【推荐1】新冠病毒是RNA病毒，病毒的s蛋白（棘突蛋白）是决定病毒入侵易感细胞的关键蛋白，可与宿主细胞的受体结合。下面为两种针对新冠病毒的疫苗研发方法以及抗S蛋白单克隆抗体制备过程。回答下列问题。

方法	技术路线
基因工程疫苗	S蛋白基因→基因表达载体→大肠杆菌→S蛋白→人体
腺病毒载体重组疫苗	S蛋白基因→腺病毒基因表达载体→人体

(1)在制备疫苗的过程中，常采用__________（中文全称）技术获取和扩增新冠病毒的S蛋白基因。扩增时，除了缓冲溶液、模板、四种脱氧核苷酸，还需要加入引物和___________。其产物一般通过__________来鉴定。
(2)引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的___________。
(3)腺病毒载体重组疫苗是将S蛋白基因重组到改造后的腺病毒内，改造后的腺病毒载体应具备的条件包括对宿主细胞无害、能够在宿主细胞中自我复制、具有标记基因和___________。其中标记基因的作用是__________。

【推荐2】2020年2月10日，习近平总书记在北京调研指导新型冠状病毒肺炎疫情防控工作时强调，以更坚定的信心、更顽强的意志、更果断的措施，坚决打赢疫情防控的人民战争、总体战、阻击战。请回答下列问题：

（1）新型冠状病毒侵入人体内，首先要突破保卫人体的第一道防线和第二道防线，这两道防线叫做__________免疫。
（2）病毒侵入人体后寄生在宿主细胞中，_________能识别被寄生的宿主细胞，并与之密切接触，使其裂解死亡，新型冠状病毒被释放出来后，与_______(填“细胞”或“体液”)免疫产生的________凝集，使之失去侵染能力，最后被吞噬细胞吞噬消化。
（3）新型冠状病毒的检测可以采用实时荧光RT—PCR(逆转录聚合酶链式反应)的方法，RT—PCR的具体过程如图。过程I需要加入缓冲液、原料、_______酶和引物A等；过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上第n次循环时需要________个引物B。
（4）疫情发生后，多地紧急启动封城措施，限制人员进出，对感染者进行隔离治疗。从预防传染病的角度来说，这种措施属于__________。其他防控措施有：①隔离病人；②使用一次性口罩、手套和防护服；③接种疫苗；④用酒精、84消毒液等对室内外环境进行消毒等；其中属于切断传播途径的是____________。(填序号)
（5）研究人员在研究疫苗的同时，为了临床快速缓解患者症状，需要短时间内大量制备相关抗体，具体步骤为：将减毒新型冠状病毒多次注射到小鼠体内，取经新型冠状病毒免疫后小鼠的________，加入__________，使之与小鼠的骨髓瘤细胞进行融合以形成杂交瘤细胞，经培养、筛选，最后得到单克隆抗体，其特点是_______________。

【推荐3】同源重组基因敲除技术是将同源DNA片段导入受体细胞，利用同源DNA片段的互换，用其他DNA片段在原有位置替代靶基因，从而实现基因的敲除。米曲霉产生的曲酸具有抗菌性、抗氧化性等抗逆能力，具有重要的应用价值。为提高米曲霉产曲酸能力，科研人员利用同源重组基因敲除技术成功获得高产的g-5菌株，其部分机理如图甲所示。

(1)据图甲分析，米曲霉3．042基因组中的______基因被替代形成了g-5基因组，该过程需要的工具酶有________。
(2)为了鉴定是否成功获得高产的g-5菌株，科研人员选取进行基因敲除操作后的2个菌落，分别提取其DNA，利用引物______进行PCR扩增，电泳结果如图乙所示。初步判断_____号菌落为目的菌落，依据是______。
(3)米曲霉的曲酸产量与其对逆境的敏感性有关，tpsI基因表达产物可以降低米曲霉对逆境的敏感性。研究发现g-5菌落tpsI基因表达量明显降低。据此推测敲除msn2基因能使米曲霉产曲酸增多的机理是_________。

【推荐1】Ⅰ型糖尿病又名胰岛素依赖型糖尿病（IDDM），Ⅰ型糖尿病病人自身不能产生胰岛素，所以病人从发病开始就需使用胰岛素治疗，并且终身使用，因此临床上对胰岛素需求量很大。如图是利用奶牛乳腺生物反应器制备胰岛素的流程图，据图回答下列问题：

（1）构建重组质粒时，为避免人胰岛素基因末端发生任意连接和载体的自身环化应选用_______________________酶切处理目的基因和载体。要使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异性表达，应将人胰岛素基因与_____________________________等调控元件重组在一起。
（2）②过程采集的奶牛精子常用________________法使其获能，与成熟的卵子在专用受精溶液中完成受精，受精过程中，在精子触及________________的瞬间会产生透明带反应，这是防止多精子入卵受精的第一道屏障。④过程常用的方法是___________________。
（3）对移植前的胚胎需进行性别鉴定，一般采用SRY­PCR方法，选择出现_________（填“阳性”或“阴性”）反应的胚胎进行移植。为了使胚胎移植能成功，需要对代孕奶牛C进行_________________处理，使之与供体的生理状况保持相同。
（4）如果要加速转基因奶牛的繁育，采用的生物技术是_____________________。

