【推荐1】丙肝病毒(HCV)是一种RNA病毒，对HCV感染的诊断步骤是：首先进行抗HCV抗体检测，若检测结果呈阳性，则还需要进行HCV核酸检测。HCV融合抗原可用于制作第三代HCV抗体检测试剂。回答下列问题：
(1)获得HCV表面抗原基因后，常利用________________技术进行扩增，前提是____________,以便合成引物。为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需要在引物的____________(填“3^’”或“5^′”)端加上限制酶切割位点。
(2)将得到的HCV的多个抗原基因首尾相连，在同一启动子、终止子等的调控之下，构成融合基因，进而构建融合抗原重组质粒。构建融合抗原重组质粒的过程中，需要用到____________酶。启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动________________。
(3)进行HCV核酸检测时，需要用到一对HCV特异性引物和一种HCV特异性荧光探针，需要的酶有____________和耐热DNA聚合酶，需要的原料是________________;检测过程是先将RNA合成cDNA.再通过PCR技术扩增DNA.实时监测扩增全过程，从而检测出HCVRNA。
(4)某人体内HCV抗体检测结果呈阳性，但进行HCV核酸检测时结果呈阴性，原因是________________

【推荐2】回答下列有关基因工程的问题

细菌、真菌等微生物产生的β-葡萄糖苷酶是一种耐热纤维素酶，可分解自然界中的纤维素获得能源。现可通过基因工程将β-葡萄糖苷酶基因（bglB基因）与图28的质粒重组并导入大肠杆菌获得大量有活性的β-葡萄糖苷酶。（质粒中ori为质粒复制所必需的DNA序列，启动子是使转录开始的一段DNA序列，终止子是提供转录终止信号的DNA序列，抗生素抗性基因为标记基因，其余为不同限制酶的酶切位点，切割形成的黏性末端均不相同）
（1）．从高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉品种中提取到相应的RNA，进而获得bglB基因的DNA序列，这种获取目的基因的方法是____________________。
（2）．为避免自身环化并确保bglB基因与图一质粒准确重组，可选用的限制酶是(     )
A   NdeI和XbaI          B   NdeI和BamHI          C   XbaI       D   PstI       E   BamHI
（3）．bglB基因通过_________酶与质粒结合形成重组质粒。
（4）．图二培养基中含有刚果红和纤维素，可用于筛选纤维素酶产量高的重组菌，原理如图三。据此分析，图二中的[_____]菌落即为纤维素酶产量最高的菌株。

（5）．在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高基因的突变率。与用诱变剂直接处理微生物相比，上述育种技术获得热稳定性高的bglB基因的效率更高，其原因是在PCR过程中(     )

A．仅针对bglB基因进行诱变

B．bglB基因产生了定向突变

C．bglB基因可快速累积突变

D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变

【推荐3】图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，且限制酶的切点是唯一的，外源DNA插入会导致相应的基因失活，请回答下列问题。

（1）基因工程中最常用的载体是_______，而作为基因表达载体，除图1所示结构外，还需具有___________________________。
（2）根据图中所给信息，构建基因表达载体时，应选用的限制酶是__________________。若将基因表达载体导入大肠杆菌，一般用____________处理，使其处于_____________，以利于吸收周围环境中的DNA分子。
（3）为了筛选含目的基因的大肠杆菌，应在培养基中添加______________，培养一段时间后，平板上长出的菌落，用PCR技术鉴定时，所用的引物组成为图2中_____________。

【推荐1】下图表示应用现代生物技术制备H7N9病毒单克隆抗体的流程，请回答下列问题：

(1)①过程表示________，
(2)构建基因表达载体时，目的基因的首端必须含有________，目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是________。
(3)从分子水平上鉴定目的基因是否转录可采用________技术，对于转基因成功的细胞Ⅱ还要进行克隆化培养和________检测，经多次筛选获得足够数量的该类细胞。
(4)细胞Ⅱ的特点是________。
(5)若要预防H7N9禽流感，可用图中的________作为疫苗。
(6)与基因工程相比，蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因或基因合成，对现有蛋白质进行_________，制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产生活需要。

