狂犬病是由狂犬病病毒(RABV)感染中枢神经系统引起的传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%。当前,接种疫苗和抗体注射是预防狂犬病最为有效的途径。RABV是一种RNA弹状病毒,RABV-G(病毒表面糖蛋白)是RABV诱导机体产生抗体的唯一抗原,利用基因工程技术可获得重组RABV-G蛋白(rRVGP)的亚单位疫苗,并制备相应的单克隆抗体。回答下列相关问题:
(1)在国内外研究中,rRVGP已经在多种细胞系统中实现了合成。在昆虫细胞系统中获取疫苗过程如下:
①提取病毒的RNA进行RT-PCR,即将病毒RNA经过______ 过程获得cDNA,并对cDNA进行PCR扩增。RT-PCR过程中需要加入的酶有______ 。
②利用______ 进行核酸分子杂交或利用______ 技术鉴定PCR产物以检测是否获得正确的目的基因。
③待用②中后者方法鉴定结束后,用刀片切割______ 并回收目的基因,从而达到提纯的目的。 接着将纯化得到的目的基因与特定质粒酶切连接,再利用______ 法将重组DNA分子导入果蝇S2细胞,待表达后破碎细胞,最后利用______ 技术对rRVGP进行检测。
(2)2023年诺贝尔生理学或医学奖颁布给了两位在mRNA疫苗上做出突破性贡献的先驱。在狂犬病的预防中,同样也可以使用mRNA疫苗,但缺陷是机体缺少______ (填“RNA聚合酶”或“DNA聚合酶”),使得mRNA进入细胞后不能在体内持续产生大量抗原,且mRNA在体内容易被降解。对此研究人员研制出一种自扩增RNA(saRNA)疫苗,即在mRNA中加入一段可复制的序列,并对mRNA5'端加帽,3'端加尾部修饰,使其能在机体内稳定存在。相比于传统的mRNA疫苗,saRNA疫苗还具有的优点是______ 。
(3)RABV-G的单克隆抗体制备及鉴定。过程如下:
①将RABV-G作为抗原对小鼠多次注射后,从脾脏中分离出小鼠的B淋巴细胞与可以______ 的骨髓瘤细胞融合,并利用选择培养基对融合细胞进行筛选。
②对筛选后的细胞进行______ 培养和抗体检测,最后获得所需的杂交瘤细胞。
③将获得的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内培养或体外培养获得单克隆抗体。
(4)除了利用细胞融合技术制备单克隆抗体,还可以利用转基因动物乳腺生物反应器生产单克隆抗体。过程如下:
①体外获取单克隆抗体的基因后,将该基因插入到乳腺细胞特异性表达的乳清酸性蛋白(WAP)基因组中,为减少后续分离单克隆抗体的难度,可对原WAP基因进行______ ,但必须保留原有的启动子和调控序列,且插入的位点在调控序列下游,以保证基因的正确表达。
②将上述重组基因导入哺乳动物细胞,通过同源重组技术获得经转化的细胞。
③将符合要求的细胞的细胞核植入_____ ,从而形成融合细胞。将融合细胞进行______ ,一段时间后植入雌性动物代孕体,直到母体分娩出转基因动物。
④待个体长大后,从乳汁中分离纯化RABV-G单克隆抗体。
(1)在国内外研究中,rRVGP已经在多种细胞系统中实现了合成。在昆虫细胞系统中获取疫苗过程如下:
①提取病毒的RNA进行RT-PCR,即将病毒RNA经过
②利用
③待用②中后者方法鉴定结束后,用刀片切割
(2)2023年诺贝尔生理学或医学奖颁布给了两位在mRNA疫苗上做出突破性贡献的先驱。在狂犬病的预防中,同样也可以使用mRNA疫苗,但缺陷是机体缺少
(3)RABV-G的单克隆抗体制备及鉴定。过程如下:
①将RABV-G作为抗原对小鼠多次注射后,从脾脏中分离出小鼠的B淋巴细胞与可以
②对筛选后的细胞进行
③将获得的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内培养或体外培养获得单克隆抗体。
(4)除了利用细胞融合技术制备单克隆抗体,还可以利用转基因动物乳腺生物反应器生产单克隆抗体。过程如下:
①体外获取单克隆抗体的基因后,将该基因插入到乳腺细胞特异性表达的乳清酸性蛋白(WAP)基因组中,为减少后续分离单克隆抗体的难度,可对原WAP基因进行
②将上述重组基因导入哺乳动物细胞,通过同源重组技术获得经转化的细胞。