【推荐2】如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图（以EcoR Ⅰ酶切为例）：

请据图回答问题：
(1)步骤Ⅰ用的EcoR Ⅰ是一种_____酶，它通过识别特定的_____切割特定位点。
(2)步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3′—羟基与5′—磷酸间形成_____；PCR循环中，升温到95 ℃是为了获得_____；Taq DNA聚合酶的作用是催化_____ 。
(3)若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是_____（从引物①②③④中选择，填编号）。

	DNA序列（虚线处省略了部分核苷酸序列）
已知序列
PCR引物

(4)对PCR产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。下列DNA单链序列中（虚线处省略了部分核苷酸序列），结果正确的是 _____。

A．5′—AACTATGCG……AGCCCTT—3′

B．5′—AATTCCATG……CTGAATT—3′

C．5′—GCAATGCGT……TCGGGAA—3′

D．5′—TTGATACGC……CGAGTAC—3′

【推荐3】用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂的流程如下图所示。据图回答下列问题：

（1）①过程所需的酶是____________。在构建基因表达载体过程中，构建的重组质粒上启动子的本质是__________， 作用是_________________________。
（2）实现②过程常用PCR技术，该技术中需用到的酶是__________，该技术的前提是要有____________________________，以便合成引物。
（3）过程③将基因表达载体导入大肠杆菌时，首先用________处理大肠杆菌，目的是_____________________。

【推荐1】2019年新冠疫情爆发以来，疫情防控成为社会关注的热点问题。下图所示某科研团队运用基因工程研制新冠病毒疫苗的过程。质粒中lacZ基因编码的酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。回答下列问题：

(1)获取目的基因时，首先提取新冠病毒的RNA，再通过______过程获得cDNA（互补DNA），并可借助特异性引物通过PCR扩增图中的片段，PCR的原理是______，其中引物的作用是_____，若一个含有目的基因的DNA扩增n代，则共消耗________对引物。
(2)图中过程①有两种限制酶选择方案（注：图中几种限制酶切割产生的末端不同）：方案一：选用____一种限制酶；方案二：选用_______两种限制酶；方案二优于方案一的原因是______。
(3)将重组质粒导入大肠杆菌之前，需要用一定浓度的Ca²⁺处理大肠杆菌，使细胞处于_______。筛选含重组质粒的大肠杆菌时，须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入_______，培养一段时间后，挑选出______色的菌落进一步培养获得大量目的菌。

【推荐2】人乳铁蛋白(hLF)对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究，主要流程如下图。图中Ase I、Nhe I、Sal I、BamH I代表相关限制酶切点，neo^r为新霉素抗性基因，BLG基因为B乳球蛋白基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答下列问题。

(1)过程①中，不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT－PCR，是因为________。荧光RT﹣PCR技术所用的试剂盒中通常都应该含有________、Taq酶、荧光标记的核酸探针、引物、dNTP、缓冲体系。
(2)在RT—PCR过程中，加入的引物需在________端添加________两种限制酶的识别序列，便于hLF基因插入pEB中。利用 RT－PCR 技术获取的目的基因________(填“能”或“不能”)在物种之间交流；该技术还可用于对某些微量 RNA 病毒的检测，可提高检测的灵敏度，原因是________。
(3)过程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是________；该过程中，两个基因共用的调控元件是BLG基因的________。
(4)PEBL质粒导入受体细胞的方法是________，依据的主要原理是________。
(5)将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养，再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中________，以筛选出转染成功的细胞。该过程________(填“能”或“不能”)区分普通质粒或重组质粒。

【推荐3】棉铃虫和蚜虫是常见的棉花害虫.已知基因crvIA的表达产物对棉铃虫有较强的毒性，基因gna的表达产物对蚜虫有较强的毒性。科研人员将基因cryIA 与基因gna连接在一起，构建了含双抗虫基因的重组表达载体，并转入棉花细胞中，获得了具有双抗性的转基因棉花，其部分过程如图所示。请回答下列问题：

注：Klenow能将黏性末端转变为平末端；图中不同限制酶切出的黏性末端均不同。
(1)过程③中将基因cryIA 与基因 gna相连，可选用________________（填“E.coli DNA 连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
(2)图中将目的基因导入棉花细胞采用了农杆菌转化法，该方法的原理是__________________。
(3)已知基因cryIA的表达产物是一种毒蛋白，若要检测基因cryIA 在转基因棉花中是否成功表达，常用的分子水平检测方法的基本思路是_________________________。
(4)针对上述转基因棉花的安全性，不同的人具有不同的观点。有人认为种植了这种转基因棉花的农田中的杂草一般不会出现抗虫性状，原因可能是________________________________，棉花很难与杂草进行杂交。为了防止抗虫基因通过花粉传播，科研小组考虑将抗虫基因导入棉花根尖细胞的____________________中，同时将抗虫棉花和普通棉花混合种植，请从生物进化的角度阐述混合种植的优点：_____________________。

