【推荐1】癌症的免疫疗法通过重新激活抗肿瘤的免疫细胞，克服肿瘤的免疫逃逸，在癌症治疗方法中取得越来越突出地位，科研人员在不断研究中发现多种免疫治疗方法的结合是提高治疗效果的途径之一。

  

(1)某些种类癌细胞表面高表达膜蛋白PSMA和PD-L1，如图1。PD-L1能抑制T细胞的活化，使癌细胞发生免疫逃逸。单克隆抗体的优点在于_________。临床上可利用PD-1的单克隆抗体进行癌症治疗。将等量的纯化PD-1蛋白分别注射到5只小鼠体内，经过二次免疫后测定小鼠抗PD-1抗体的免疫效果，取其中免疫效果最好的1号小鼠用于后面的融合实验。在融合前三天，对1号小鼠加强免疫一次，目的是_________________________。然后取小鼠的脾脏细胞用______试剂诱导与骨髓瘤细胞融合，用选择培养基进行筛选得到杂交瘤细胞。
(2)一段时间后，将（1）所得细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，检测原理如上图。
①在检测时需要将PD-1蛋白固定于周相载体表面制成固相抗原，并加入多孔板培养槽中的__（细胞、上清液），即待测样本。
②加入酶标抗体后一段时间，需要用洗涤剂将未与____________________结合的酶标抗体洗去。
③加入相应酶促反应底物显色后，颜色的深浅可代表____________________。
(3)CD28是T细胞表面受体，T细胞的有效激活依赖于CD28在癌细胞与T细胞结合部位的聚集。因此，科研人员尝试构建既能结合PSMA，还能结合CD28的双特异性抗体PSMAXCD28，诱导T细胞定向杀伤癌细胞，如图2。制备过程为：先将__________分别注射到小鼠体内，分离出B淋巴细胞，诱导其与小鼠的骨髓瘤细胞融合，筛选得到两种杂交瘤细胞，再诱导两种细胞融合。成功融合的细胞会表达两种L链和两种H链，由于L链和H链的随机组合会_________。因此还需进行筛选才能获得所需的双特异性抗体PSMA×CD28。

(4)在肿瘤患者的治疗中，被动免疫治疗是指被动地将具有抗肿瘤活性的免疫制剂或细胞回输给肿瘤患者机体进行治疗，该治疗方案适用于肿瘤晚期患者，除了单克隆抗体治疗外，还可以从肿瘤患者体内分离免疫活性细胞，在体外增殖和鉴定，再回输至患者体内。从肿瘤患者体内获取的免疫细胞置于适宜环境下培养，培养过程中会出现分裂受阻，其原因主要有________（答出2点）。

【推荐2】阅读下列材料，回答问题。
CRISPR/Cas9基因编辑技术可以按照人们的意愿精准剪切、改变任意靶基因的遗传信息，对该研究有突出贡献的科学家被授予2020年诺贝尔化学奖。我国科学家领衔的团队利用CRISPR/Cas9等技术，将人的亨廷顿舞蹈病致病基因（HTT基因）第1外显子（其中含150个CAG三核苷酸重复序列）“敲入”猪基因组内，获得了人-猪“镶嵌”HTT基因，利用胚胎工程技术成功地构建了亨廷顿舞蹈病的动物模型。
CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理是由一条单链向导RNA引导内切核酸酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA 上的目标位点进行切割（如图）。

(1)下列有关技术或工程，叙述错误的是

A．PCR技术是获得人HTT基因常用的方法，向缓冲溶液中分别加入人HTT基因模板、4种核糖核苷酸及引物、Taq酶等

B．Cas9在功能上属于限制性内切核酸酶

C．为确认实验猪细胞基因组内是否含有人-猪“镶嵌”HTT基因，常用的检测手段包括PCR技术及DNA分子杂交技术

D．成功地构建了亨廷顿舞蹈病的动物模型需要用到细胞工程和胚胎工程

(2)下列关于CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理，相关叙述错误的是（       ）

A．向导RNA可通过转录形成	B．向导RNA中的双链区遵循碱基互补配对原则
C．Cas9蛋白由相应基因指导在核糖体中合成	D．Cas9蛋白通过破坏目标DNA的氢键实现对DNA的切割

【推荐3】自然界中有一种含有叶绿体的原生动物——眼虫，这说明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活。某同学提出问题：“动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？”他尝试设计出如图所示的实验方案。结合实验方案回答问题：

实验原理：根据眼虫的特点，动物细胞和植物细胞之间在理论上是可以实现杂交的。
实验步骤如下：
(1)①中选的植物材料细胞中，必须有的细胞器是_____。
(2)③过程所用的酶是________。
(3)④过程除了用电激之外，还可以用_________等作为诱导因素(答出两种)。
(4)⑤过程中动物细胞体外培养需要满足的条件是无菌无毒的环境、_________。
(5)在整个实验过程中，要强调所用的器械的灭菌和无菌操作，原因是各种杂菌可以在培养 基上面迅速生长，培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和________争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量________导致培养物迅速死亡。

