【推荐1】乙烯受体是乙烯感受和转导信号的初始元件，广泛存在于各种植物中，并决定植物各种组织对乙烯反应的敏感性。通过对多种植物研究表明，钝化植物对外源乙烯的敏感性比抑制内源乙烯的生物合成更为有效地延长植物的采后寿命。科学家从草莓中提取乙烯受体Ers1基因，通过基因工程将Ers1基因反向连接在启动子后，筛选转入反义Ersl基因的草莓，达到延长储藏期的效果。回答下列问题：
(1)草莓DNA的提取：取草莓植株叶片，置于预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉碎后，加入400uLSDSDNA提取液继续研磨，提取液中含有________可防止DNA被水解。待充分研磨后收集至离心管中，离心后取①于另一干净离心管中，加入200uL异丙醇，离心10min之后弃去管中的②，加入80uL体积分数为70%的乙醇，离心5min之后取③保存。过程中的①、②、③分别是_________。（从“上清液”和“沉淀”中选取相应词语填写）
(2)通过上述方法获得DNA后，需要通过PCR技术进行扩增Ersl基因（如下图）。为使目的基因与质粒连接，在设计PCR引物扩增Ersl基因时需添加限制酶XhoI（识别序列为5'－CTCGAG－3'）的识别序列。已知Ersl基因左端①处的碱基序列为－TTCCAATTTTAA－，则其中一种引物设计的序列是5'_________3'。在PCR体系中，加入的dNTP可提供________。PCR产物通过电泳进行分离后，可割下_________回收扩增的Ersl基因。
   
(3)经XhoI酶切后的载体和Ers1基因进行连接（如图），连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、Ers1基因与载体正向连接、Ers1基因与载体反向连接。为鉴定这3种连接方式，选择HpaⅠ酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，请在下图中画出电泳结果，需标明电泳片段DNA大致长度__________。
   
(4)用________处理农杆菌使其变为感受态细胞，将筛选得到的反向连接质粒与感受态农杆菌混合，使重组质粒进入农杆菌，完成________实验。将农杆菌涂布接种于添加有卡那霉素的LB固体培养基上，目的是________。
(5)用阳性农杆菌感染植物细胞，目的基因就会随________整合到植物染色体DNA中，最后通过________技术培育出完整的转基因植株。为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、________及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。得到的转基因植株乙烯受体的合成受阻，其原因是________。

【推荐1】土壤盐碱化问题已经成为全球性难题，培育耐盐碱农作物是解决人类粮食安全和农业发展的重要途径。
(1)为研究高粱盐碱响应通路中相关基因AT1的作用，研究人员构建过表达植株（AT1-OE）。以高粱cDNA为模板，利用_____方法获取目的基因。如图1，选取最佳限制酶_____处理目的基因和质粒，构建重组质粒并转入农杆菌。将转化成功的农杆菌与高粱愈伤组织共培养，筛选T-DNA成功转入的愈伤组织，使用既能杀死原核细胞，又能杀死真核细胞的潮霉素，效果优于仅能杀死原核细胞的抗生素（如卡那霉素），原因是_____。进一步筛选获得所需愈伤组织，经_____发育成完整植株。同时构建基因敲除植株（AT1-KO）。

(2)检测植株在高碱土壤中的幼苗长势和作物产量，结果发现：相比野生型植株，AT1-KO植株_____，AT1-OE植株表型相反，说明AT1在高粱碱胁迫的响应过程中起负调控作用。
(3)高碱条件下，植物细胞内H₂O₂含量升高，推测AT1可能与运输H₂O₂的通道蛋白PIP2有相互作用。利用免疫共沉淀方法进行研究，实验原理如图2，若靶蛋白A和待测蛋白B有相互作用，用磁珠偶联抗A抗体使A沉淀，则B也会被沉淀下来。利用抗GFP抗体与磁珠偶联，对实验组和对照组总蛋白进行免疫共沉淀，实验结果如图3。

