【推荐1】与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖含量高，汁多质脆，富含多种维生素，更富有生产应用价值。科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白的转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示，P蛋白在玉米株系的表达量如图2所示。回答下列问题：

   

(1)在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示。图1中强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被_______________酶识别并结合，驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用图1所示的_________________酶组合，将含P基因的DNA片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。
(2)将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中应加入____________以筛选出成功导入T-DNA的玉米愈伤组织。筛选出的愈伤组织经过______________过程可形成丛芽，最终获得多个玉米株系。现对a₁、a₂、a₃、a₄四个甜玉米株系的蛋白质表达量进行测定，结果如图2。其中a₄株系P蛋白表达量较低的原因可能是_________。
(3)研究人员发现了一种RNA剪接抑制剂，该抑制剂会使玉米相关基因的表达受阻。针对该抑制剂的具体作用，科研人员提出以下假说：
假说1：该抑制剂导致RNA前体上内含子1的对应序列不能被剪。
假说2：该抑制剂导致RNA前体上内含子1和外显子2的对应序列同时被剪切。

   

为了验证上述假说，需分别从实验组和对照组胚细胞中提取RNA，经过_____________过程形成cDNA，然后对cDNA进行PCR后，再分析电泳后的条带。若要证明假说2成立，需要选择图3中所示的引物________________（填数字）进行PCR。

【推荐2】请根据资料回答问题：
资料1：人体器官移植最大的难题是免疫排斥。猪细胞表面有一些人体没有的抗原，如α-l,3半乳糖苷转移酶就是其中的一种，因此人体会对移植的猪器官产生免疫排斥反应。
资料2：可利用基因打靶技术对猪细胞α-l,3半乳糖苷转移酶基因进行改造，去除α-l,3半乳糖苷转移酶引起的免疫排斥，主要过程如下：

第一步：从猪囊胚中分离出胚胎干细胞（野生ES）。需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步：在含有一段与靶基因同源的序列上，插入新霉素抗性基因（neo）完成打靶载体的构建。
第三步：打靶载体导入胚胎干细胞，与含有同源序列的DNA分子重新组合，发生置换，形成突变ES细胞基因。
第四步：突变ES细胞筛选、增殖。
（1）除了经济易获取因素外，请写出科学家选择猪器官作为人体器官移植供体的生物学依据（写出其中一条即可）_______________。
（2）资料2基因改造过程中，“靶基因”是______________，打靶载体的构建过程相当于基因工程基本操作步骤中的_____________。插入新霉素抗性基因后，“靶基因”不能表达的原因是___________，插入的新霉素抗性基因作为标记基因起到_______作用。
（3）利用克隆技术，使突变ES细胞增殖、分化，培育出不合成α—1，3半乳糖苷转移酶的猪器官，该过程体现了胚胎干细胞在功能上具有_____________。但得到的器官还不能直接移植入人体，原因是______________________________。
（4）基因打靶技术给人体移植器官短缺难题的解决带来了可能。据图可知，该项技术能精准定位进行基因改造是由于_____________________________。

【推荐3】下图1是限制酶BamHI与BglII的识别序列及切割位点示意图，图2表示质粒pZHZ11（总长为3．8kb，1kb=1000对碱基）的结构，其中，Ap^r为链霉素抗性基因，lacZ基因编码β–半乳糖苷酶，该酶催化生成的化合物能将白色的大肠杆菌染成蓝色。请分析回答问题：