【推荐1】“中中”和“华华”克隆猴的成功培育标志着我国非人灵长类疾病动物模型研究处于国际领先水平。“中中”和“华华”的克隆流程如图1所示，回答下列问题：

(1)图1中的细胞a是_________，从卵巢中采集的细胞a需在体外培养至_________期才能用于体细胞核移植等。
(2)图中取胎猴期而非成年期的体细胞的原因是___________________________。当贴壁细胞在体外培养过程中发生_________现象时，需要对细胞分瓶进行_________培养。
(3)科研人员发现：对灵长类动物供体细胞核进行表观遗传修饰，激活重构胚分化潜能调控基因A的表达，是克隆成功的关键。研究表明染色体组蛋白H₂动态可逆地被修饰酶所改变，从而调控基因A的表达，如图2所示。为了激活基因A的表达，研究人员将组蛋白H₃去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入重构胚，同时用组蛋白脱乙酸酶抑制剂TSA处理重构胚。

据图2分析，给重构胚注入Kdm4d的mRNA来促进基因A表达的机理是________________________，进而促进基因A的表达；TSA可以抑制__________________的活性，_________（填“提高”或“降低”）组蛋白的乙酰化水平，进而促进基因A的表达。

【推荐2】继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：
(1)基因工程的四个基本操作步骤中的核心步骤是_______________。将人的生长激素基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是__________。
(2)针对膀胱生物反应器的转基因动物进行载体构建时，通常要含__________、目的基因、终止子、标记基因、复制原点。标记基因的作用是__________。
(3)通常采用__________技术检测外源基因是否完成了表达。
(4)为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠体细胞的细胞核转入去核的卵母细胞中构成重组细胞形成__________，用物理或化学方法将其激活，使其完成细胞分裂和发育进程。

【推荐3】我国绒山羊所产的羊绒因品质优秀被誉为“软黄金”而畅销全球。胸腺素β4（Tβ4）是动物体内一种分布广泛的多肽，可促进动物毛发生长。研究者利用基因编辑技术将Tβ4基因定点整合到绒山羊基因组中，获得新型绒山羊，部分操作过程如图所示，回答下列问题：

(1)若获取的Tβ4基因含有非编码区和内含子序列，则该基因是从_______文库中获取的，获取后利用PCR技术对其进行扩增时，需要向反应体系中加入四种dNTP、_______（写3种物质）等物质。
(2)扩增后的Tβ4基因与质粒结合构建基因表达载体的过程需要用到的工具酶有______，通过培养整合有Tβ4基因的受体细胞获得Tβ4基因定点整合的单克隆细胞群，该过程需要在_____气体环境中培养，且需要定期更换培养液，其目的是_______________。
(3)图中X为______细胞，获得的重构胚（重组细胞）需要继续培养至_________阶段，再将其移植到受体母羊体内，从而获得T4基因定点整合的羔羊。但该技术的成功率非常低，获得的Tβ4基因定点整合的绒山羊数量较少，若要快速、大量繁育Tβ4基因定点整合的绒山羊，可以使用的现代生物技术有__________________。

【推荐1】将外源DNA与精子在吡啶核苷酸辅酶剂中一起孵育，精子可捕获外源DNA，并通过受精过程将外源DNA导入受精卵，该方法为精子载体法，能大大简化转基因动物的制备过程。如图表示用该方法制备转基因鼠的流程。据图分析，回答下列问题：

(1)从小鼠体内采集到的精子需要进行______处理才能用于体外受精，同时采集到的卵母细胞一般需培养到______期。
(2)过程③中，受精卵在体外培养时，一般要置于含有95%空气和5%CO₂的混合气体的培养箱中培养，其中CO₂的主要作用是_____________，受精卵增殖为早期胚胎的分裂方式是______。
(3)将早期胚胎移植到代孕母鼠体内时，一般______（填“需要”或“不需要”）使用免疫抑制剂处理代孕母鼠，这是由于____________。
(4)实验人员利用精子载体法将外源DNA导入小鼠精子，检测发现，不同小鼠个体精子中外源DNA的阳性率平均为13%左右。进一步实验，让检测为阳性的精子进行受精作用，将受精卵进行体外培养，胚胎中外源DNA表达的阳性率为4.7%。该实验结果说明运用精子载体法制备小鼠疾病模型______（填“具有”或“不具有”）可行性。

【推荐3】研究人员利用小鼠（（2N=40））的单倍体ES细胞（只含一个染色体组），成功培育出转基因小鼠。主要技术流程如下图所示，请回答下列问题：

   