③将符合要求的细胞的细胞核植入
④待个体长大后,从乳汁中分离纯化RABV-G单克隆抗体。
更新时间:2024-04-28 21:25:43
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【推荐1】 IKK 激酶由IKKα、IKKβ和IKKγ三种亚基组成,该酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷(SCID)患儿IKKβ基因编码区第1183位碱基T突变为C, 导致IKKβ上第395 位酪氨酸被组氨酸代替。为研究该患儿发病机制,研究人员应用大引物PCR定点诱变技术培育出 SCID 模型小鼠,主要过程如下图1、2。
(1)在PCR反应体系中,需要加入引物和IKKβ基因外,主要还需要加入______________ 等。可以通过_______________ 来初步鉴定PCR产物,还可将含有_____________ 的凝胶切割下来回收凝胶中的DNA,进一步通过 DNA 测序技术鉴定PCR产物。
(2)在图 1 获取突变基因过程中,需要以下 3 种引物:
引物A: 5'-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3'(下划线字母为突变碱基)
引物 B:5'-TAAGCTTCGAACATCCTA-3'(下划线部分为限制酶 HindIII识别序列)
引物C: 5'-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3'(下划线部分为限制酶SacI识别序列)
上述三种引物中,在PCR1中使用的引物有_____________ 、_____________ ,在PCR2中使用的引物有_____________ ,PCR2中另外一种引物是图中大引物的_____________ (填“①”或“②”)链。
(3)图2模型鼠培育过程中杂合模型鼠(F₀)的培育涉及了一系列现代生物技术,下表是其中的一些步骤,请根据题意完成表格内容。
(4)图2所示的F0小鼠若要在胚胎时期就确定其性别,则可取_____________ 细胞,进行_____________ 分析来判定。根据图2杂交结果,可以确认突变基因已经较稳定地整合到小鼠细胞的染色体上,在遗传时遵循_____________ 定律。研究人员对三种基因型小鼠胸腺淋巴细胞中组成IKK激酶的三种亚基进行提纯和电泳,结果如图3。请依据此结果提出SCID患者免疫缺陷产生的机制:_____________ 。
(1)在PCR反应体系中,需要加入引物和IKKβ基因外,主要还需要加入
(2)在图 1 获取突变基因过程中,需要以下 3 种引物:
引物A: 5'-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3'(下划线字母为突变碱基)
引物 B:5'-TAAGCTTCGAACATCCTA-3'(下划线部分为限制酶 HindIII识别序列)
引物C: 5'-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3'(下划线部分为限制酶SacI识别序列)
上述三种引物中,在PCR1中使用的引物有
(3)图2模型鼠培育过程中杂合模型鼠(F₀)的培育涉及了一系列现代生物技术,下表是其中的一些步骤,请根据题意完成表格内容。
过程 | 实验目的 | 步骤要点 |
导入 | a.处理突变基因与载体 | ①利用限制酶 |
b.构建重组载体 | 利用DNA连接酶催化突变基因和载体连接 | |
c.导入目的基因 | ②通常利用 | |
发育 | d.胚胎体外培养 | 利用专用培养液培养受精卵,并检测其发育状况 |
e.代孕获得小鼠 | ③选择体外培养至 | |
f.鉴定、筛选F0小鼠 | 利用PCR鉴定基因,筛选出杂合鼠F0 |
(4)图2所示的F0小鼠若要在胚胎时期就确定其性别,则可取
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【推荐2】胰岛素作为治疗糖尿病的特效药,市场潜力巨大,科学家利用转基因技术获得转入胰岛素基因的大肠杆菌,通过发酵工程,实现胰岛素的大量生产。图1表示人胰岛素基因与引物位置、限制酶作用位点,图2表示所用质粒的结构。
