CRISPR/Cas9基因编辑技术根据靶基因序列设计向导sgRNA，精确引导核酸酶Cas9切割与sgRNA配对的DNA，相关酶在修复断裂DNA的过程中会改变连接部位的碱基序列。科研人员通过删除编码PD-1蛋白基因的2、3、4片段造成蛋白质的功能缺失，制作PD-1基因敲除鼠的流程如图1所示。将体外转录获得的Cas9mRNA和sgRNA导入小鼠的受精卵中，获得了12只基因编辑小鼠。利用PCR鉴定小鼠的基因型，电泳结果如图2所示。已知P1和P2是PCR的引物，下列相关分析正确的是（ ）
| A．核酸酶 Cas9敲除2、3、4片段作用在磷酸二酯键，引起的变异属于基因重组 |
| B．欲将基因的2、3、4共3个片段切除，敲除前需要设计3个向导sgRNA |
| C．图2中，4和12个体杂交的子代均为基因敲除纯合子（不考虑性别） |
| D．图2中，3、5、9个体的体内均能检测到PD-1基因，8和10个体则不能检测到该基因 |
更新时间：2024-05-31 18:20:15
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【推荐1】用荧光物质标记小鼠（2n＝40）性腺细胞中的染色体端粒和染色体上的基因，每个端粒都标记为黄色、A/a基因标记为红色、B/b基因标记为绿色（两对基因独立遗传），不考虑基因突变和染色体变异，有关分析错误的是（ ）
| A．端粒是染色体两端的特殊序列的DNA-蛋白质复合体 |
| B．若标记有丝分裂中期的细胞，则黄色荧光点为160个 |
| C．减数分裂中一个四分体的荧光颜色可能有1种或2种 |
| D．减数分裂Ⅱ中期的细胞中，一条染色体上可能有三种荧光颜色 |
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【推荐2】恶性高热是一种潜在致命性单基因遗传病，患者一般无症状，但当接触麻醉剂后，会诱发患者出现高热等症状，死亡率极高。某家庭的母亲和女儿皆患有恶性高热，母亲因该病去世，女儿经及时抢救而康复。科研人员对该家庭成员进行了基因检测。控制该性状的某一基因可在限制酶的作用下切割成两条不同长度的 DNA 片段，用凝胶电泳法分离后可显示出不同的带谱如图所示（控制该性状的基因为完全显性，且不位于XY染色体的同源区段）。下列说法错误的是
| A．该遗传病属于常染色体上显性遗传病 |
| B．结合3、4可推断 2号不患病的概率是100% |
| C．该致病基因是由正常基因碱基的替换形成 |
| D．4号与无麻醉剂接触史的女子结婚，后代的基因型最多 |
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【推荐1】实时荧光定量PCR简称qPCR，灵敏度高特异性好，是目前检测微小残留病变的常用方法。将荧光标记的Taqman探针与待测样本DNA混合，当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA聚合酶水解，R与Q分离后，R发出的荧光可被检测到在特定光激发下发出荧光（如图所示），随着循环次数的增加，荧光信号强度增加，通过实时检测荧光信号强度，可得Ct值（该值与待测样本中目的基因的个数呈负相关）。下列相关叙述错误的是（ ）
| A．每个模板DNA分子含有2个游离的磷酸基团 |
| B．在反应过程中，无需ATP为新链的合成提供能量 |
| C．做qPCR之前，需要先根据目的基因的核苷酸序列合成引物和Taqman探针 |
| D．荧光信号达到设定的阈值时，经历的循环数越少，说明含有的病变的概率越小 |
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【推荐2】PCR引物的3'端为结合模板DNA的关键碱基，5'端无严格限制，可用于添加限制酶切点等序列。下列叙述正确的是（ ）
| A．该图表示PCR循环中的变性环节 |
| B．PCR第四次循环要消耗15对引物 |
| C．Taq酶催化相邻的两个游离dNTP之间形成磷酸二酯键 |
| D．用图中引物扩增两个循环后即可获得添加限制酶切点的产物 |
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解题方法
【推荐3】研究发现，水稻蜡质基因（Wx）编码直链淀粉合成酶。若Wx基因中第226位碱基是正常的G，该位点所在的内含子能被正常剪接，胚乳中直链淀粉含量最高，基因型记做GG；若该位点突变成T，则不能被正常剪接，胚乳中直链淀粉的合成水平会降低，基因型记做TT。为检测Wx基因该位点碱基是G或T，研究人员以待测水稻叶片总DNA为材料，以Wx基因片段设计引物如图所示，对PCR扩增产物经AccⅠ酶切后电泳。已知引物1为5＇-GCTTCACTTCTCTGCTTGTG-3＇，两引物之间无另外的AccI酶的识别位点。下列叙述正确的是（ ）
| A．组成上述两种淀粉合成酶的氨基酸的种类不同，数目相同 |
| B．GT杂合型水稻品种酶切电泳结果为2条条带 |
| C．若酶切产物只能观察到大约460bp的DNA条带，则表明该水稻品种为TT型 |
| D．该实验中需设计的引物2为5＇-TTCAACTCTCGTTAAATCAT-3＇ |
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