【推荐1】[生物—选修3：现代生物科技]某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到或中会导致相应的基因失活（表示氨苄青霉素抗性基因，表示四环素抗性基因）。有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：

（1）限制性核酸内切酶作为基因工程的工具，其作用特点是 ______________。
（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是___________；并且__________和__________的细胞也是不能区分的，其原因是__________________。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有________________的固体培养基。
（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的模板来自于_______。

【推荐2】异丁醇具有燃值高、能量密度高等优点，其开发和利用对优化我国能源结构和保护环境有非常重要的战略意义。基于酿酒酵母的发酵途径（图甲）和图乙的质粒，研究者构建了一种表达载体pUC18，用于过表达ILV2、ILV5、ILV3、AR010基因，以实现异丁醇的大规模生产。已知氨苄青霉素能抑制细菌细胞壁的形成。据此回答下列问题：

      

(1)图乙质粒上有多个限制酶切位点，作用是____________。研究人员先用pUC18转化经_________（处理方法）的大肠杆菌，使细胞处于________________________的生理状态。重组质粒上有_________，所以能在大肠杆菌中扩增。
(2)将环状载体pUC18导入酿酒酵母时，一般会将其进行酶切得到线性化载体，随后再将其导入受体细胞。根据所学的知识推测酶切得到线性化载体的目的是____________。
(3)提取成功构建的表达载体并导入不能合成组氨酸的酿酒酵母菌株，将菌株接种在培养基中以获得单菌落，该过程称为微生物的______培养。培养基中需要添加的物质有_____（用下列字母填写：a．组氨酸、b．氨苄青霉素、c琼脂）。
(4)异丁醇的大量积累会伤害细胞，研究人员给该工程菌导入一个经改造的光敏蛋白基因，使工程菌对特定的蓝光敏感。进行不同的光照处理，使其在异丁酵产生阶段和生长繁殖阶段进行切换，结果如下图丙所示。

注：5 / 10/ 20h pulse分别代表在黑暗条件下每隔5、10、20h发出15s和65s的蓝光脉冲30min
①对照组的酵母菌需要导入________________。
②以葡萄糖为碳源，利用该转基因酿酒酵母进行发酵时，若想进一步提高其异丁醇产量，综合图甲和图丙信息，分别写出进一步优化菌株和工艺的措施（各一点）___________。

【推荐3】“基因编辑婴儿”露露和娜娜的诞生引发了巨大的争议。基因编辑技术能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对基因中特定DNA片段的敲除、加入等。请回答下列有关问题：
(1)露露和娜娜的诞生借助了试管婴儿技术，包括体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。精子需经过________处理才能与发育至______期的卵子结合形成受精卵，当受精卵最早发育至_______阶段时，可移植到母体子宫中继续发育。
(2)露露和娜娜的CCR5基因中被敲除了32个碱基对，使得T细胞不能正常表达某种膜蛋白，从而使HIV无法识别并攻击T细胞。敲除CCR5基因中32个碱基对，类似于______酶的作用，敲除后产生的DNA片段末端通常有两种形式即______，并通过_____酶连接起来。
(3)基因编辑技术引起的变异属于________。

【推荐1】水稻胚乳中含直链淀粉和支链淀粉，直链淀粉所占比例越小糯性越强。科研人员将能表达出基因编辑系统的DNA序列转入水稻，实现了对直链淀粉合成酶基因（Wx基因）启动子序列的定点编辑，从而获得了3个突变品系。
   
(1)基因工程的核心工作是
____。将能表达出基因编辑系统的DNA序列插入Ti质粒，常用Ti质粒做载体的原因是
____。
(2)根据启动子的作用推测，Wx基因启动子序列的改变影响了
____，从而改变了Wx基因的转录水平。与野生型水稻相比，3个突变品系中Wx基因控制合成的直链淀粉合成酶的氨基酸序列没有发生改变，推测原因是
____。
(3)为检测启动子变化对Wx基因表达的影响，科研人员需要检测Wx基因转录产生的mRNA （Wx mRNA）的量。检测时分别提取各品系胚乳中的总RNA，经
____过程获得总cDNA。为了确保PCR扩增出的是Wx基因的cDNA，关键操作是
____。
(4)各品系Wx mRNA量的检测结果如图所示，据图推测糯性最强的品系为
____，原因是
____。