据图回答以下问题:
(1)若要扩增出胰岛素基因并用于表达载体的构建,应选择的引物是_____ 和_____ 。若要得到可用于构建表达载体的目的基因,至少经过_____ 次循环。
(2)构建基因表达载体时,最好选择限制酶_____ ,原因是_____ 。
(3)将重组质粒导入大肠杆菌时,需用_____ 处理大肠杆菌,其目的是_____ 。
(4)为了将成功导入重组质粒的大肠杆菌筛选出来,甲同学在加入氨苄青霉素的培养基中进行接种,结果如下图:
该同学采用的接种方法是_____ 。乙同学认为该结果得到的菌落并不都是成功导入重组质粒的大肠杆菌,你认为乙同学判断的理由是_____ 。
请在甲同学实验结果的基础上提出一种思路,将导入重组质粒的大肠杆菌筛选出来:_____ 。
据图回答以下问题:
(1)若要扩增出胰岛素基因并用于表达载体的构建,应选择的引物是
(2)构建基因表达载体时,最好选择限制酶
(3)将重组质粒导入大肠杆菌时,需用
(4)为了将成功导入重组质粒的大肠杆菌筛选出来,甲同学在加入氨苄青霉素的培养基中进行接种,结果如下图:
该同学采用的接种方法是
请在甲同学实验结果的基础上提出一种思路,将导入重组质粒的大肠杆菌筛选出来:
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【推荐3】血栓对健康有极大危害。来源于金黄色葡萄球菌的天然葡激酶(SAK)是一种新型溶栓制剂,因易诱发免疫反应而严重限制了应用。人HC蛋白参与免疫抑制反应,对机体保护性的免疫调节有着重要作用。研究人员预测,将SAK与人HC蛋白融合形成的SAK-HC融合蛋白不仅能够发挥高效溶栓作用,且能降低机体免疫系统对葡激酶的反应,这将具有极大的临床应用前景。
(1)获取SAK-HC融合基因。设计引物分别扩增SAK基因和HC基因,其中HC基因的引物D中增加了一段与SAK基因相同的序列。SAK基因扩增时引物(F和N)位置如图1所示,请在方框内绘制出HC基因扩增的引物(D和R)位置____________ 。将得到的SAK基因和HC基因1:1混合,经再次扩增即可得到SAK-HC融合基因。
(2)利用____________ 酶将融合基因与质粒构建基因表达载体,转化经____________ 处理的大肠杆菌。筛选、培养大肠杆菌,提取质粒进行电泳分析(图2),结果显示融合基因已成功导入大肠杆菌,理由是____________ ,为保证检测结果的准确性,还应对重组质粒酶切的产物进行____________ 。
(3)培养转化成功的大肠杆菌一段时间后,破裂细胞、提取纯化融合蛋白并用缓冲液稀释,进行活性鉴定。培养基中加入纤维蛋白原、纤溶酶原、凝血酶等模拟血栓形成,摇匀至浑浊立即倒平板,用打孔器在冷却的平板上打加样孔,并加入不同的样品,结果如图3。据图判断,表中a、b分别是____________ 、__________ 。一段时间后测量培养基上____________ ,若图3中1-6组透明圈直径大小接近,可知____________ ,说明融合蛋白具有进一步临床应用研究的价值。
(4)研究发现,葡激酶结构中的第77位精氨酸与T细胞对其识别有关。请设想新的研究思路改造现有葡激酶,以降低免疫反应,使其适于临床应用,写出基本流程____________ 。
(1)获取SAK-HC融合基因。设计引物分别扩增SAK基因和HC基因,其中HC基因的引物D中增加了一段与SAK基因相同的序列。SAK基因扩增时引物(F和N)位置如图1所示,请在方框内绘制出HC基因扩增的引物(D和R)位置
(2)利用
(3)培养转化成功的大肠杆菌一段时间后,破裂细胞、提取纯化融合蛋白并用缓冲液稀释,进行活性鉴定。培养基中加入纤维蛋白原、纤溶酶原、凝血酶等模拟血栓形成,摇匀至浑浊立即倒平板,用打孔器在冷却的平板上打加样孔,并加入不同的样品,结果如图3。据图判断,表中a、b分别是
加样孔 | 样品 | 剂量 |
1 | 传统溶栓药物尿激酶 | 10μL |
2 | 传统溶栓药物尿激酶 | 20μL |
3 | a | 10μL |
4 | a | 20μL |