（1）图1表明，酶的作用具有_______性，利用图2构建成基因表达载体，还必须加入的组成元件是________。
（2）若先用限制酶BamHI切开pZHZ11，然后灭活BamHI酶，再加________酶进行连接，最后将连接物导入足够数量的大肠杆菌细胞中，则可使细胞呈蓝色的质粒的最短长度是________。
（3）若将两端分别用限制酶BamHI和BglII切开的单个目的基因片段置换pZHZ11中0．5kb的BamHI酶切片段，形成4．9kb的重组质粒，则目的基因长度为_______kb。
（4）上述4．9kb的重组质粒有两种形式，若用BamHI和EcoRI联合酶切其中一种，只能获得1．6kb和3．3kb两种DNA片段；那么联合酶切同等长度的另一种重组质粒，则可获得________kb和_______kb两种DNA片段。
（5）若pZHZ11上基因表达时的碱基序列方向是逆时针的，为使目的基因定向插入，并获得在含链霉素的培养基上存活且显白色的大肠杆菌，则切割目的基因编码区下游的限制酶应为________（从题图涉及的限制酶中选择）。

【推荐1】PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列（简称phb2基因），利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题：
(1)与生物体内的DNA聚合酶相比，PCR技术中所用的DNA聚合酶具有的特点是______。
(2)如图为所用载体图谱示意图，质粒DNA含有启动子，构成启动子的基本单位是___________。质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能______。

	名称	识别序列及切割位点	名称	识别序列及切割位点
	HindⅢ	A↓AGCTT	EcoRⅠ	G↓AATTC
	PvitⅡ	CAG↓CTG	PstⅠ	CTGC↓AG
	KpnⅠ	G↓GTACC	BamHⅠ	G↓GATCC
	注：箭头表示切割位点

(3)构建基因表达载体需要用到限制酶和DNA连接酶，其中，DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是______。图中限制酶的识别序列及切割位点见表中，为使phb2基因（该基因序列不含图中限制酶的识别序列）与载体正确连接，在扩增的phb2基因两端分别引入______和______两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时，可选用______（填“E．coli DNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
(4)转化前需用______处理大肠杆菌细胞，使其处于______，以提高转化效率。将转化后的大肠杆菌接种在含______的培养基上进行培养。

【推荐2】下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

（1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割后，含有_________个游离的磷酸基团。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_____________________。
（2）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于________________________________________________。
（3）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在_______________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
（4）下列有关限制酶的叙述正确的是__________________。
A．从反应类型来看，限制酶催化的是一种水解反应
B．限制酶的活性受温度、pH的影响
C．一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列
D．限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小
若用限制酶A、B单独或联合切割一个5000bp（bp为碱基对）大小的线状DNA分子，相关实验及数据如下表。

	第一步水解	产物（bp）	第二步水解	产物（bp）
实验1	A酶切割	2100	将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	200、1900
		1400		600、800
		1000		1000
		500		500
实验2	B酶切割	2500	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	1900、600
		1300		800、500
		1200		1000、200
实验3	A酶、B酶同时切割	1900、1000、800、600、500、200

（5）由单酶剪切的片段数可知，A酶和B酶的酶切位点分别为_______个和_______个。
（6）综合实验数据的分析，在下图中绘制出实验3的酶切图谱。
_______________
（每小格代表100bp）

【推荐3】口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种偶蹄动物传染病，目前常用接种弱毒疫苗的方法预防。疫苗的主要成分是该病毒的一种结构蛋白VP1。科学家尝试利用转基因番茄来生产口蹄疫疫苗，过程如下图所示。请据图回答。

（1）口蹄疫病毒的VP1蛋白进入动物体内，能引起机体产生特异性免疫反应。VP1蛋白在免疫中称为_______________。
（2）口蹄疫病毒的遗传物质为RNA，要获得VP1基因可用_________________的方法合成DNA，再用限制性内切酶将VP1基因片段切下。
（3）如图所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从合成的DNA上切下       VP1目的基因，并将之取代质粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000对碱基)上相应的E—F区域 (0.2kb)，那么所形成的重组质粒pZHZ2___________。

A．既能被E也能被F切开             
B．能被E但不能被F切开
C．既不能被E也不能被F切开     
D．能被F但不能被E切开
（4）若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样品，据表4所列酶切结果判断VP1目的基因的大小为________kb

G	H
1.6kb	1.2kb
3.1kb	3.5 kb