①检测总蛋白的目的是_____。
②通过条带_____可以判断，AT1与PIP2有相互作用。若想进一步验证该相互作用，可用_____抗体与新磁珠偶联再次进行实验。
(4)细胞内过量的H₂O₂积累会导致氧化应激，从而导致植物细胞死亡，降低植物存活率。研究显示PIP2磷酸化能够促进H₂O₂外排。综合上述信息，解释敲除AT1基因能显著提高植株耐盐碱性的原因是_____。

【推荐3】植物可通过免疫系统来保护自身免受病原体的攻击，在免疫过程中有多种蛋白质参与。为寻找Ｎ蛋白介导的植物免疫信号通路中与N蛋白相互作用的蛋白质，科研人员利用烟草开展以下研究。
(1)生物素和ATP在生物素连接酶的____________作用下，转化为有活性的AMP-生物素。AMP-生物素可与蛋白质形成化学键进而使蛋白质带有生物素标记（如图1所示）。AMP-生物素形成后很快被降解，因此AMP-生物素具有较高的空间特异性，只能标记图1中的_____________蛋白质。

   
(2)为寻找与Ｎ蛋白相互作用的蛋白质，科研人员利用上述原理，按图2步骤进行相关实验。
   
①从下列选项中选择正确选项，完善实验方案。
Ⅰ：_______________   Ⅱ：______________
A.生物素       B.生物素连接酶C.生物素连接酶基因D.N蛋白E.N蛋白基因F.N蛋白-生物素连接酶的融合基因
②体外可利用PCR技术获取上述目的基因， 并将目的基因插入到___________和终止子之间构建表达载体，再利用农杆菌转化法侵染烟草，目的基因在烟草细胞中表达相关蛋白质。
③实验中分离到的被生物素标记的蛋白质是与Ｎ蛋白相互作用的蛋白质，请说明理由___________。

【推荐3】亨廷顿舞蹈病（HD）是由单基因（HTT）突变导致的神经退行性疾病，患者表现为行为迟缓或运动障碍。研究人员利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建HD模型小鼠，为制备其它神经退行性疾病的动物模型提供了参考。
(1)CRISPR/Cas9系统的工作原因如图1所示：

CRISPR/Cas9系统是由具有________活性的Cas9-D10A和成对的具有向导作用的gRNA1和gRNA2构成。gRNA1和gRNA2通过________原则特异性结合到目的基因特定的单链DNA片段；然后由Cas9-D10A识别并切断两个结合位点附近单链DNA中的____________键，进而产生两个缺口；再通过一定的基因重组方法将外源DNA片段在缺口处进行整合实现原位敲入，即外源DNA片断替换某基因的片断。
(2)图2为150Q模型小鼠构建原理，科研人员以________为模板，在其外显子1附近设计gRNA靶点序列，并构建包含gRNA基因、Cas9基因和________的重组表达载体。

(3)为培育出纯合150Q模型小鼠，科研人员进行了如下操作：
①150Q模型小鼠F₀代构建：将构建好的重组表达载体导入小鼠受精卵中，体外培养一段时间后，通过________技术转移到若干雌性小鼠子宫中，适宜条件培养。25天后，通过________技术鉴定得到转入成功的F₀代小鼠6只。
②150Q模型小鼠F₁、F₂、F₃代构建：待F₀代小鼠性成熟后，与健康的野生型小鼠进行交配培育F₁代小鼠，经鉴定后，挑选其中的150Q模型小鼠与健康的野生型小鼠交配，培育出F₂代小鼠，使其中的150Q模型小鼠之间进行相互交配，培育出F₃代小鼠。部分F₃代小鼠基因型鉴定结果如图3所示：

请据图判断，科研人员是否培育出纯合150Q模型小鼠，并写出判断依据。_____________________________________________
(4)有人认为成功导入150Q的小鼠即可直接用做HD小鼠模型进行相关研究，你是否同意该观点？若不同意，请说出需要进一步通过哪些方法来判断其是否可作为模型小鼠_____________________。