5 | 其他方式改造的葡激酶 | 10μL |
6 | 其他方式改造的葡激酶 | 20μL |
7 | b | 20μL |
(4)研究发现,葡激酶结构中的第77位精氨酸与T细胞对其识别有关。请设想新的研究思路改造现有葡激酶,以降低免疫反应,使其适于临床应用,写出基本流程
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【推荐1】玉米原产亚热带,幼苗抗寒能力弱,为提高玉米植株的抗寒性,科学家利用基因工程将耐寒蛋白基因(LEA基因)导入玉米细胞中获得转基因玉米。如图为Ti质粒和LEA基因的酶切位点,其中酶A、B、C均为限制酶。回答下列问题:(1)将Ti质粒和LEA基因构建成基因表达载体需要利用酶____ 切割DNA,原因是____ 。
(2)构建好的基因表达载体导入土壤农杆菌前,需要用含(Ca2+的溶液处理土壤农杆菌,目的是____ 。Ti质粒中的氨苄青霉素抗性基因的作用是____ 。
(3)为确保获得的玉米植株是抗寒性较强的转基因玉米,可进行____ 检测,之后再进行玉米植株的耐寒性实验。
(4)为制备强耐寒蛋白基因突变系,科研人员将单个突变碱基引入LEA基因组cDNA质粒克隆,流程如图。已知在农杆菌体内合成的DNA分子有甲基化修饰,通过PCR扩增的DNA链无甲基化修饰。①已知DpnI可识别甲基化的GATC四个碱基序列,因此其能将____ 水解消化掉。
②若已知重组质粒为a个,经过程①扩增15个循环,需要突变引物____ 个,后经过程②形成的产物全部转入农杆菌后复制n轮,得到双链突变的DNA____ 个。
(2)构建好的基因表达载体导入土壤农杆菌前,需要用含(Ca2+的溶液处理土壤农杆菌,目的是
(3)为确保获得的玉米植株是抗寒性较强的转基因玉米,可进行
(4)为制备强耐寒蛋白基因突变系,科研人员将单个突变碱基引入LEA基因组cDNA质粒克隆,流程如图。已知在农杆菌体内合成的DNA分子有甲基化修饰,通过PCR扩增的DNA链无甲基化修饰。①已知DpnI可识别甲基化的GATC四个碱基序列,因此其能将
②若已知重组质粒为a个,经过程①扩增15个循环,需要突变引物
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【推荐2】回答下列关于基因工程及微生物的问题
Ⅰ.图1是利用基因工程生产人胰岛素的主要流程图,图2是生产过程中所制备的带有目的基 因供体DNA分子及载体(质粒)的示意图。箭头所指为相应限制性核酸内切酶的识别位点,Tetr表示四环素抗性基因,基因C的表达产物会阻断Tetr基因的表达。请回答下列问题:
(1)图1中的供体细胞是_____ 。②过程称为_____ ,该过程需要的原料是_____ 。
(2)若图1所示过程中以Tetr为标记基因,则第③步中应选用对供体DNA和质粒进行切割;为检测转化结果,将经第④步处理后的细菌培养液接种到含有_____ 培养基上,长出的菌落就是成功插入目的基因的菌落。
(3)具体操作过程中图3所示的黏性末端是由____ 种限制性核酸内切酶作用产生的。
Ⅱ.将人胰岛素基因导入到细菌后,需要对细菌进行培养,不同的微生物其所需营养有所不同,表为培养某微生物的培养基。
(4)据表2分析该微生物的同化作用类型为_____ 型。该培养基从物理形态上分应属于_____ 培养基。
(5)图4是采用两种接种方法接种某微生物后培养的效果图。则获得图A效果的接种方法是_____ ,图B效果的接种方法是_____ 。
Ⅰ.图1是利用基因工程生产人胰岛素的主要流程图,图2是生产过程中所制备的带有目的基 因供体DNA分子及载体(质粒)的示意图。箭头所指为相应限制性核酸内切酶的识别位点,Tetr表示四环素抗性基因,基因C的表达产物会阻断Tetr基因的表达。请回答下列问题:
(1)图1中的供体细胞是
(2)若图1所示过程中以Tetr为标记基因,则第③步中应选用对供体DNA和质粒进行切割;为检测转化结果,将经第④步处理后的细菌培养液接种到含有
(3)具体操作过程中图3所示的黏性末端是由
Ⅱ.将人胰岛素基因导入到细菌后,需要对细菌进行培养,不同的微生物其所需营养有所不同,表为培养某微生物的培养基。
