不对称PCR是利用不等量的一对引物来产生大量单链-限制性引物DNA（ssDNA）的方法。加入的一对引物中含量较少的被称为限制性引物，含量较多的被称为非限制性引物。PCR反应的最初的若干次循环中，其扩增产物主要是双链DNA（dsDNA），但当限制性引物消耗完后，就会产生大量的ssDNA。不对称PCR的简单过程如图所示。假设模板DNA分子初始数量为a个，6次循环后开始扩增产生ssDNA。下列叙述正确的是（ ）
| A．限制性引物和非限制性引物均需要依据模板DNA的碱基序列来设计 |
| B．据图可知，最后大量获得的ssDNA与图中甲链的碱基序列相同 |
| C．该不对称PCR过程中需要（26-1）a个限制性引物 |
| D．上述过程中子链分别沿限制性引物的5'端、非限制性引物的3'端延伸 |
更新时间：2024-05-01 10:32:01
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【知识点】 PCR扩增的原理与过程解读
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解题方法
【推荐1】用A和B两种限制酶同时和分别处理同一DNA片段，限制酶对应切点一定能切开。两种酶切位点及酶切产物电泳分离结果如图1和图2所示。下列叙述正确的是（ ）
| A．图1中X代表的数值为4500，Y是限制酶A的酶切位点 |
| B．图1中的两种限制酶与解旋酶都能催化氢键的断裂，图2中①是限制酶A处理得到的酶切产物 |
| C．用A和B两种限制酶同时处理图1中同一个DNA片段后，产物中共含有6个游离的磷酸基团 |
| D．若要将图1中的DNA片段完整地复制，则需要用到的引物对为引物1和引物4 |
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【推荐2】荧光PCR法根据化学发光原理可以分为染料法和探针法。染料法中特殊染料本身不发光，但是当PCR扩增的时候，染料能够与DNA双链结合从而发光，如图1所示。探针法中除了引物外另外设置了一个探针，在探针的两端分别带上发光基团和淬灭基团，此时发光基团并不发光，但是当DNA通过引物合成的时候，探针被酶切降解释放出发光基团和淬灭基团，两种基团分开后产生荧光，如图2所示。下列说法正确的是（ ）
| A．两种方法均可用于目标DNA的定量分析 |
| B．与染料法相比，探针法的特异性更强 |
| C．通过适当延长引物长度和降低复性温度可提高荧光PCR的特异性 |
| D．用荧光PCR法检测人体是否感染新冠病毒前需要先进行逆转录 |
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【推荐3】实时荧光定量PCR简称qPCR，灵敏度高特异性好，是目前检测微小残留病变的常用方法。将标有荧光素的Taqman探针与待测样本DNA混合后，在变性、复性、延伸的热循环中，与待测样本DNA配对结合的Taqman探针被Taq酶切断，在特定光激发下发出荧光(如图所示)，随着循环次数的增加，荧光信号强度增加，通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值(该值与待测样本中目的基因的个数呈负相关)。下列相关叙述正确的有（ ）
| A．每个模板DNA分子含有2个游离的磷酸基团 |
| B．做qPCR之前，需要先根据目的基因的核苷酸序列合成引物和Taqman探针 |
| C．在反应过程中，ATP为新链的合成提供能量 |
| D．荧光信号达到设定的阈值时，经历的循环数越少，说明含有的病变的概率越小 |
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