【推荐2】结合下图，回答有关植物转基因和克隆的问题：

（1）Ti质粒携带的目的基因是位于Ti质粒的__________中。愈伤组织细胞是具有__________能力的薄壁细胞。
（2）基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤，第三步是将目的基因导入受体细胞，图中属于该步的编号是__________，导入方法是__________。
（3）如果目的基因序列已知，常用PCR扩增技术来获取目的基因，该技术中，引物序列的设计是关键。设计引物时，需要避免引物之间发生__________而造成引物失效。为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，常在两条引物上设计加入不同的限制酶识别位点，主要目的是__________。
（4）__________技术常用于植物克隆，图中属于该过程的编号是__________。

【推荐3】重组人胰岛素是世界上第一个基因工程药物，它的使用造福了亿万糖尿病患者。兴趣小组探究工程菌的构建，实验所用质粒载体如下图所示，其中LacZ基因的表达产物能将无色反应物X-gal水解，从而使菌落呈蓝色，否则菌落呈现白色；Am基因的表达产物分泌到细胞外发挥作用。本实验所用的受体大肠杆菌无LacZ 基因。

(1)将表达载体转入大肠杆菌细胞最常用的转化方法是：一般先用_____处理细胞，使细胞处于_____的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。
(2)双重筛选培养基：培养基中加入_____用以筛选出导入了质粒载体的受体菌（转化子），培养基中加入_____用以鉴别出含重组质粒的受体菌（重组子）。重组子的菌落颜色是_____5，原因是_____（答出1点即可）。
(3)某些重组子不能合成胰岛素，可能的原因是_____（答出1点即可）。
(4)长时间培养后，培养基中转化子形成的菌落周围出现了一些非转化子形成的较小菌落，这些非转化子菌落形成的原因是_____。

【推荐1】绿色荧光蛋白（GFP）能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答下列问题：

（1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成黏性末端的过程。_____________________
②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来___________________________________，理由是___________________。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是___________________。
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是______________________。
（4）科学家们已通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：___________（用序号表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）
④表达出蓝色荧光蛋白

【推荐2】科学家将从链霉菌中分离出来的抗除草剂Bar基因成功导入水稻细胞内，获得了抗除草剂转基因水稻，流程如图所示，回答下列问题：

（1）基因工程的操作中，可以通过PCR技术扩增目的基因，也可以通过________的途径获取目的基因。过程①构建重组质粒时需要使用限制酶，该酶的特点是________。
（2）据图分析，要先将Bar基因插入农杆菌Ti质粒的________中，再用该农杆菌感染水稻细胞，通过DNA重组将目的基因插入水稻细胞的________上。
（3）图中过程是用农杆菌转化法将Bar基因导入水稻细胞的，转化是指________。为了检测Bar基因是否转录出mRNA，常用________技术。
（4）过程④表示水稻细胞经过________获得水稻幼苗的过程，该过程必须经历的两个阶段是________。

【推荐3】回答下列（一）、（二）小题：
（一）分离以尿素为氮源的微生物时，同学们各自将取来的菌液稀释至10^-5倍后在培养皿中进行培养，A同学培养皿中得到约150个菌落，其他同学的培养皿中得到大约50个菌落，各位同学实验后均剩余少量空白平板。请回答：
(1)微生物实验中各种实验器皿高压蒸汽灭菌后，通常需要将其放入________℃的烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分。实验操作前，应将需要使用的器皿从烘箱中取出，放到超净台上，打开紫外灯和________，灭菌30min。
(2)同学们在此实验中使用的微生物分离方法称为______________，该分离方法通常以每个培养皿中有__________个以内的菌落最为合适。在培养基中加入酚红可以对此实验中分离的微生物进行鉴定，原因是______________。
(3)同学们对实验结果进行分析后认为，导致A同学实验结果的可能原因是培养基配制时没有用___________替换琼脂，或者是培养基配制时被杂菌污染了。证明A同学的培养基是否被杂菌污染的方法是___________。
（二）回答下列与现代生物技术有关的问题：
(4)某农户建立了小型的“蔬菜-鸡、猪-沼气”人工生态系统。此系统可称为___________生态工程，属于小型农业生态工程，在分析该生态系统的经济效益时，除了考虑系统内部的投入与产出、系统的实际消费外，还需考虑系统的有效贡献，也就是系统____________。
(5)利用一定的技术可以将两个或多个细胞融合成一个细胞，上世纪80年代发明的____________技术，是效率很高的新型细胞融合技术。基因型不同的细胞间的融合就是细胞杂交，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定蛋白质减少的对应关系可以进行____________。
(6)用噬菌体抗体库技术可获得人单克隆抗体，该技术的原理是将人抗体基因插入噬菌体载体，让重组噬菌体侵染大肠杆菌并合成抗体。获取人抗体基因时，可从人的____________细胞中获取RNA，再通过逆转录获得抗体基因。由于噬菌体能自主吸附并将DNA分子注入大肠杆菌，理论上可以不使用____________处理大肠杆菌。为保证合成的抗体以分泌蛋白的形式分泌出大肠杆菌，抗体基因与噬菌体基因间需设计一个____________密码子的对应序列，否则，抗体可能和病毒蛋白以融合蛋白的形式附着在噬菌体表面。