牛肉膏 | 酵母膏 | 蛋白胨 | 蔗糖 | MgSO4•7H2O | 水 | 琼脂 | pH |
5g | 1g | 5g | 5g | 0.4g | 1L | 15g | 7.4 |
(4)据表2分析该微生物的同化作用类型为
(5)图4是采用两种接种方法接种某微生物后培养的效果图。则获得图A效果的接种方法是
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【推荐3】樱桃冠病是根癌农杆菌引起的樱桃树疾病。科研人员利用根癌农杆菌作为一种天然高效的转基因运载体,将人工合成的新冠病毒(SARS-CoV-2)基因组序列导入本氏烟草细胞,经植物组织培养后从叶片中提取、纯化病毒样颗粒,用于新冠疫苗的生产,其过程主要包括以下五个步骤。
(1)步骤一:取樱桃树病变枝条的幼嫩瘤体1g经______ 处理捣碎,加入______ 稀释后,用______ 法获得单菌落、经筛选鉴定获得根癌农杆菌。
(2)步骤二:通过人工合成新冠病毒基因组序列应包含______ (A.全部遗传信息 B.遗传物质复制相关蛋白的基因 C.衣壳的部分结构蛋白基因)。通过PCR获取该基因时需设计两种引物,引物间不能碱基互补的原因是______ 。目的基因应插入根癌农杆菌的Ti质粒的______ (A.复制起点 B.Ti质粒上的任意区域 C.T-DNA区域)
(3)步骤三:将重组质粒与经______ 处理的根癌农杆菌混合,完成转化后还需控制温度进行______ 培养,使______ ,再将菌液涂布在含特定抗生素的培养基上培养,挑取菌落进行______ 鉴定后扩大培养待用。
(4)步骤四:取本氏烟草细胞经消毒后与待用菌液共同培养,目的是使______ ,为提高效率,可采用哪几项措施?______ (A.不时摇动培养液 B.缩短培养时间 C.控制菌液中农杆菌浓度 D.降低培养温度)。
(5)步骤五:将处理后的本氏烟草细胞放在含______ 的培养基中除菌处理后,诱导生成根、芽,通过______ 途径获得转基因本氏烟草,并通过______ 的方法检测本氏烟草叶肉细胞中病毒样颗粒。
(1)步骤一:取樱桃树病变枝条的幼嫩瘤体1g经
(2)步骤二:通过人工合成新冠病毒基因组序列应包含
(3)步骤三:将重组质粒与经
(4)步骤四:取本氏烟草细胞经消毒后与待用菌液共同培养,目的是使
(5)步骤五:将处理后的本氏烟草细胞放在含
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【推荐1】双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合,目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉,其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。下图1是科研人员通过杂交—杂交瘤细胞技术(免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术)生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图。请分析回答下列问题:
(1) 与植物体细胞杂交相比,图1中过程②特有的诱导融合的方法是____ ,过程②选用的骨髓瘤细胞 ____ (选填“能”或“不能”)在HAT培养基上生长。
(2)对③筛选出的杂交瘤细胞,还需进行____ 和____ ,才能筛选出足够量的既能无限增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。与传统血清抗体相比,单克隆抗体最主要的优点是___________________ (答出三点)。
(3) 图1中①步骤注射癌胚抗原的目的是_______ 。图1方框内需要经过____ 次筛选,才能获取单克隆杂交—杂交瘤细胞。 体外培养到一定时期的单克隆杂交—杂交瘤细胞会因为______________ 、有害代谢物的积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻,需进行传代培养。
