关问题：

（1）图中①表示_____________的过程，为了使目的基因在转基因绵羊的乳腺细胞中成功表达，需将人凝血因子Ⅸ基因与___________等调控组件重组在一起，且使目的基因的位置处于______________________。
（2）重组细胞的细胞核来自______________________。为了获得绵羊胎儿的单个成纤维细胞，___________（填“能”或“不能”）使用胃蛋白酶处理绵羊组织块，理由是______________________。
（3）③过程中，采取___________的方法促使重组细胞的形成。
（4）④过程所用培养液的成分比较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需添加___________（答出三种即可）。

【推荐2】控制哺乳动物的性别对于畜牧业生产有着十分重要的意义。目前，分离精子技术是有效的性别控制方法。例如，牛的含X染色体的精子的DNA含量比含Y染色体的精子的DNA含量高出4%左右，利用这一差异人们借助特殊仪器将它们分离开来，再通过胚胎工程技术就可培育出所需性别的试管牛（如下图所示）
   
根据以上信息回答下列相关问题：
(1)试管动物技术通常是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下_____和结合，并通过培养发育成早期胚胎后，再经胚胎移植产生后代的技术，试管动物技术属于_____生殖。
(2)图中过程③通常是_____技术，在这个过程中精子与卵子相遇时，首先它释放_____溶解卵细胞膜外的一些结构，同时借助自身运动接触卵细胞膜。在精子触及卵细胞膜的瞬间，卵细胞膜外的_____会迅速发生生理反应，阻止后来的精子进入，精子入卵后，卵细胞膜也会立即发生生理反应，拒绝其他精子再进入卵内。
(3)为了确保得到所需性别的试管牛，往往需要对移植前的胚胎进行性别鉴定，请举出一种对早期胚胎进行性别鉴定的方法：_____。
(4)胚胎移植能够成功，原因之一是因为早期胚胎在母体内处于_____状态；另外受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生_____反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能。
(5)动物细胞培养时，放入培养瓶中的细胞沉降到瓶底部后首先会出现贴壁生长，大量增殖后会出现_____，每次传代培养时，常使用胰蛋白酶处理，该处理的目的是_____。

【推荐3】胚胎工程的快速发展，帮助人类解决了一些过去尚未解决的问题。回答下面问题：
（1）胚胎工程是对动物早期胚胎或____________所进行的多种显微处理技术。胚胎工程中通过任何一项技术获得的胚胎，都必须通过____________给受体才能获得后代。
（2）胚胎移植是否成功与供体和受体的____________有关。移植的胚胎能在代孕母畜子宫内发育的免疫学基础是________________________。
（3）胚胎分割技术已经发展成一种较成熟的技术，对囊胚进行分割时要将____________均等分割，这样才能保证分割后的胚胎恢复并进一步发育。
（4）受精卵是胚胎发育的开端，卵细胞达到____________期，才具备受精的能力，而精子需经过__________过程才能和卵细胞结合。

【推荐1】TAT是一种短肱，可转导蛋白质进入细胞。蓖麻毒索蛋白（RTA）可作用于核糖体，使蛋白质的合成受阻，从而引起细胞死亡。科研人员以RTA作为抑制肿瘤细胞增殖的活性分子，利用TAT的作用，将TAT-RTA融合蛋白转运进入肿瘤细胞。下图为获得该融合蛋白的过程示意图。
   
回答下列问题。
(1)该基因工程的基本操作步骤是________、基因表达载体的构建、将TAT-RTA融合基因导入受体细胞、TAT-RTA融合基因的检测与鉴定。
(2)利用PCR扩增TAT-RTA融合基因，需要根据TAT和RTA基因设计引物，引物的作用是______。过程①中将PCR得到的TAT-RTA融合基因和质粒经过BamHⅠ/XboⅠ酶切后，用_______酶连接。
(3)过程②中一般先用_________处理大肠杆菌。培养一段时间后，从受体细胞中提取蛋白质，可用_______技术检测融合基因是否翻译。科研人员发现使用酵母菌比使用大肠杆菌作为受体细胞产生TAT-RTA融合蛋白的效果更好，原因可能是________。

【推荐2】科研人员将抗盐基因转入普通烟草培育出抗盐烟草，图1表示该过程所用的质粒，图2表示含抗盐基因的DNA上相关限制酶的酶切位点。限制性核酸内切酶BamHⅠ、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓GATCA、↓CATC、A↓AGCTT。图3表示该过程中利用含目的基因的农杆菌进行转化作用的示意图。回答下列问题：
   
(1)利用逆转录获得的目的基因和从基因组文库中获取的目的基因的主要区别是其不含_____________。
(2)在构建基因表达载体时，目的基因前需要插入启动子，其作用是_______________________________。
(3)用图中质粒和目的基因构建基因表达载体时，可以用限制酶BamHⅠ切割质粒，用限制酶Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA片段，与单一酶切相比，这样做是为了避免______________________。
(4)将目的基因插入到植物细胞染色体的DNA上，理由是______________________。
(5)将目的基因导入植物细胞常用__________________，图3过程__________________（填序号）中发生了基因重组。

【推荐3】马铃薯块茎含有大量的淀粉，富含多种维生素和无机盐，我国已将马铃薯作为主粮产品进行产业化开发。下图是转基因抗盐马铃薯的培育过程，请分析回答下列问题。

(1)为获取抗盐基因，可以从碱蓬细胞研磨液中提取抗盐基因的____来合成DNA。
(2)上图构建基因表达载体时，最好选用限制酶________切割含目的基因的外源DNA和质粒，不能使用SmaⅠ切割的原因是______。构建好的重组质粒在抗盐基因前要加上特殊的启动子，启动子是一段有特殊结构的____片段。
(3)将基因表达载体导入农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA上的原因是______。通过农杆菌的转化作用，使抗盐基因插入马铃薯细胞中的染色体DNA上，从而使抗盐基因的遗传特性得以______ 。
(4)从个体水平上检验转基因抗盐马铃薯是否培育成功的方法是________。