【推荐2】如果用生物学技术克隆器官，不但解决供体器官短缺的问题，还可以解决器官移植后免疫排斥反应。下图为克隆组织器官的流程图：

回答下列问题：
(1)过程①采用的是细胞工程中的___________技术，过程②采用的是胚胎工程中的___________技术。
(2)经核移植获得的重组细胞进行体外培养时，培养液中通常要添加______等一些天然成分，而气体环境中CO₂的主要作用是_________________________。
(3)如果克隆过程中需进行基因改造，在构建基因表达载体（重组载体）时需要使用________________和___________两种工具酶。
(4)胚胎干细胞可以来自囊胚中的____________在一定条件下，胚胎干细胞可以分化形，成不同的组织器官。若将图中获得的组织器官移植给个体_____（填“A”或“B”），则发生免疫排斥反应的可能性很小。

【推荐3】内蒙古农业大学生命科学院培育出世界首例转乳糖分解酶基因奶牛，为培育“低乳糖奶牛”新品种提供了重要的技术基础。
（1）乳糖分解酶可以将乳糖分解为___________。
（2）目的基因的获取方法：从___________、人工合成。人工合成目的基因的常用方法有___________。
（3）乳糖分解酶基因表达载体的组成，必须有___________和标记基因，标记基因的作用是_________。将乳糖分解酶基因表达载体导入___________（细胞）中，一般导入的方法为___________。
（4）培育转乳糖分解酶基因奶牛的过程中，利用了___________技术。

【推荐1】CHO（中国仓鼠卵巢细胞）细胞是从中国仓鼠卵巢细胞中分离出来的可以无限增殖的细胞。CHO细胞系生产乙肝疫苗的大致操作步骤为：①将得到的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）基因扩增后插入表达载体；②将此重组质粒与带有小鼠二氢叶酸还原酶（dhfr）基因的质粒共转染缺乏二氢叶酸还原酶的CHO细胞；③通过氨甲喋呤加压筛选得到目标细胞株；④在生物反应器中大规模连续培养目标细胞株，每2天收集培养液一次，离心去细胞后纯化蛋白质，使其纯度达到95%以上，经福尔马林处理后，加入氢氧化铝等佐剂制成乙肝疫苗。回答下列问题：
(1)需要通过______技术扩增HBsAg基因，该技术的原理是______。常采用______技术来鉴定PCR的产物。
(2)构建重组质粒时所需的工具酶有______。缺乏dhfr的CHO细胞在培养基上不能正常生长，因此在筛选高效表达HBsAg的细胞株时，dhfr基因起______的作用。
(3)dhfr可被氨甲喋呤抑制，在步骤③中，通过不断提高氨甲喋呤的浓度，绝大多数CHO细胞死亡，但会导致存活下来的细胞中与dhfr基因串联在一起的HBsAg基因高水平表达，从而抵消了氨甲喋呤的抑制效应。由此可知通过氨甲喋呤加压筛选的目的是______。
(4)在生物反应器中大规模连续培养目标细胞株时，通过______的方法，为培养的细胞株营造无毒的环境。在生物反应器中要通入______和5%CO₂的混合气体，其中CO₂的主要作用是______。

【推荐2】请据图回答下列问题：

(1)在培育转基因牛过程中，②过程常用的方法是________。转基因牛可通过分泌乳汁来产生人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有__________，其作用是能够被___________识别并结合从而启动转录过程。
(2)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是____细胞，Ⅲ代表的细胞具有______________的特点。
(3)在抗虫棉培育过程中，需将抗虫基因(Bt毒蛋白基因)插入到Ti质粒的_______上，通过农杆菌的转化作用就可以使抗虫基因进入棉细胞。要确定目的基因(抗虫基因)导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体水平上的鉴定过程： ____________________________。

【推荐3】草甘膦是世界上使用最广泛的除草剂，转EPSPS基因抗除草剂水稻是中国科学院遗传与发育生物学研究所研发的水稻品种，靶标对象为草甘膦。
(1)EPSPS基因一条链的两端序列如下：

采用PCR技术获取和扩增EPSPS基因，需要使用的引物序列为_________（标出5′和3′端）。若PCR过程经过4次循环，需要的引物的数量为_________个。
(2)如表为操作过程中可能用到的限制酶，图2为经切割得到的目的基因及末端（除黏性末端序列外，其他碱基序列省略），图3为要使用的质粒，其中的Tet^r、Amp^r为标记基因。