(4)假设图2中双特异性抗体分子是由若干个氨基酸形成的,下列叙述不正确的是____ 。
A.该特异性抗体能与人体内各类肿瘤细胞结合
B.双特异性抗体可以在人体内持续发挥作用
C.该双特异性抗体的制备过程中只用到了动物细胞融合技术
D.双特异性抗体能与药物和肿瘤细胞结合,因而不具有特异性
(5)与直接使用长春碱相比,将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药,对人体的副作用更小,原因是______ ,体现的是双特异性单克隆抗体在_______________ 方面的用途。
(1) 与植物体细胞杂交相比,图1中过程②特有的诱导融合的方法是
(2)对③筛选出的杂交瘤细胞,还需进行
(3) 图1中①步骤注射癌胚抗原的目的是
(4)假设图2中双特异性抗体分子是由若干个氨基酸形成的,下列叙述不正确的是
A.该特异性抗体能与人体内各类肿瘤细胞结合
B.双特异性抗体可以在人体内持续发挥作用
C.该双特异性抗体的制备过程中只用到了动物细胞融合技术
D.双特异性抗体能与药物和肿瘤细胞结合,因而不具有特异性
(5)与直接使用长春碱相比,将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药,对人体的副作用更小,原因是
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【推荐2】回答下列(一)、(二)小题:
(一)某些土壤细菌可将尿素分解,供植物利用,回答与微生物培养有关的问题:
(1)用来筛选分解尿素细菌的培养基添加______ 作为凝固剂,培养基中K2HPO4的作用是______ (答出两点)。
(2)因尿素加热会分解,因此使用G6玻璃砂漏斗进行过滤,漏斗在使用后需用________________ 浸泡,抽滤去除后再用蒸馏水洗至洗出液为中性,干燥后保存。其他物质及器材在使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌时,下面操作正确的是______________ (A灭菌锅内放入的物品应尽量排满实B. LB培养基可分装至培养皿中进行灭菌C.移液管灭菌前应在其上端用镊子子放入少量脱脂棉D.三角刮刀、接种环、G6玻璃砂漏斗皆可进行高压蒸汽灭菌)
(3)能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源,原因是________________ 。但可用葡萄糖作为碳源,进入细菌体内的葡萄糖除了可为细胞生命活动提供能量,还可以______________ 。在4个细菌培养基平板上,均接种稀释度为10-5的土壤稀释液0.1ml,培养一段时间后,平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、178和191,则土壤稀释液中的细菌密度为_________________ 。
(二)单克隆抗体应用比较广泛,经抗原免疫的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合后制备的鼠源单抗,会引起人体的不良反应。科学家通过对鼠和人控制抗体合成的基因进行拼接,实现了对鼠源单抗的改造。下图表示形成鼠-人嵌合抗体的过程。请据图回答:
(1)制备鼠源单抗时,需每隔2周用抗原注射小鼠一次,共注射三次,其目的是产生更多的_______________ 。需要将杂交瘤细胞接种到多孔培养板上,进行抗体阳性检测,之后稀释、培养、再检测,并多次重复上述操作,其目的是筛选______ 的杂交瘤细胞。杂交细胞培养过程中,为防止有害代谢物的积累,可采用______ 的方法。
(2)构建人鼠嵌合抗体基因时,需从小鼠杂交瘤细胞____________ 筛选序列未知的可变区基因,再钓取人抗体恒定区基因,然后利用__________ 酶将两者拼接。
(3)嵌合抗体作为一种较为成熟的慕因工程抗体,其__________ 性和亲和力依赖于能否准确获取可变区基因,而其表达水平主要取决于表达载体和宿主细胞。下列表达系统不属于嵌合抗体宿主细胞的最佳选择的是__________ 。(A.大肠杆菌B. HeLa细胞C.小鼠骨髓瘤细胞D.小鼠成纤维细胞)