注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种限制酶，箭头指向的位置为限制酶的切割位置；Amp^R是氨苄青霉素抗性基因，Neo^R是G418抗性基因。
(1)通过PCR方法在体外选择性扩增目的基因片段时，PCR反应一般由95℃热变性、55～60℃复性、72℃延伸三个步骤，经过多次循环完成。延伸阶段选用72℃是综合考虑了两个因素，即防止新合成的DNA变性和____。
(2)某次实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带（引物与模板完全配对）外，还有2条非特异条带（引物和模板不完全配对）。为了减少反应中非特异条带的产生，以下措施中有效的是（       ）

A．增加模板DNA的量	B．延长热变性的时间
C．延长延伸的时间	D．提高复性的温度

(3)氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，而一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo的小鼠细胞，结合上图推测，过程①选用的2种限制酶是____和____（选填图中的编号）。
(4)若图中过程①选用的2种限制酶识别序列和切割位点分别是，则经这两种限制酶切割后所产生的黏性末端是_____，此时，图中过程②应选用_____酶。
(5)动物细胞培养和早期胚胎培养时，通常需要在合成培养基的基础上添加____等一些天然成分。据图分析，细胞乙内除线粒体DNA外，还有____个DNA分子。
(6)可通过____技术将桑葚胚移入代孕母鼠子宫内，使其继续发育。从生理学基础看，代孕母鼠对移入子宫的胚胎基本不发生免疫排斥反应，这为____提供了可能。

【推荐1】牛结核病是一种慢性传染病，在世界范围内广泛传播，来自于小鼠的SP110基因能够抑制牛结核分枝杆菌的增殖。下图是培育抗结核病转基因克隆牛的流程图。请据图回答：

(1)培育过程中涉及到的细胞工程技术有_________________、_____________。
(2)重组质粒由目的基因、__________、_________、标记基因等组成，过程I最常用的方法是_______________。
(3)过程Ⅱ的胚胎培养液中除无机盐、有机盐和营养成分外，还需要添加_________等天然成分。
(4)过程Ⅲ表示诱导成纤维细胞与处于____________期的去核卵母细胞融合。重组胚胎通过_________技术移入受体母牛子宫内，暂时不移入的可使用__________方法保存。
(5)若要提高重组胚胎的利用率，可对__________ 期的胚胎进行分割。

【推荐2】阅读下面资料，回答问题。
饲料原料中的磷元素有相当一部分存在于植酸中、猪、鸡等动物由于缺乏有关酶，无法有效利用植酸，造成磷源浪费，而且植酸随粪便排出后易造成环境有机磷污染。植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸，因此成为目前重要的饲料添加剂之一。
(1)饲料加工过程温度较高，要求植酸酶具有较好的高温稳定性。利用蛋白质工程技术对其进行改造时，首先必须了解植酸酶的______，然后改变植酸酶的______，从而得到新的植酸酶。
(2)培育转植酸酶基因的大豆，可提高其作为饲料原料时磷的利用率。将植酸酶基因导入大豆细胞常用的方法是______。
(3)为了提高猪对饲料中磷的利用率，科学家将带有植酸酶基因的重组质粒通过______法转入猪的受精卵中、该受精卵培养至一定时期后可通过______法，从而一次得到多个转基因猪个体。

【推荐3】Ⅰ．我国全面开放三孩政策已正式实施。一些高龄产妇希望通过试管婴儿技术圆三孩梦。请回答以下相关问题：
(1)由于女性的自然周期产生的卵子太少，在取卵前通常需要注射__________。在体外受精前，医生借助超声波探测仪等工具用吸卵针从某女士卵巢中吸取卵母细胞；随后将取出的卵母细胞置于与____________中相似的环境，让它进一步发育成熟。受精过程中为防止多精入卵，卵母细胞依次发生的生理反应是___________。
(2)若想生出同卵双胞胎，可以利用胚胎分割技术，该技术属于___________生殖。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将__________，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
Ⅱ．科幻小说中有一段这样的描述：富商甲将自己的体细胞注入到一枚去核的卵母细胞中，然后将它在体外发育成的胚胎移植到母体子宫中，最后得到了一个健康的男婴，这个男的婴就是甲商人的克隆人。富商乙将自己的基因进行特定的编辑，借助试管婴儿技术获得下一代。结合上述信息，分析回答下列问题：
(3)富商甲获得的克隆人与其性状并不一致，从遗传物质的角度分析其原因是__________。
(4)核移植技术和体外受精获得的胚胎都必须移植给受体后才能获得后代。在胚胎工程中，该技术的优势是___________。
(5)与“试管婴儿”相比，“设计试管婴儿”在胚胎移植入母体前，进行__________后再将胚胎移植入母体。