【推荐1】回答下列有关基因工程、细胞工程的问题：
（1）基因工程自20世纪70年代兴起后，飞速发展，目前已经成为生物科学核心技术，在农牧业、工业、环境和医药卫生等方面展示出美好的前景。
①植物基因工程：主要用于提高农作物的_________以及改良农作物的品质和利用植物生产药物。
②动物基因工程：可以用转基因动物生产药物，科学家将药用蛋白基因与________等调控组件重组在一起，导入哺乳动物的受精卵中，进而培育出转基因动物，在其进入泌乳期后，通过分泌的乳汁获得所需药品，称之为_________________。
③医药卫生方面:可以利用基因工程生产药物，还可以治疗疾病。治疗遗传病最有效的手段是__________。
（2）随着生物科技的进步，植物细胞工程作为一门新兴的生物技术，已经普遍应用于社会生产的方方面面。
①微型繁殖：植物组织培养技术不仅可以保持优良品种的_____________，还可以高效快速实现种苗的快速繁殖，选取植物_______(部位)进行组织培养可获得脱毒植株，实现作物增产。
②作物新品种的培育：常规育种培育出一个可以稳定遗传的农作物优良品种，一般需要经过5〜6年的连续筛选，而_________可极大地缩短育种年限；在植物的组织培养过程中，由于培养细胞一直处于_________状态，因此容易产生突变。
（3）神奇的人工种子：人工种子就是以植物组织培养得到的______________(至少答两种）等为材料，经过人工薄膜包装得到的种人工种子在适宜条件下同样能够萌发长成幼苗。

【推荐2】水稻穗粒数可影响水稻产量。研究者筛选到一株穗粒数异常突变体，并进行了相关研究。
(1)农杆菌Ti质粒上的_____________序列，可以从农杆菌中转移并随机插入到被侵染植物的_____________中，导致被插入的基因功能丧失。研究者用此方法构建水稻突变体库，并从中筛选到穗粒数异常突变体。
(2)研究者分别用EcoRI、HindIlI、Bam HI三种限制酶处理突变体的总DNA，用HindIII处理野生型的总DNA，处理后进行电泳，使长短不同的DNA片段分离。电泳后的DNA与DNA分子探针（含放射性同位素标记的T—DNA片段）进行杂交，得到下图所示放射性检测结果。

①由于杂交结果中_______________，表明T—DNA成功插入到水稻染色体基因组中。（注：T—DNA上没有EcoRI、HindIII、BamHI三种限制酶的酶切位点）
②不同酶切结果，杂交带的位置不同，这是由于__________________不同。
③由实验结果判断突变体为T—DNA单个位点插入，依据是________________。
(3)研究者用某种限制酶处理突变体的DNA（如下图所示），用_________________________________将两端的黏性末端连接成环，以此为模板，再利用中的引物__________________组合进行PCR，扩增出T—DNA插入位置两侧的 突变体DNA未知序列。经过与野生型水稻基因组序列比对，确定T—DNA插入了2号染色体上的B基因中。

(4)研究发现，该突变体产量明显低于野生型，据此推测B基因可能_________________（填“促进”或“抑制”）水稻穗粒的形成。
(5)育种工作者希望利用B基因，对近缘高品质但穗粒数少的低产水稻品系2进行育种研究，以期提高其产量，下列思路最可行的是(      )。
a．对水稻品系2进行⁶⁰Co照射，选取性状优良植株
b．培育可以稳定遗传的转入B基因的水稻品系2植株
c．将此突变体与水稻品系2杂交，筛选具有优良性状的植株

【推荐3】全球首创、备受关注的“稻米造血”技术，有望在武汉量产，其原理是：将人血清白蛋白基因，通过基因工程技术植入到水稻基因中；通过光合作用在稻谷中大量生产人血清白蛋白。请回答下列问题：
(1)在构建人血清白蛋白基因的______时，需在目的基因的上游引入启动子，其作用是______。
(2)在造血稻米的培育过程中，研究人员利用水稻外植体经________形成愈伤组织。若对水稻使用农杆菌转化法导入重组质粒，需要在愈伤组织中加入适量的______化合物，其目的是 ______。
(3)为避免人血清白蛋白引发人体的免疫排斥反应，利用蛋白质工程除去该蛋白基因中_______，从而使人血清白蛋白失去抗原性。在蛋白质工程中，对蛋白质结构进行改造，最终是通过对基因的直接改造来完成，其原因是_______。