(一)某些土壤细菌可将尿素分解,供植物利用,回答与微生物培养有关的问题:
(1)用来筛选分解尿素细菌的培养基添加
(2)因尿素加热会分解,因此使用G6玻璃砂漏斗进行过滤,漏斗在使用后需用
(3)能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源,原因是
(二)单克隆抗体应用比较广泛,经抗原免疫的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合后制备的鼠源单抗,会引起人体的不良反应。科学家通过对鼠和人控制抗体合成的基因进行拼接,实现了对鼠源单抗的改造。下图表示形成鼠-人嵌合抗体的过程。请据图回答:
(1)制备鼠源单抗时,需每隔2周用抗原注射小鼠一次,共注射三次,其目的是产生更多的
(2)构建人鼠嵌合抗体基因时,需从小鼠杂交瘤细胞
(3)嵌合抗体作为一种较为成熟的慕因工程抗体,其
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【推荐3】下图是某实验室获得抗HN1病毒衣壳蛋白单克隆抗体的实验流程,请据图回答:
(1)①过程类似于植物组织培养技术中的___________ 过程,其根本原因是___________ 。
(2)X细胞类似于胚胎干细胞,其在形态上表现为______________________ 。同时具有很强的___________ 和分化能力,所以可用于制备单克隆抗体。
(3)②过程将融合后的细胞用特定的___________ 进行筛选,得到的Z细胞的特点是______________________ 。
(4)流程图中所产生的单克隆抗体能够与___________ 发生特异性结合,从而能够达到治疗相应疾病的目的。
(1)①过程类似于植物组织培养技术中的
(2)X细胞类似于胚胎干细胞,其在形态上表现为
(3)②过程将融合后的细胞用特定的
(4)流程图中所产生的单克隆抗体能够与
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【推荐1】α抗胰蛋白酶可以治疗肺气肿等疾病。下图是科学家培育含人α抗胰蛋白酶因子基因(mAAT)的转基因山羊的流程图,请回答下列相关问题:
获取mAAT基因→构建基因表达载体→显微注射导入山羊受精卵→形成胚胎→将胚胎移入受体母羊→发育成转基因山羊
(1)利用PCR技术对mAAT基因进行扩增,前提是要有一段以mAAT基因的核苷酸序列为 模板合成的____ 。扩增过程中,该物质与DNA模板链的3’端结合,理由是____
(2)目的基因可以直接从生物体分离得到,也可以通过人工合成获取。请推测由mRNA反转录合成人α抗胰蛋白酶因子基因(mAAT)的大致过程:________________ (用文字和箭头表述)。
(3)构建基因表达载体的目的是________ 。为了使mAAT基因只在山羊乳腺中表达,需要在构建表达载体时在mAAT基因前端加上在乳腺中特异性表达的____ ,同时还需要有标记基因,其作用是____
(4)胚胎移植中,应选择有____ 的个体作为受体母羊,并对受体母羊进行同期发情处理。
获取mAAT基因→构建基因表达载体→显微注射导入山羊受精卵→形成胚胎→将胚胎移入受体母羊→发育成转基因山羊
(1)利用PCR技术对mAAT基因进行扩增,前提是要有一段以mAAT基因的核苷酸序列为 模板合成的
(2)目的基因可以直接从生物体分离得到,也可以通过人工合成获取。请推测由mRNA反转录合成人α抗胰蛋白酶因子基因(mAAT)的大致过程:
(3)构建基因表达载体的目的是
(4)胚胎移植中,应选择有
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【推荐2】紫花苜蓿是全世界栽培历史最悠久、利用最广泛的豆科牧草,但易造成家畜鼓胀病。百脉根富含单宁,单宁可与植物蛋白质结合,不引起家畜采食后鼓胀。为培育抗鼓胀病的新型牧草,科研人员利用野生型清水紫花苜蓿和里奥百脉根为材料进行了实践研究。研究主要流程如下图:(注:IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段,R-6G可阻止线粒体的功能)(1)在制备两种植物原生质体时,先将两种细胞分别置于0.5-0.6mol/L的甘露醇溶液中,使细胞在较高渗透压环境下处于_____ 状态,从而有利于用____ 去除细胞壁,分别获得两种植物的原生质体。