限制酶	BamHI	BcII	SmaI	Sau3AI
识别位点及切割位点	-G↓GATCC-	-T↓GATCG-	-CCC↓GGG-	-↓GATC-

由图3可以看出，将EPSPS基因导入植物细胞的方法为_________，该方法完成植物细胞转化后通常需要对外植体进行脱菌处理，目的是__________________。作为表达载体，除图中结构，未标注的结构为_________。对质粒进行切割时，选用的两种酶为_________。
(3)为检测EPSPS基因是否导入植物细胞，可采用PCR技术进行检测。在该反应体系中，应加入__________________、EPSPS基因的特异性引物、耐高温的DNA聚合酶、dNTP等物质，若出现阳性反应，则说明导入成功。除了要进行分子水平的检测外，还要进行个体水平的鉴定，即对植株进行_________实验。
(4)除草剂的长期使用，使土壤受到了严重污染。某科研小组为筛选能分解除草剂草甘膦的微生物。

①从土壤中筛选分解草甘膦的微生物一般步骤为：土壤取样→_________→培养→挑选能生长的菌落→鉴定。②平板划线法分离微生物时，培养后发现划线的某个平板培养后第一划线区域的划线上都不间断的长满了菌落，其他区域的划线上均无菌落，原因可能是：__________________。

【推荐1】【选修3：现代生物科技专题】动物乳腺生物反应器是一项利用转基因动物的乳腺代替传统的生物发酵，进行大规模生产可供治疗人类疾病或用于保健的活性蛋白质的现代生物技术。目前科学家已在牛和羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素等重要药品。大致过程如图所示：

（1）在过程③中需要用到的工具酶有_____。要使人的药用蛋白基因在奶牛乳腺细胞中特异性表达，完整的基因表达载体要包括目的基因、_____、标记基因等部分。
（2）要实现超数排卵，应在性成熟雌牛发情周期的某一阶段用_____处理。通过①采集的精子不能直接使成熟的卵子受精，原因是_____。
（3）将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过_____处理的受体母牛子宫内。因为我们对细胞所需的营养条件还没有完全搞清楚，所以，在早期胚胎的培养基中，往往还需要添加_____。
（4）若要一次获得多只完全相同的转基因牛，应采用胚胎分割移植技术。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意将_____均等分割。胚胎分割移植后发育成小牛，这些小牛的基因型_____（填“相同”或“不同”）。

【推荐2】【生物——选修3：现代生物科技专题】
Kanuma是治疗溶酶体酸性脂肪酶缺乏症一种蛋白类药物。将修饰过的Kanuma基因导入奶牛受精卵中，并在奶牛乳腺中表达。请回答：
（1）构建Kanuma基因的表达载体时，需使用的工具酶是_____和_____。在基因表达载体中，除含有目的基因、标记基因和复制原点外，通常还有_____。
（2）为获得更多的受精卵，需用_____对雌性奶牛进行处理以获得更多卵子，并在受精前对精子进行_____处理。受精时防止多精入卵的两道屏障分别是_____和_____。
（3）从囊胚的_____或原始性腺中分离出来的细胞称为ES细胞。
（4）为检测基因是否导入奶牛的受精卵中，可采用的方法是_____。

【推荐3】和牛是世界公认的高档肉牛品种，其体型较小，肉质鲜嫩，营养丰富。我国科研人员利用胚胎移植技术，按如图所示流程操作，成功地批量培育了和牛这一优良品种。请回答下列问题：

(1)用___________激素处理，可使供体母牛超数排卵，过程①中产生的精子简要进行__________处理后才具有与卵细胞受精的能力。在实际胚胎工程操作中常以__________作为受精的标志。
(2)试管牛的培育需要的工程技术有__________和胚胎移植等。
(3)上图移植的胚胎处于____________期，移入的甲胚胎能在代孕雌牛子宫中存活的生理基础是___________；为培育雌性子代小牛，胚胎移植前须进行性别鉴定，需取图中乙细胞进行___________。
(4)为提高胚胎利用效率，尽快获得数量较多的子代和牛，图中甲环节是对牛胚胎所做的处理，使用的技术称为___________，最终结果是__________；这一过程中，要特别注意将内细胞团__________分割。