【推荐1】新型冠状病毒可通过表面的棘突蛋白（S蛋白）与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人体，引起肺炎。单克隆抗体可阻断病毒的粘附或入侵，抗体药物的研发已成为治疗新冠肺炎的研究热点。右图为筛选、制备抗S蛋白单克隆抗体的示意图。请回答下列问题。

(1)研制抗S蛋白单克隆抗体，需先注射______对小鼠进行免疫以便在小鼠的脾脏中获得相应______，并诱导其与______融合。
(2)经HAT培养基筛选得到的细胞为______细胞，该细胞不能经克隆化培养后直接用于单克隆抗体的生产，原因是____________________。
(3)体外培养细胞时首先应保证其处于______的环境，其次还要有适宜的温度、pH、营养和气体环境。这里的气体环境指_______________________。
(4)单克隆抗体可用于诊断人体是否携带新冠病毒，其诊断原理是________________。

【推荐2】中国科学院微生物研究所高福团队在国际上率先从分子水平解析出埃博拉病毒表面激活态糖蛋白GPcl与其宿主的内吞体内受体NPCl的复合物三维结构。科学家利用小鼠制备出了抗GPcl的单克隆抗体，为有效应对埃博拉病毒病疫情提供了重要的理论基础。回答下列问题：
（1）埃博拉病毒是通过__________方式进入宿主细胞的，之所以能进入宿主细胞与埃博拉病毒表面_______有关。
（2）制备抗GPcl的单克隆抗体是将__________注射到小鼠体内，再从免疫的小鼠脾脏中获得相应的______细胞，将其与骨髓瘤细胞进行融合，然后筛选出_________的杂交瘤细胞，并通过体内或体外培养生产抗CPcl的单克隆抗体。与传统从血清提取的抗体相比，单克隆抗体的优点是_________。
（3）在体外培养杂交瘤细胞时，培养液中通常加入___________等天然成分，将其置于95%空气加5%C0₂的气体环境中，CO₂的作用是______________。

【推荐3】“滔滔”是我国第一例转入人体白蛋白基因的转基因试管牛，人们利用该转基因奶牛的乳汁生产人类血清白蛋白。
（1）试管动物实际上是体外受精与胚胎移植两项技术的综合运用。体外受精前需要对奶牛的精子进行_________处理。防止多精入卵的生理反应包括________________和 ____________________。胚胎工程的终端环节是胚胎移植，移植后的胚胎能在受体子宫内存活的生理基础是不发生______________________________。
（2）人体白蛋白基因通常可以从基因文库中获取，含有一种生物所有基因的文库称为____________，获得人体白蛋白基因后可以利用________技术进行扩增。人体白蛋白基因一般利用____________技术导入牛的受精卵中，当受精卵分裂到囊胚期时，需要取囊胚的____________细胞进行性别鉴定，以确保发育成熟的牛能分泌乳汁。
（3）基因工程技术还可以让动物细胞生产人源抗体，通常可将从动物体内提取的B细胞的抗体分子基因敲除，导入人的抗体分子基因，然后将该细胞与_________细胞融合，再用特定的_______________进行筛选得到杂交瘤细胞，再通过克隆化培养和_______________等过程获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞，再在培养液或小鼠腹腔进行培养，从而获得所需抗体。