(2)①过程可使用____ 诱导细胞融合,其中只有异源融合体才能存活和具有再生能力,请推测原因是_______
(3)步骤②为_____ ,从步骤②到步骤③需要更换新的培养基,其主要原因是培养物在不同的培养阶段所需的______ 不同。经过步骤②、③到形成再生植株,体现的主要原理是______ 。
(4)利用图示技术进行育种的优点是_______ 。
(5)谷蛋白是野生清水紫花苜蓿中含量较高的一种蛋白质,科研人员为比较植株不同部位谷蛋白的含量,想通过制备相应的单克隆抗体进行检测,部分流程如下图:图中注射的特定抗原是_____ 。经过a步骤,细胞两两融合的产物有______ 种。在步骤b的基础上经过步骤c ______ 和抗体检测筛选得到符合要求的杂交瘤细胞,获得的杂交瘤细胞可采用体外培养的方式进行扩大培养,培养一段时间后可从______ 中提取单克隆抗体。
(6)百脉根花的提取液可用于生产护肤品,为研究百脉根花提取液对受损皮肤的修复效果,需要一批遗传性状基本一致的实验小鼠,研究人员从______ (填“同一”或“不同”)小鼠个体中取出体细胞核进行体细胞核移植,形成的多个胚胎再通过_____ 技术,以进一步增加胚胎的数量,最后移植到经过处理_____ 的受体雌鼠中获得实验小鼠。
(2)①过程可使用
(3)步骤②为
(4)利用图示技术进行育种的优点是
(5)谷蛋白是野生清水紫花苜蓿中含量较高的一种蛋白质,科研人员为比较植株不同部位谷蛋白的含量,想通过制备相应的单克隆抗体进行检测,部分流程如下图:图中注射的特定抗原是
(6)百脉根花的提取液可用于生产护肤品,为研究百脉根花提取液对受损皮肤的修复效果,需要一批遗传性状基本一致的实验小鼠,研究人员从
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非选择题-解答题
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较难
(0.4)
解题方法
【推荐3】某科研所对高产奶牛的繁殖进行研究,部分数据如下表所示。回答下列问题:
(1)超卵是超数排卵的简称,让供体达到该目的,则需要给供体注射________ 。
(2)由表格可知,并不是每个胚胎都可以使用,现分六组对不可用胚胎进行检查,以分析原因,则每组可获得的不可用胚胎数约为__________ 个,从中选择一个胚胎观察其染色体的数目,则最佳观察时期是________ ,观察后染色体数目是配子的三倍,这是多精入卵造成的,多精入卵的产生说明________ 失效。
(3)诱导小鼠细胞与去核的卵母细胞融合通常采用的方法是________ ,用物理化学方法激活重构胚的目的是________ 。
(4)若可用胚胎都能发育成个体,则后代为雌性的概率为________ 。为提高后代雌性概率,可对可用胚胎的滋养层细胞的DNA 进行 PCR,选择SRY 基因(该基因位于 Y 染色体上的性别决定基因)________ (填“阳性”或“阴性”)的胚胎进行移植。
(5)代孕个体对移入子宫的重构胚________ ,这为胚胎在受体内的________ 提供了可能。
(6)胚胎分割可以增加胚胎数量,在对胚胎进行分割时要注意________ 。
超排供体(头) | 头均获胚胎(枚) | 头均可用胚胎(枚) |
1501 | 5.6 | 3.6 |
(1)超卵是超数排卵的简称,让供体达到该目的,则需要给供体注射
(2)由表格可知,并不是每个胚胎都可以使用,现分六组对不可用胚胎进行检查,以分析原因,则每组可获得的不可用胚胎数约为
(3)诱导小鼠细胞与去核的卵母细胞融合通常采用的方法是
(4)若可用胚胎都能发育成个体,则后代为雌性的概率为
(5)代孕个体对移入子宫的重构胚
(6)胚胎分割可以增加胚胎数量,在对胚胎进行分割时要注意
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